本发明涉及药品纯化，具体涉及一种司美格鲁肽的纯化工艺。
背景技术：
1、司美格鲁肽semaglutide是诺和诺德研发的一种长效glp-1(胰高血糖素样肽-1)受体激动药，半衰期约1周，在降糖和减肥领域均具有较好的效果。司美格鲁肽于2019年9月获美国fda(美国食品药物管理局)批准上市，给多肽类药物带来了重大影响。胰岛素注射剂在积极开发口服制剂，同样多肽口服制剂也是市场的必然趋势。
2、司美格鲁肽是每周一次皮下注射给药的多肽类药物，从结构上看，司美格鲁肽是glp-1(7-37)链上8位的aib(2-氨基异丁酸)取代了ala(丙氨酸)，34位的arg(精氨酸)取代了lys(赖氨酸)，26位的lys接上十八烷酸脂肪链。与利拉鲁肽相比，司美格鲁肽的脂肪链更长，疏水性增加，但司美格鲁肽经过短链的peg(聚乙二醇)修饰，亲水性大大增强。现有技术中公开了较多的关于多肽纯化的工艺，比如，中国专利cn109438569a中公开了一种利拉鲁肽的分离提纯方法，中国专利cn109503705a中公开了一种利拉鲁肽的分离纯化方法，如果采用上述专利中的方法对司美格鲁肽进行分离纯化，由于多肽的序列存在差异，会导致最终制备得到的司美格鲁肽的纯度低、收率低。现有技术中也公开了司美格鲁肽的纯化方法，比如，中国专利cn117603338a公开了一种司美格鲁肽的纯化方法，该专利通过两步反相高效液相色谱法进行纯化，(1)第一步纯化：以含乙酸盐和离子配对剂的酸性缓冲液和有机溶剂为流动相，以反相填料为固定相；(2)第二步纯化：以含磷酸盐的碱性缓冲液和有机溶剂为流动相，以反相填料为固定相。采用该专利中的方法所得到的司美格鲁肽的收率还较低。
技术实现思路
1、本发明提供了一种司美格鲁肽的纯化工艺，采用该纯化工艺，不仅提高了司美格鲁肽的收率，还提高了纯度。
2、为实现上述技术目的，本发明提供了一种司美格鲁肽的纯化工艺，包括以下步骤：
3、s1、以乙酸铵溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法按照下述洗脱梯度对含司美格鲁肽的溶液进行第一次纯化，收集纯化后的洗脱液；
4、 时间/min 流动相a的体积百分数/％ 流动相b的体积百分数/％ 0～3 80 20 3～3.01 80→75 20→25 3.01～43 75→45 25→55 43～63 45→30 55→70
5、s2、以三氟乙酸溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法按照下述洗脱梯度对s1步骤得到的洗脱液进行第二次纯化，收集纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液；
6、 时间/min 流动相a的体积百分数/％ 流动相b的体积百分数/％ 0～3 80 20 3～3.01 80→65 20→35 3.01～43 65→45 35→55 43～63 45→30 55→70
7、。
8、进一步地，s1步骤中，所述乙酸铵溶液中乙酸铵的质量百分比为0.1-1.5％；和/或，所述乙酸铵溶液中的溶剂为水。
9、进一步地，s1步骤中，所述含司美格鲁肽的溶液中的溶剂选自乙腈、甲醇、甲酸、水中的一种或多种；和/或，所述含司美格鲁肽的溶液的浓度为10-14mg/ml。
10、进一步地，s1步骤或s2步骤中，色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，规格为50×250mm，10μm；和/或，流速为40-60ml/min；和/或，柱温为24-26℃。
11、进一步地，s2步骤中，所述三氟乙酸溶液中三氟乙酸的体积百分比为0.08-0.18％；和/或，所述三氟乙酸溶液中的溶剂为水。
12、进一步地，所述司美格鲁肽的纯化工艺还包括对第二次纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液中的司美格鲁肽进行转盐和干燥的步骤。
13、进一步地，所述转盐的步骤包括，以醋酸水溶液为流动相a1，以乙酸铵水溶液为流动相a2，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法按照下述洗脱梯度对第二次纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液中的司美格鲁肽进行转盐并收集转盐后的洗脱液；
14、
15、进一步地，转盐的步骤中采用的色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，规格为50×250mm，10μm；和/或，流速为40-60ml/min；和/或，柱温为24-26℃。
16、进一步地，所述醋酸水溶液中醋酸的体积百分比为0.15-0.25％；和/或，所述乙酸铵水溶液的浓度为9.8-10.2mm。
17、进一步地，所述干燥的温度为-20℃～-18℃，时间为45-50h。
18、用于描述glp-1类似物的体系；其中，[arg34]glp-1(9-37)表明，天然存在的34位的赖氨酸被精氨酸取代的glp-1(9-37)类似物。
19、本发明的技术方案具有以下有益效果：
20、(1)本发明提供的一种司美格鲁肽的纯化工艺，包括，s1、以乙酸铵溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法按照洗脱梯度对含司美格鲁肽的溶液进行第一次纯化，收集纯化后的洗脱液；s2、以三氟乙酸溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法按照洗脱梯度对s1步骤得到的洗脱液进行第二次纯化，收集纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液。本发明对含司美格鲁肽的溶液采用特定的洗脱步骤，即先以乙酸铵溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法进行第一次纯化，再以三氟乙酸溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法进行第二次纯化，不仅提高了司美格鲁肽的收率，还提高了纯度。
21、(2)本发明提供的一种司美格鲁肽的纯化工艺，在对第二次纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液中的司美格鲁肽进行转盐和干燥，制备得到稳定性更好的司美格鲁肽醋酸盐。
1.一种司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，s1步骤中，所述乙酸铵溶液中乙酸铵的质量百分比为0.1-1.5％；和/或，所述乙酸铵溶液中的溶剂为水。
3.根据权利要求1所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，s1步骤中，所述含司美格鲁肽的溶液中的溶剂选自乙腈、甲醇、甲酸、水中的一种或多种；和/或，所述含司美格鲁肽的溶液的浓度为10-14mg/ml。
4.根据权利要求1-3中任一所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，s1步骤或s2步骤中，色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，规格为50×250mm，10μm；和/或，流速为40-60ml/min；和/或，柱温为24-26℃。
5.根据权利要求1-4中任一所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，s2步骤中，所述三氟乙酸溶液中三氟乙酸的体积百分比为0.08-0.18％；和/或，所述三氟乙酸溶液中的溶剂为水。
6.根据权利要求1-5中任一所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，所述司美格鲁肽的纯化工艺还包括对第二次纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液中的司美格鲁肽进行转盐和干燥的步骤。
7.根据权利要求6所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，所述转盐的步骤包括，以醋酸水溶液为流动相a1，以乙酸铵水溶液为流动相a2，以乙腈为流动相b，采用反相色谱法按照下述洗脱梯度对第二次纯化后的含司美格鲁肽的洗脱液中的司美格鲁肽进行转盐并收集转盐后的洗脱液；
8.根据权利要求7所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，转盐的步骤中采用的色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，规格为50×250mm，10μm；和/或，流速为40-60ml/min；和/或，柱温为24-26℃。
9.根据权利要求7所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，所述醋酸水溶液中醋酸的体积百分比为0.15-0.25％；和/或，所述乙酸铵水溶液的浓度为9.8-10.2mm。
10.根据权利要求6所述的司美格鲁肽的纯化工艺，其特征在于，所述干燥的温度为-20℃～-18℃，时间为45-50h。
