本发明涉及结合cd160-tm跨膜同种型的抗体及其抗原结合片段，及其用于治疗癌症和其他疾病的用途。
背景技术：
1、cd160最初被确定为一种gpi锚定的(cd160-gpi)mhc-i类活化受体，主要在外周血nk细胞上表达。还有报道称，鉴定了cd160跨膜同种型(cd160-tm)由cd160基因的可变剪接产生。已确定cd160-tm表面表达高度局限于nk细胞，并且依赖于活化(giustiniani j etal.j immunol.2009jan 1；182(1):63-71)。实际上，本领域公认cd160-tm仅由活化的nk细胞表达，而cd160-gpi由nk细胞(活化或未活化)和不同t细胞亚群表达。此外，有证据表明，cd160-tm代表新型活化受体，通过观察其参与时cd107a nk细胞表面动员增加来评估(giustiniani j et al.2009)。
2、因此，结合cd160-tm同种型而不结合cd160 gpi锚定的同种型(也不结合可由cd160-gpi同种型的蛋白水解切割产生的cd160可溶性同种型)的抗体可适用于治疗目的，且可呈现避免全身毒性(诸如细胞因子风暴风险)的优点。例如，这种抗体可用于放大nk细胞活化，并因此放大nk细胞的效应子功能(细胞毒性、细胞因子分泌等)或用于诱导体内cd160-tm表达细胞(特别是活化的nk细胞)的耗尽。
3、在本发明中，发明人开发了特异性结合cd160-tm同种型的新的抗体，其可用作人治疗的药物。
4、发明简述
5、本发明涉及分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区(vl)包含以下互补决定区3(cdr3)：x1qsx2sypx3t(seq id no:15)，其中x1是g或l，x2是y或q，且x3是y或f。
6、在一个实施方式中，如上所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段的重链可变区(vh)包含以下三个互补决定区(cdr)：
7、-cdr1：gytftsyw(seq id no:1)，
8、-cdr2：iypgsgft(seq id no:2)，
9、-cdr3：sldegfay(seq id no:3)；以及
10、轻链可变区(vl)包含以下三个cdr：
11、-cdr1：qginiw(seq id no:4)，
12、-cdr2：kas，
13、-cdr3：lqsqsypft(seq id no:5)。
14、在一个实施方式中，如上所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段的重链可变区(vh)包含以下三个互补决定区(cdr)：
15、-cdr1：gfsltsyg(seq id no:6)，
16、-cdr2：iwrggnt(seq id no:7)，
17、-cdr3：vknggnskdyaldy(seq id no:8)；以及
18、轻链可变区(vl)包含以下三个cdr：
19、-cdr1：envgiy(seq id no:9)，
20、-cdr2：gss，
21、-cdr3：gqsysypyt(seq id no:10)。
22、在一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与seq id no:11具有至少70％同一性的序列，所述轻链可变区包含与seq id no:12具有至少70％同一性的序列。
23、在一个实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链，所述重链可变区包含与seq id no:13具有至少70％同一性的序列，所述轻链包含与seq id no:14具有至少70％同一性的序列。
24、在一个实施方式中，上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段是嵌合的或人源化的，优选地所述抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
25、在一个实施方式中，上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。
26、在一个实施方式中，上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段是偶联的，优选地所述抗体或其片段与可检测标记偶联。
27、本发明还涉及融合蛋白，其包含上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段。
28、本发明还涉及核酸，其编码上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段或融合蛋白。
29、本发明还涉及药物组合物，其包含上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段或融合蛋白，和至少一种药学上可接受的赋形剂。
30、本发明还涉及上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物，其用作药物。
31、本发明还涉及上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物，其用于治疗有需要的受试者中的癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、炎症性疾病或阵发性睡眠性血红蛋白尿症。
32、在一个实施方式中，上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物用于治疗有需要的受试者中的乳腺癌。在一个实施方式中，上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物用于治疗选自下组的乳腺癌：管腔a型乳腺癌、管腔b型乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)和her2阳性乳腺癌。
