本公开是关于用于分析多肽变体之系统及方法。本公开的一些方面是关于用于定量样品内的电荷变体(charge variant)之系统及方法。
背景技术：
1、生物制药产品(例如抗体、抗体－药物接合物、融合蛋白、腺相关病毒(adeno-associated virus，aav)、蛋白质、组织、细胞、多肽或其他生物来源的治疗产品)越来越多地被用于感染性疾病、遗传疾病、自体免疫疾病及其他疾病之治疗与预防。由于其生物来源，生物制药产品具有多个维度的异质性，包括电荷异质性。举例而言，如糖糖基化、氧化或脱酰胺等各种转译后修饰可导致在相似或相同的生产条件下生物性地生产之产品之间的电荷异质性。
2、将电荷变体定性及开发电荷变体分布图的传统方法可能限于理解完整蛋白质或多蛋白质结构。然而，电荷变体可在多肽或蛋白质次单元内形成，且较大结构的定性可能缺乏将单个多肽或次单元的电荷变体定性所需之细节。此外，将电荷变体定性的传统方法可能包括时间及劳动密集型之色谱步骤，这些步骤增加了与电荷变体定性相关的成本。
技术实现思路
1、本公开的方面是关于定量分析物内的电荷变体之方法。该方法可包括将分析物引入毛细管中、沿等电梯度分离样品缓冲液中之电荷变体、将毛细管孵育于检测抗体中、及基于对应于检测抗体的信号(讯号)来定量电荷变体的相对丰度。
2、该方法可进一步包括将所述毛细管孵育于报告分子(报导分子，reportermolecule)中。报告分子可包括与辣根过氧化酶接合的抗体或与辣根过氧化酶接合的链球菌亲和素蛋白。该方法可进一步包括将检测剂引入毛细管中。检测剂可为鲁米诺－过氧化物(luminol-peroxide)。该方法可进一步包括产生电泳图，其中该电泳图包含由报告分子产生的化学发光信号之强度对于检测到化学发光信号之沿等电梯度的等电点之关系图。基于对应于检测抗体的信号定量电荷变体的相对丰度包含计算对应于电荷变体的电泳图之峰以下的面积。该方法在沿等电梯度分离电荷变体之后，且在将毛细管孵育于检测抗体中之前，可进一步包括固定(immobilizing)毛细管中的电荷变体。
3、另一方面，本公开包括定量分析物中之电荷变体的方法。该方法可包括还原及变性分析物中的多肽以产生经还原及变性之多肽，其中该分析物包含目标多肽的电荷变体。该方法可进一步包括对经还原及变性之多肽进行缓冲液交换以产生经缓冲液交换之样品，其中该经缓冲液交换之样品包含经还原及变性之多肽。该方法可进一步包括制备包含经缓冲液交换之样品的样品缓冲液。在一些实施方式中，该方法包括将样品缓冲液引入毛细管中。该方法可进一步包括沿等电梯度分离目标多肽的电荷变体。在一些实施方式中，该方法可包括测量信号，该信号与处在毛细管中之等电梯度内的区域之目标多肽的丰度相关联。
4、样品缓冲液可包括尿素、载体两性电解质及纤维素。纤维素可为羟基丙基甲基纤维素，且样品缓冲液可包含至少大约1体积百分比之羟基丙基甲基纤维素。样品缓冲液可包含至少大约6m或至少大约8m的尿素浓度。样品缓冲液可包含甲酰胺。样品中的甲酰胺浓度可小于或等于大约30体积百分比。
5、另一方面，本公开包括一种评估由目标多肽之样品所感知之环境应力水平的方法。该方法可包括产生样品的电荷变体分布图(曲线，分布曲线)，其中电荷变体分布图包括多个峰。多个峰中的每个峰可与目标多肽的相应电荷变体相关联；与等电点相关联，该等电点等于目标多肽的相应电荷变体之等电点；及/或包括相对峰面积，该相对峰面积与目标多肽的相应电荷变体之相对丰度相关联。该方法可进一步包括将样品的电荷变体分布图与一个或多个已知的电荷变体分布图进行比较。在一些实施方式中，该方法包括基于样品的电荷变体分布图与一个或多个已知的电荷变体分布图之比较，确定由样品所感知之环境应力水平。
6、环境应力水平可与热应力水平、制造过程保持时间(manufacturing processhold time)造成的应力水平、或冻融循环造成的应力水平相关联。目标多肽可包括抗体或腺相关病毒。产生样品的电荷变体分布图可包含将样品引入毛细管中及沿等电梯度分离目标多肽的电荷变体。产生样品的电荷变体分布图可进一步包含将毛细管孵育于检测抗体中、将毛细管孵育于报告分子中、及产生电泳图，其中该电泳图包含由报告分子产生的信号之强度对于检测到信号之沿等电梯度的等电点之关系图。
1.一种定量分析物中的电荷变体的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1记载的方法，进一步包括将所述毛细管孵育于报告分子中。
3.如权利要求2记载的方法，其中所述报告分子包括与辣根过氧化酶接合的抗体或与辣根过氧化酶接合的链球菌亲和素蛋白。
4.如权利要求2记载的方法，进一步包括将检测剂引入所述毛细管中。
5.如权利要求4记载的方法，其中所述检测剂为鲁米诺－过氧化物。
6.如权利要求2记载的方法，进一步包括产生电泳图，其中所述电泳图包含由所述报告分子产生的化学发光信号的强度与检测到所述化学发光信号的沿所述等电梯度的等电点的关系图。
7.如权利要求6记载的方法，其中基于对应于所述检测抗体的所述信号定量所述电荷变体的所述相对丰度包括计算对应于所述电荷变体的所述电泳图峰以下的面积。
8.如权利要求1记载的方法，在沿所述等电梯度分离电荷变体之后，且在将所述毛细管孵育于所述检测抗体中之前，进一步包括：
9.一种定量分析物中的电荷变体的方法，其特征在于，包括：
10.如权利要求9记载的方法，其中所述样品缓冲液包含尿素、载体两性电解质及纤维素。
11.如权利要求10记载的方法，其中所述纤维素为羟基丙基甲基纤维素，且所述样品缓冲液包含至少大约1体积百分比之羟基丙基甲基纤维素。
12.如权利要求10记载的方法，其中所述样品缓冲液包含至少大约6m的尿素浓度。
13.如权利要求12记载的方法，其中所述样品缓冲液的所述尿素浓度为至少大约8m。
14.如权利要求9记载的方法，其中所述样品缓冲液包含甲酰胺。
15.如权利要求14记载的方法，其中所述样品中的甲酰胺浓度小于或等于大约30体积百分比。
16.一种评估由目标多肽样品所感知的环境应力水平的方法，其特征在于，包括：
17.如权利要求16记载的方法，其中所述环境应力水平与热应力水平、制造过程保持时间造成的应力水平、或冻融循环造成的应力水平相关联。
18.如权利要求16记载的方法，其中所述目标多肽包含抗体或腺相关病毒。
19.如权利要求16记载的方法，其中产生所述样品的所述电荷变体分布图包含：
20.如权利要求19记载的方法，其中产生所述样品的所述电荷变体分布图进一步包含：
