本发明属于药物制备，具体涉及一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途。
背景技术：
1、骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织微结构破坏、骨脆性增加和易于骨折为特征的全身性骨骼疾病。随着人口老龄化的加剧，骨质疏松症已成为全球性的公共卫生问题。目前，骨质疏松症的治疗药物主要包括骨吸收抑制剂和骨形成促进剂两大类。阿巴帕肽作为骨形成促进剂的代表药物之一，它是一种甲状旁腺激素相关蛋白(pthrp)类似物，通过选择性激活甲状旁腺素1型受体(pth1r)，调节骨代谢，促进骨骼形成，从而增加骨密度和骨强度，降低骨折风险。阿巴帕肽主要用于治疗绝经后妇女的骨质疏松症，尤其是那些对其他治疗无效或有高骨折风险的患者。阿巴帕肽的临床研究显示，它能够显著提高腰椎、髋部和股骨颈的骨密度，并且降低椎体和非椎体骨折的风险。
2、阿巴帕肽(abaloparatide)是一种由34个氨基酸残基组成的多肽，多肽药物具有生物活性高、低毒、低免疫原性、高组织渗透性和易于合成等优点，具有极为广泛的应用前景。然而，大多数多肽的相对分子质量较小，易被血液和肾脏快速清除，同时易被人和动物体内的多种蛋白酶和肽酶降解，因此大多数多肽类药物的体内半衰期较短，这严重限制了该类药物在临床上的应用。目前，阿巴帕肽的半衰期较短，通常为1.3小时，药代动力学研究表明，在体内的降解速度较快，这影响了其长期疗效。因此，积极寻找提升阿巴帕肽(abaloparatide)半衰期的方法并应用在骨质疏松症治疗中，可以用来减少阿巴帕肽给药频率，提高患者的生活质量。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途，用于解决现有技术中阿巴帕肽半衰期短的技术问题。
2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
3、一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述方法包括以下步骤：
4、(1)偶联：将肝素活化后，得到活化肝素溶液，再将高纯度的阿巴帕肽溶液和活化肝素溶液进行偶联，纯化后得到阿巴帕肽偶联物溶液；
5、(2)封装：将阿巴帕肽偶联物溶液封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
6、(3)装载：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。
7、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法步骤(1)偶联中，操作步骤如下：
8、q1、活化肝素：取高纯度肝素粉末用生理盐水进行溶解，配制成肝素溶液，取肝素活化剂用生理盐水进行溶解配置成肝素活化剂溶液，将肝素溶液与肝素活化剂溶液混合后，逐滴加入稀盐酸溶液调节ph，反应结束后，加入乙二醇溶液终止反应，再经透析纯化后得到活化肝素溶液。
9、q2、偶联反应：取高纯度阿巴帕肽粉末用生理盐水进行溶解，配制成阿巴帕肽溶液，将阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液混合，加入偶联剂溶液进行偶联，用碳酸氢钠调节ph，偶联30～60min后，得到阿巴帕肽偶联反应物，再使用分子筛层析纯化阿巴帕肽偶联反应物，得到阿巴帕肽偶联物，将阿巴帕肽偶联物溶解在生理盐水中，得到阿巴帕肽偶联物溶液，备用。
10、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述q1肝素为低分子量肝素，肝素溶液浓度为1～5mg/ml，肝素活化剂为高碘酸钠，肝素活化剂溶液浓度为1.2～7.5mg/ml，肝素活化剂溶液与肝素溶液的体积比为1.2～1.5倍，调节溶液ph至4.5～5.0，反应温度20-25℃，反应时间1～2h，乙二醇溶液浓度为6～8％，加入乙二醇溶液与肝素活化剂溶液的体积比为1：1，透析袋的截留分子量为5000da，透析液为ph＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h；所述q2阿巴帕肽溶液的浓度为0.2～5mg/ml，阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液的体积比为1：1～5，偶联剂溶液为0.5～0.7mg/ml的氰基硼氢化钠，偶联剂溶液与阿巴帕肽溶液的体积比为1：1～3，分子筛层析选用sephadex g-50。
11、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法步骤(2)封装中，操作步骤如下：
12、s1、脂质材料预处理：将磷脂和胆固醇按照比例混合均匀后加入乙醇溶液溶解，使用磁力搅拌器轻柔搅拌，溶解均匀后得到脂质溶液；
13、s2、脂质薄膜的形成：使用旋转蒸发仪在减压条件下蒸发脂质溶液中的溶剂，蒸发结束后，在旋转蒸发仪容器内壁上形成均匀的脂质薄膜，取出即可得到脂质薄膜；
14、s3、包封：将阿巴帕肽偶联物溶液缓慢加入脂质薄膜中，同时进行超声处理，得到阿巴帕肽偶联封装反应物；
15、s4、纯化：将阿巴帕肽偶联封装反应物经透析纯化后得到阿巴帕肽偶联封装物，将其重悬于pbs中得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
16、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述s1胆固醇与磷脂的比例为1：3～9，乙醇溶液浓度为80～90％，温度为20～25℃；所述s2旋转蒸发仪的旋转速度为20～50rpm，减压抽真空至20～50mmhg，温度为30～34℃，蒸发时间为6～16h；所述s3将阿巴帕肽偶联物溶液使用注射器或滴管滴加到脂质薄膜上，超声的频率为20～100khz，温度为4～20℃；所述s4透析袋的截留分子量为8000da，透析液为ph＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h。
17、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法步骤(3)装载中，操作步骤如下：
18、m1、纳米颗粒制备：将纳米颗粒溶解在丙酮中，通过搅拌使其完全溶解，形成均匀的纳米颗粒溶液；将纳米颗粒溶液缓慢滴加到吐温20的水相中，同时用磁力搅拌器进行高速搅拌，得到纳米颗粒乳化液，将纳米颗粒乳化液置于通风橱中挥发，结束后用生理盐水洗涤，并用生理盐水重悬，得到纳米颗粒重悬液；