33、在一个实施方式中，上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物用于治疗nk白血病或nk淋巴瘤，诸如结外和非结外nk/t淋巴瘤；nk细胞源性恶性肿瘤；急性nk细胞白血病和外周t细胞淋巴瘤(ptcl)，例如外周t细胞淋巴瘤-非特指型(ptcl-nos)。
34、本发明还涉及体外检测方法，用于检测样品，优选生物样品中的cd160-tm，包括将样品与至少一种上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段接触的步骤。
35、本发明还涉及上文所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其用于体内检测受试者中表达cd160-tm的肿瘤。
36、定义
37、在本发明中，以下术语具有以下含义：
38、数字前的“约”包括所述数字值的正负10％或更少。应理解，术语“约”所指的值本身也是具体且优选地公开。
39、如本文所用，“亲和力”是指抗体与表位结合的强度。抗体的亲和力由解离常数kd给出，定义为[ab]x[ag]/[ab-ag]，其中[ab-ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[ab]是未结合抗体的摩尔浓度，且[ag]是未结合抗原的摩尔浓度。亲和常数ka定义为1/kd。优选的用于测定mab的亲和力的方法可见于harlow,et al.,antibodies:alaboratory manual,coldspring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.,1988),coligan et al.,eds.,current protocols in immunology,greene publishing assoc.and wileyinterscience,n.y.,(1992,1993),and muller,meth.enzymol.92:589-601(1983)，这些参考文献在此通过引用全部并入。抗体或其抗原结合片段与抗原、细胞或组织的结合特性通常可使用免疫检测方法来测定和评估，所述免疫检测方法包括例如elisa、基于免疫荧光的测定，诸如免疫组织化学(ihc)和/或荧光活化细胞分选(facs)或通过表面等离振子共振(spr，例如，使用)。
40、如本文所用，“抗体”和“免疫球蛋白”可以互换使用，且是指具有两条重链和两条轻链的组合的蛋白质，无论其是否具有任何相关的特异性免疫反应性。“抗体”是指对目标抗原(例如cd160-跨膜(tm)同种型)具有显著已知的特异性免疫反应活性的这类装配体。本文所用的术语“抗cd160-tm同种型”是指对人cd160-tm同种型表现出免疫特异性的抗体。如本文其他部分所述，对人cd160-tm同种型的“特异性”不排除与cd160-tm同种型的物种同源物的交叉反应，例如与猿cd160-tm同种型的交叉反应。抗体和免疫球蛋白包含轻链和重链，其之间有或没有链间共价键。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构是相当清楚的。通用术语“免疫球蛋白”包括可以在生物化学上区分的五种不同类型的抗体。尽管下文的讨论一般涉及igg类免疫球蛋白分子，但是所有5类抗体都在本发明的范围内。就igg而言，免疫球蛋白包含两条分子量约为23kda的相同的轻多肽链和两条分子量约为53-70kda的相同的重链。四条链通过二硫键以“y”构型连接，其中轻链托于重链，从“y”开口处开始并延伸至可变区。抗体的轻链分类为κappa(κ)或lambda(λ)。各重链类型可与κ或λ轻链结合。一般而言，轻链和重链彼此共价结合，当免疫球蛋白由杂交瘤、b细胞或基因工程宿主细胞产生时，两条重链的“尾部”区通过共价二硫键或非共价键彼此结合。在重链中，氨基酸序列从y构型分叉端的n-端延伸到每条链底部的c-端。本领域技术人员理解，重链分类为gamma(γ)、mu(μ)、alpha(α)、delta(δ)或epsilon(ε)，其中有一些亚类(例如，γ1-γ4)。正是该链的性质决定了抗体的“类别”，分别为igg、igm、iga igd或ige。免疫球蛋白亚类或“同种型”(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1等)已充分表征且已知具有功能特化。鉴于本公开内容，这些类别和同种型中的每一种的修改对于本领域技术人员是容易辨别的，且因此在本发明的范围内。如上所述，抗体的可变区可以抗体选择性识别和特异性结合抗原上的表位。即，抗体的轻链可变结构域(vl结构域)和重链可变结构域(vh结构域)结合形成定义三维抗原结合位点的可变区。该四级抗体结构形成存在于“y”的每个臂末端的抗原结合位点。更具体地，抗原结合位点由每个vh和vl链上的三个互补决定区(cdr)定义。
41、如本文所用，“抗原结合片段”是指，包含比完整抗体更少的氨基酸残基的抗体的部分或区域。“抗原结合片段”结合抗原和/或与其来源的完整抗体竞争性抗原结合(例如，特异性结合cd160-tm同种型)。抗原结合片段包括但不限于单链抗体、二聚单链抗体、fv、scfv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab)'2、fd、脱岩藻糖基化抗体、双抗体、三抗体和四抗体。其还可以包括单抗体、结构域抗体和纳米抗体。
42、“cd160”具有其在本领域中的一般意义，且是指cd160分子。存在三种cd160同种型：cd160-tm同种型、cd160 gpi锚定的同种型和可溶性cd160同种型。cd160-gpi由肠上皮内t淋巴细胞和包括nk细胞、tcrγδ和细胞毒性效应物cd8brightcd28-t淋巴细胞的循环淋巴细胞的小子集表达(anumanthan et al.,1998,j immunol；161:2780-2790；maizaet al.,j.exp.med.,vol.178,p:1121-1126,1993)。cd160跨膜同种型(“cd160-tm”)在giustinianij et al.(j immunol.2009jan1；182(1):63-71.)以及国际专利申请wo2008155363中已描述，其特征在于如seq id no:21所示的氨基酸序列。cd160-tm同种型的胞外结构域可由seqid no:21中第26位氨基酸残基至第189位氨基酸残基的氨基酸序列定义。cd160 gpi锚定的同种型(“cd160-gpi”)描述于nikolova m.et al.(int immunol.2002may；14(5):445-51.)以及国际专利申请wo2006015886中，其特征在于如seq id no:22所示的氨基酸序列与c端的gpi锚融合。cd160可溶性同种型描述于giustiniani j.et al.(j immunol.2007feb 1；178(3):1293-300)中，其特征在于如seq id no:22所示的氨基酸序列。在seq id no:21-22中，氨基酸1-25对应于信号肽，因此可能在表达的蛋白质中并不存在。
43、seq id no:21：cd160-tm同种型
44、mllepgrgccalaillaivdiqsggcinitssasqegtrlnlictvwhkkee
45、aegfvvflckdrsgdcspetslkqlrlkrdpgidgvgeissqlmftisqvtp
46、lhsgtyqccarsqksgirlqghffsilftetgnytvtglkqrqhlefshne
47、gtlssgflqekvwvmlvtslvalqgmskravstpsnegaiiflppwlfsrr
48、rrlermsrgrekcysspgypqessnqfh
49、seq id no:22：cd160可溶性同种型
50、mllepgrgccalaillaivdiqsggcinitssasqegtrlnlictvwhkkee
51、aegfvvflckdrsgdcspetslkqlrlkrdpgidgvgeissqlmftisqvtp
52、lhsgtyqccarsqksgirlqghffsilftetgnytvtglkqrqhlefshne
53、gtlss
54、“cdr”或“互补决定区”是指在重链和轻链多肽的可变区内存在的非连续抗原结合位点。给定cdr的精确氨基酸序列边界可使用许多众所周知的方案的任一种来确定，包括kabat et al.(1991),“sequences of proteins of immunological interest”5thed.public health service,national institutes of health,bethesda,md(“kabat”编号方案),al-lazikani et al.,(1997)jmb 273,927-948(“chothia”编号方案)描述的，或其组合，或immunogenetics(imgt)(lefranc et al.,nucleic acidsres.27:209-212 1999)。imgt是专门研究人和其他脊椎动物的免疫球蛋白(ig)、t细胞受体(tr)和主要组织相容性复合物(mhc)的综合信息系统。本文中，cdr是指轻链或重链内的氨基酸序列和位置。由于cdr在免疫球蛋白可变结构域的结构内的“位置”在物种之间是保守的且存在于称为环的结构中，通过使用根据结构特征比对可变结构域序列的编号系统，可以容易地确定cdr和框架残基。该信息可用于将来自一个物种的免疫球蛋白的cdr残基移植和置换到受体框架中。所述受体框架通常来自人抗体。kabat编号和imgt特征编号系统之间的对应也是本领域技术人员公知的(例如，lefranc et al.，同上)。因此，在一个实施方式中，通过cdr区或cdr来表示由编号体系定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高变区。
55、本文所用的“双抗体(diabodies)”是指，通过构建vh和vl之间具有短接头(约5-10个残基)的scfv片段而制备的小抗体片段，从而实现可变结构域的链间配对而非链内配对，以产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”scfv片段的异二聚体，其中两个抗体的vh和vl存在于不同的多肽链上。双抗体描述于例如专利ep0404097或专利申请wo1993011161中。
56、“结构域抗体”是指抗体的最小功能性结合单位，对应于抗体重链或轻链的可变区。
57、“表位”是指位于抗体或其抗原结合片段结合的一种或多种蛋白质上的氨基酸的特定排列。表位通常由分子诸如氨基酸或糖侧链的化学活性表面组合组成，且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是线性的(或连续的)或构象的，即涉及抗原的不同区域中两个或多个氨基酸序列，这些序列可能不一定是连续的。
58、“fab”是指通过木瓜蛋白酶消化完整igg抗体以除去完整fc片段(包括铰链区)而产生的片段抗体。这些抗体是单价的，仅含有单个抗原结合位点。相反，通过胃蛋白酶消化完整igg抗体产生f(ab′)2片段抗体以除去大部分fc区，同时保留部分铰链区。f(ab')2片段具有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合f(ab)部分。术语“fab′”是指具有约50,000分子量和抗原结合活性的抗体片段，其通过切割f(ab′)2铰链区的二硫键获得。fab'-sh在本文中称为fab'，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离硫醇基团。
59、“fc结构域”、“fc部分”和“fc区”是指抗体重链的c-端片段，例如人γ重链的约氨基酸(aa)230至约aa450或其在其他类型的抗体重链中的对应序列(例如，人抗体的α、δ、ε和μ)，或其天然存在的同种异型。
60、“fd片段”是指fab片段的重链，包含vh和ch1区。