19、m2、混合：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒重悬液混合，并进行超声处理，得到阿巴帕肽纳米装载反应物；
20、m3、纯化阿巴帕肽纳米装载反应物：将阿巴帕肽纳米装载反应物透析纯化后得到阿巴帕肽纳米装载物。
21、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述m1纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，纳米颗粒溶液浓度为5～15mg/ml，吐温20在水相的终浓度为0.1～5％，磁力搅拌器的转速为500～2000rpm，用生理盐水洗涤6～10次；所述m2纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒溶液的体积比为1：10～15，控制混合温度为25～40℃，超声频率为20～50khz，时间为30～120min；所述m3透析袋的截留分子量为12000da，透析液为ph＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为16～28h。
22、进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法在治疗骨质疏松症中的用途。
23、综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
24、1、本发明通过将阿巴帕肽与活化肝素偶联，肝素能够与阿巴帕肽形成稳定的复合物，减缓其代谢和排泄，又将偶联后的阿巴帕肽封装在脂质薄膜中，这不仅提供了一个保护层，还能减少药物在体内的降解，进一步用纳米颗粒进行装载，增强了药物的稳定性和释放控制，使药物能够缓慢释放，增加其在体内的滞留时间。通过这些步骤，阿巴帕肽的体内半衰期得以显著延长，从而增强了其治疗效果，并减少了药物使用的频率。
25、2、本发明将肝素通过活化处理后，能够与阿巴帕肽形成共价键，这种偶联反应使得阿巴帕肽的结构更为稳定，减少了其在体内的降解速率，活化肝素能够与阿巴帕肽分子上的氨基形成稳定的偶联物，这种偶联物更不易被体内的酶降解，并且能够减缓其从体内的排泄；此外，偶联后的阿巴帕肽与血浆蛋白结合更为紧密，增加了其在体内的循环时间，从而减缓了阿巴帕肽的生物降解速度，有效延长阿巴帕肽的半衰期。
26、3、本发明将磷脂和胆固醇形成脂质体，能够有效包裹药物分子，脂质膜的双层结构可以隔离药物与体内环境的直接接触，从而减缓其降解和排泄；脂质体的表面特性和脂质成分可以与药物形成良好的相容性，进一步提高药物的稳定性；脂质体封装不仅提供了一种有效的药物递送系统，可以保护药物免受体内酶的降解，并控制药物释放速率，而且脂质体能够减少药物的快速排泄和非特异性分布，提高药物的生物利用度。
27、4、本发明使用乳酸-羟基乙酸共聚物制备的纳米颗粒能够有效地包裹阿巴帕肽偶联封装物，并通过超声处理确保其均匀分散，纳米颗粒具有极高的比表面积，能够提供更多的药物结合位点，使药物分子在纳米颗粒表面形成稳定的复合物，这些纳米颗粒可以通过体内的自然滤过机制缓慢释放药物，从而延长药物的体内半衰期；此外，纳米颗粒的缓释特性和生物相容性进一步提高了阿巴帕肽的半衰期，并优化了其治疗效果。
1.一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，步骤(1)中，操作步骤如下：
3.根据权利要求2所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述q1肝素为低分子量肝素，肝素溶液浓度为1～5mg/ml，肝素活化剂为高碘酸钠，肝素活化剂溶液浓度为1.2～7.5mg/ml，肝素活化剂溶液与肝素溶液的体积比为1.2～1.5倍，调节溶液ph至4.5～5.0，反应温度20-25℃，反应时间1～2h，乙二醇溶液浓度为6～8％，加入乙二醇溶液与肝素活化剂溶液的体积比为1：1，透析袋的截留分子量为5000da，透析液为ph＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h。
4.根据权利要求2所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述q2阿巴帕肽溶液的浓度为0.2～5mg/ml，阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液的体积比为1：1～5，偶联剂溶液为0.5～0.7mg/ml的氰基硼氢化钠，偶联剂溶液与阿巴帕肽溶液的体积比为1：1～3，分子筛层析选用sephadex g-50。
5.根据权利要求1所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，步骤(2)中，操作步骤如下：
6.根据权利要求5所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述s1胆固醇与磷脂的比例为1：3～9，乙醇溶液浓度为80～90％，温度为20～25℃；所述s2旋转蒸发仪的旋转速度为20～50rpm，减压抽真空至20～50mmhg，温度为30～34℃，蒸发时间为6～16h；所述s3将阿巴帕肽偶联物溶液使用注射器或滴管滴加到脂质薄膜上，超声的频率为20～100khz，温度为4～20℃；所述s4透析袋的截留分子量为8000da，透析液为ph＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h。
7.根据权利要求1所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，步骤(3)中，操作步骤如下：
8.根据权利要求7所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述m1纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，纳米颗粒溶液浓度为5～15mg/ml，吐温20在水相的终浓度为0.1～5％，磁力搅拌器的转速为500～2000rpm，用生理盐水洗涤6～10次；所述m2纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒溶液的体积比为1：10～15，控制混合温度为25～40℃，超声频率为20～50khz，时间为30～120min；所述m3透析袋的截留分子量为12000da，透析液为ph＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为16～28h。
9.根据权利要求1～8任一项所述的提升阿巴帕肽半衰期的方法在治疗骨质疏松症中的用途。