61、“框架区”或“fr区”包括可变区一部分而非cdr(例如，使用编号定义的cdr)一部分的氨基酸残基。轻链的构架区同样被vl的每个cdr分开。在天然存在的抗体中，存在于每个单体抗体上的六个cdr是短而非连续的氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构型时，所述氨基酸序列特异性地定位以形成抗原结合位点。重链和轻链可变区的其余部分在氨基酸序列中显示出较小的分子间可变性，且被称为框架区。框架区大部分采用β-折叠构象，cdr形成连接β-折叠结构的环，在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。因此，这些框架区起形成支架的作用，所述支架通过链间非共价相互作用使六个cdr以正确的方向定位。由定位的cdr形成的抗原结合位点定义了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。该互补表面促进抗体与免疫反应性抗原表位的非共价结合。本领域普通技术人员可以容易地确定cdr的位置。
62、如本文所用，“fv”是指含有完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密非共价结合的一个vh和一个vl的二聚体组成。从这两个结构域的折叠产生6个高变环(每三个环来自重链和轻链)，其有助于抗原结合并赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含对抗原特异的三个cdr的fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管相比整个结合位点亲和力较低。
63、“重链区”包括源自免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸序列。包含重链区的蛋白质包含ch1结构域、铰链(例如上铰链区、中铰链区和/或下铰链区)结构域、ch2结构域、ch3结构域或其变体或片段中的至少一种。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以包含免疫球蛋白重链的fc区(例如铰链部分、ch2结构域和ch3结构域)。在另一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段缺少恒定结构域的至少一个区域(例如，全部或部分ch2结构域)。在某些实施方式中，至少一个，优选全部的恒定区是或源自人免疫球蛋白重链。例如，在一个实施方式中，重链区包含完全人铰链结构域。在其他实施方式中，重链区包含完全人fc区(例如，来自人免疫球蛋白的铰链、ch2和ch3结构域序列)。在某些实施方式中，重链区的组成性恒定结构域来自不同的免疫球蛋白分子。例如，蛋白质的重链区可包含源自igg1分子的ch2结构域和源自igg3或igg4分子的铰链区。在其他实施方式中，恒定结构域是包含不同免疫球蛋白分子区域的嵌合结构域。例如，铰链可以包含来自igg1分子的第一区域和来自igg3或igg4分子的第二区域。在一些实施方式中，可以修饰重链区的恒定结构域，使其在氨基酸序列上不同于天然存在的(野生型)免疫球蛋白分子。即，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可包含对一个或多个重链恒定结构域(ch1、铰链、ch2或ch3)和/或轻链恒定结构域(cl)的改变或修饰。示例性的修饰包括一个或多个结构域中的一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。
64、“铰链区”包括将ch1结构域连接到ch2结构域的重链分子的区域。该铰链区包含约25个残基且是柔性的，因此可使两个n-端抗原结合区独立移动。铰链区可以细分为三个不同的结构域：上铰链区、中铰链区和下铰链区(roux et al.,1998.j immunol.161(8):4083-90)。
65、本文用于描述两个或更多个氨基酸序列或两个或更多个核酸序列之间的关系时，“同一性”或“相同”是指氨基酸序列或核酸序列之间的序列相关程度，如通过两个或更多个氨基酸残基或核酸残基的串之间的匹配数目确定。“同一性”测量两个或更多个序列中的较小序列之间的相同匹配的百分比，其中缺口对比(如果有)由特定数学模型或计算机程序(即“算法”)解决。相关氨基酸序列或核酸序列的同一性可通过已知方法容易地计算。此类方法包括但不限于lesk a.m.(1988).computational molecular biology:sources andmethods for sequence analysis.new york,ny:oxford university press；smith d.w.(1993).biocomputing:informatics and genome projects.san diego,ca:academicpress；griffin a.m.&griffin h.g.(1994).computer analysis of sequence data,part1.totowa,nj:humana press；von heijne g.(1987).sequence analysis in molecularbiology:treasure trove or trivial pursuit.san diego,ca:academic press；gribskov m.r.&devereux j.(1991).sequence analysis primer.new york,ny:stocktonpress；carillo et al.,1988.siam j appl math.48(5):1073-82所描述。用于确定同一性的优选方法设计为给出测试序列之间的最大匹配。确定同一性的方法在公开可用的计算机程序有描述。用于确定两个序列之间同一性的优选计算机程序方法包括gcg程序包，包括gap(genetics computer group,university of wisconsin,madison,wi；devereux etal.,1984.nucleic acids res.12(1pt 1):387-95)、blastp、blastn和fasta (altschulet al.,1990.j mol biol.215(3):403-10)。blastx程序可从美国国家生物技术信息中心(national center for biotechnology information,ncbi)和其他来源公开获取(blastmanual,altschul et al.ncb/nlm/nih bethesda,md.20894)。众所周知的smith waterman算法也可用于确定同一性。
66、如本文所用，“分离的蛋白质”，特别是“分离的抗体”是指一种基本上不含具有不同抗原特异性的其他蛋白质或抗体的蛋白质，特别是抗体(例如，特异性结合cd160-tm同种型的分离的蛋白质或抗体基本上不含特异性结合cd160-tm同种型以外的抗原的蛋白质或抗体)。然而，特异性结合cd160-tm同种型的分离的蛋白质，特别是分离的抗体可与其他抗原具有交叉反应性，诸如其他物种的cd160-tm分子。此外，分离的蛋白质或抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质，特别是那些会干扰蛋白质或抗体的治疗用途的物质，包括但不限于酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质组分。
67、“哺乳动物”是指任何哺乳动物，包括人、非人灵长类、家养和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，诸如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔、猴等。优选地，所述哺乳动物是人。
68、“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即群体中包含的各个抗体是相同的，除了可能少量存在的可能天然发生的突变。针对单个抗原位点，单克隆抗体是高度特异性的。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体是有利的，因为它们可以合成而不被其他抗体污染。修饰语“单克隆”不应被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段可以通过kohler et al.,1975.nature.256(5517):495-7首次描述的杂交瘤方法制备，或可使用重组dna方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(专利us4,816,567)。“单克隆抗体”也可以使用，例如clackson et al.,1991.nature.352(6336):624-8and marks et al.,1991.j molbiol.222(3):581-97中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离。
69、“纳米抗体”是指含有天然存在的重链抗体的独特结构和功能特性的抗体衍生的治疗性蛋白质(muyldermans,2013.annu rev biochem.82:775-97)。这些重链抗体可含有单独一个可变区(vhh)和两个恒定区(ch2和ch3)。
70、如本文所用，“单链抗体”是指任何抗体或其片段，其是具有包含连续氨基酸残基的一个不间断序列或由其组成的一级结构的蛋白质，包括但不限于(1)单链fv分子(scfv)；(2)仅含有一个轻链可变结构域的单链蛋白，或其含有轻链可变结构域的三个cdr的片段，不含相关重链部分；和(3)仅含有一个重链可变区的单链蛋白，或其含有重链可变区的三个cdr的片段，不含相关的轻链部分。
71、“单链fv”，也缩写为“sfv”或“scfv”，是指包含连接到单个氨基酸链中的vh和vl抗体结构域的抗体片段。优选地，scfv氨基酸序列还包含vh和vl结构域间的肽接头，其使得scfv形成抗原结合所需的结构。
72、“特异性”是指抗体可检测地结合存在于抗原(诸如cd160-tm)上的表位的能力，同时与非cd160-tm蛋白(诸如cd160 gpi锚定的同种型和cd160可溶性同种型)具有相对较小的可检测反应性。特异性可以通过使用例如biacore仪器的结合或竞争性结合测定来相对确定。特异性可以通过例如，相对于与其他无关分子(这种情况下，特异性抗原是cd160-tm多肽)的非特异性结合，结合特异性抗原的亲和力/亲合力的比例约10:1，约20:1，约50:1，约100:1，10,000:1或更大来表现。
73、“受试者”是指温血动物，优选哺乳动物(包括人、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，诸如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等)，且更优选人。在一个实施方式中，受试者可以是“患者”，即温血动物，更优选人，其正在等待接受或正在接受医疗护理或者曾经/现在/将来是医疗程序的对象，或者正在被监测疾病的发展。在一个实施方式中，所述受试者是成人(例如18岁以上的受试者)。在另一个实施方式中，所述受试者是儿童(例如18岁以下的受试者)。在一个实施方式中，所述受试者是男性。在另一个实施方式中，所述受试者是女性。
74、“治疗有效量”是指，本文所述的抗体或其抗原结合片段的水平或量，其目的是在不对靶标造成显著负面或不利副作用的情况下，(1)延迟或预防疾病、紊乱或病症的发作；(2)减缓或阻止所述疾病、紊乱或病症的一种或多种症状的进展、加重或恶化；(3)改善疾病、紊乱或病症的症状；(4)降低疾病、紊乱或病症的严重程度或发病率；或(5)治疗所述疾病、紊乱或病症。治疗有效量可以在疾病、紊乱或病症发作之前施用，用于预防或防止作用。或者或另外地，治疗有效量可以在疾病、紊乱或病症开始后施用，用于治疗作用。
75、“治疗(treating/treatment)”或“缓解”是指治疗性治疗和预防性或防止性措施；其中目的是预防或减缓(减轻)所述目标病理病症或紊乱。需要治疗的人包括已经患有病症的以及易于患有病症的或待预防病症的。在一个实施方式中，如果在接受治疗量的本文所述的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体后，受试者显示出以下中的至少一种症状，则成功地“治疗”受试者的本文所述的疾病：病原细胞数目的减少；与待治疗的疾病相关的一种或多种症状得到一定程度缓解；发病率和死亡率降低；以及生活质量问题得到改善。上述用于评估疾病的成功治疗和改善的参数可通过医生熟悉的常规程序容易地测量。
76、“单抗体(unibody)”指缺乏igg4抗体铰链区的抗体片段。铰链区的缺失导致分子基本上是传统igg4抗体大小的一半，且具有单价结合区而非igg4抗体的二价结合区。
77、“可变的”是指可变结构域vh和vl的某些区域在抗体之间的序列上存在很大差异，且用于每种特定抗体对其靶抗原的结合和特异性。然而，可变性不是均匀分布在抗体的整个可变结构域中。其集中在形成抗原结合位点一部分的vl结构域和vh结构域的每一个称为“高变环”的三个区段中。vλ轻链结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为l1(λ)、l2(λ)和l3(λ)，且可定义为包含vl结构域的残基24-33(l1(λ)，由9、10或11个氨基酸残基组成)、49-53(l2(λ)，由3个残基组成)和90-96(l3(λ)，由6个残基组成)(morea et al.,2000.methods.20(3):267-79)。vκ轻链结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为l1(κ)、l2(κ)和l3(κ)，且可定义为包含vl结构域的残基25-33(l1(κ)，由6、7、8、11、12或13个残基组成)、49-53(l2(κ)，由3个残基组成)和90-97(l3(κ)，由6个残基组成)(morea etal.，同上)。vh结构域的第一、第二和第三高变环在本文中称为h1、h2和h3，且可定义包含vh结构域中的残基25-33(h1，由7、8或9个残基组成)、52-56(h2，由3或4个残基组成)和91-105(h3，长度高度可变)(morea et al.，同上)。除非另外指明，术语l1、l2和l3分别是指vl结构域的第一、第二和第三高变环，且包含来自vκ和vλ同种型的高变环。术语h1、h2和h3分别指vh结构域的第一、第二和第三高变环，且包含来自任何已知重链同种型的高变环，包括gamma(γ)、mu(μ)、alpha(α)、delta(δ)或epsilon(ε)。高变环可各自包含上文定义的“互补决定区”或“cdr”的一部分。
78、发明详述
79、本发明涉及结合cd160-tm同种型的抗体或其抗原结合片段。
80、抗体和抗原结合片段的实例包括但不限于全抗体、单链抗体、二聚单链抗体、fv、scfv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab)'2、fd、脱岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双抗体、三抗体、四抗体、单抗体、结构域抗体和纳米抗体。
81、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段选自包含或由其组成的下组：全抗体、单链抗体、二聚单链抗体、fv、scfv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab)'2、fd，脱岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双抗体、三抗体和四抗体。
82、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段选自包含或由其组成的下组：全抗体、单链可变片段(scfv)、fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab)'2、脱岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双抗体、三抗体和四抗体。
83、在一个实施方式中，根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段选自包含或由其组成的下组：单抗体、结构域抗体和纳米抗体。
84、在一个实施方式中，根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段选自包含或由其组成的下组：全抗体、fv、scfv、fab和单抗体。
85、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段特异性结合cd160-tm同种型。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段特异性结合人cd160-tm同种型。
86、如本文所用，“特异性结合”是指识别并结合样品中存在的结合配偶体的抗体或其抗原结合片段，但所述抗体或其抗原结合片段基本上不识别或结合样品中的其他分子。
87、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段对其他cd160同种型(诸如cd160 gpi锚定的同种型和cd160可溶性同种型)具有低亲和力或无亲和力。
88、抗体或其抗原结合片段的亲和力可以使用常规技术容易地确定，例如scatchard,1949.ann ny acad sci.51:660-672所述的技术。抗体或其抗原结合片段与抗原、细胞或组织的结合特性通常可使用免疫检测方法来测定和评估，所述方法包括例如elisa、基于免疫荧光的测定，诸如免疫组织化学(ihc)和/或荧光活化细胞分选(facs)或通过表面等离振子共振(spr，例如使用)。
89、在下文中，除非另外明确说明，cdr编号和定义根据编号体系。
90、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(本文缩写为vh)，其包含以下互补决定区1(cdr1)：gx1x2x3tsyx4(seq id no:16)，其中x1是f或y，x2是s或t，x3是l或f，x4是g或w。
91、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(本文缩写为vl)，其包含以下互补决定区3(cdr3)：x1qsx2sypx3t(seq id no:15)，其中x1是g或l，x2是y或q，且x3是y或f。
92、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下互补决定区(cdr)：
93、cdr1：gytftsyw(seq id no:1)；
94、cdr2：iypgsgft(seq id no:2)；和/或
95、cdr3：sldegfay(seq id no:3)。
96、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下互补决定区(cdr)：
97、cdr1：gfsltsyg(seq id no:6)；
98、cdr2：iwrggnt(seq id no:7)；和/或
99、cdr3：vknggnskdyaldy(seq id no:8)。
100、在一个实施方式中，具有seq id no 1-3，6-8的vh的cdr1、cdr2和/或cdr3中的任一个可表征为具有被不同氨基酸取代的1、2、3或更多个氨基酸。
101、在一个实施方式中，具有seq id no 1-3，6-8的vh的cdr1、cdr2和/或cdr3中的任一个可表征为具有与相应seq id no中所列的特定cdr或cdr组具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
102、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下互补决定区(cdr)：
103、cdr1：qginiw(seq id no:4)；
104、cdr2：kas；和/或
105、cdr3：lqsqsypft(seq id no:5)。
106、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下互补决定区(cdr)：
107、cdr1：envgiy(seq id no:9)；
108、cdr2：gss；和/或
109、cdr3：gqsysypyt(seq id no:10)。
110、在一个实施方式中，分别具有seq id no:4或9、序列kas或gss和seq id no:5或10的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3中的任一个可表征为具有被不同氨基酸取代的1、2、3或更多个氨基酸。
111、在一个实施方式中，分别具有seq id no:4或9、序列kas或gss和seq id no:5或10的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3中的任一个可表征为具有与上文列出的特定cdr或cdr组具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
112、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
113、-vh，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
114、cdr1：gytftsyw(seq id no:1)；
115、cdr2：iypgsgft(seq id no:2)；和/或
116、cdr3：sldegfay(seq id no:3)；以及
117、-vl，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
118、cdr1：qginiw(seq id no:4)；
119、cdr2：kas；和/或
120、cdr3：lqsqsypft(seq id no:5)。
121、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
122、-vh，其包含以下三个cdr：
123、cdr1：gytftsyw(seq id no:1)；
124、cdr2：iypgsgft(seq id no:2)；和
125、cdr3：sldegfay(seq id no:3)；以及
126、-vl，其包含以下三个cdr：
127、cdr1：qginiw(seq id no:4)；
128、cdr2：kas；以及
129、cdr3：lqsqsypft(seq id no:5)。
130、在一个实施方式中，分别具有seq id no:1-3的vh和/或具有seq id no:4、序列kas和seq id no:5的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有被不同氨基酸取代的1、2、3或更多个氨基酸。
131、在一个实施方式中，分别具有seq id no:1-3的vh和/或具有seq id no:4、序列kas和seq id no:5的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有与上文列出的特定cdr或cdr组具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
132、包含重链和轻链的抗体的实例为21c8抗体，所述重链包含具有seq id no:1-3的cdr1、cdr2和cdr3，所述轻链包含具有seq id no:4、序列kas和seq id no:5的cdr1、cdr2和cdr3。
133、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
134、-vh，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
135、cdr1：gfsltsyg(seq id no:6)；
136、cdr2：iwrggnt(seq id no:7)；和/或
137、cdr3：vknggnskdyaldy(seq id no:8)；以及
138、-vl，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
139、cdr1：envgiy(seq id no:9)；
140、cdr2：gss；和/或
141、cdr3：gqsysypyt(seq id no:10)。
142、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
143、-vh，其包含以下三个cdr：
144、cdr1：gfsltsyg(seq id no:6)；
145、cdr2：iwrggnt(seq id no:7)；和
146、cdr3：vknggnskdyaldy(seq id no:8)；以及
147、-vl，其包含以下三个cdr：
148、cdr1：envgiy(seq id no:9)；
149、cdr2：gss；和
150、cdr3：gqsysypyt(seq id no:10)。
151、在一个实施方式中，分别具有seq id no:6-8的vh和/或具有seq id no:9、序列gss和seq id no:10的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有被不同氨基酸取代的1、2、3或更多个氨基酸。
152、在一个实施方式中，分别具有seq id no:6-8的vh和/或具有seq id no:9、序列gss和seq id no:10的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有与上文列出的特定cdr或cdr组具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
153、包含重链和轻链的抗体的实例是22b12抗体，所述重链分别具有seq id no:6-8的cdr1、cdr2和cdr3，所述轻链分别包含具有seq id no:9、序列gss和seq id no:10的cdr1、cdr2和cdr3。
154、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
155、-vh，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
156、cdr1：gfsltsyg(seq id no:6)；
157、cdr2：iwrggnt(seq id no:7)；和/或
158、cdr3：vknggnskdyaldy(seq id no:8)；以及
159、-vl，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
160、cdr1：qginiw(seq id no:4)；
161、cdr2：kas；和/或
162、cdr3：lqsqsypft(seq id no:5)。
163、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
164、-vh，其包含以下三个cdr：
165、cdr1：gfsltsyg(seq id no:6)；
166、cdr2：iwrggnt(seq id no:7)；和/或
167、cdr3：vknggnskdyaldy(seq id no:8)；以及
168、-vl，其包含以下三个cdr：
169、cdr1：qginiw(seq id no:4)；
170、cdr2：kas；和/或
171、cdr3：lqsqsypft(seq id no:5)。
172、在一个实施方式中，分别具有seq id no:6-8的vh和/或具有seq id no:4、序列kas和seq id no:5的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有被不同氨基酸取代的1、2、3或更多个氨基酸。
173、在一个实施方式中，分别具有seq id no:6-8的vh和/或具有seq id no:4，序列kas和seq id no:5的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有与上文列出的特定cdr或cdr组具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
174、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
175、-vh，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
176、cdr1：gytftsyw(seq id no:1)；
177、cdr2：iypgsgft(seq id no:2)；和/或
178、cdr3：sldegfay(seq id no:3)；以及
179、-vl，其包含至少一个，优选至少两个，更优选三个以下cdr：
180、cdr1：envgiy(seq id no:9)；
181、cdr2：gss；和/或
182、cdr3：gqsysypyt(seq id no:10)。
183、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
184、-vh，其包含以下三个cdr：
185、cdr1：gytftsyw(seq id no:1)；
186、cdr2：iypgsgft(seq id no:2)；和/或
187、cdr3：sldegfay(seq id no:3)；以及
188、-vl，其包含以下三个cdr：
189、cdr1：envgiy(seq id no:9)；
190、cdr2：gss；和/或
191、cdr3：gqsysypyt(seq id no:10)。
192、在一个实施方式中，分别具有seq id no:1-3的vh和/或具有seq id no:9、序列gss和seq id no:10的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有被不同氨基酸取代的1、2、3或更多个氨基酸。
193、在一个实施方式中，分别具有seq id no:1-3的vh和/或具有seq id no:9，序列gss和seq id no:10的vl的cdr1、cdr2和/或cdr3其中任一个，可表征为具有与上文列出的特定cdr或cdr组具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
194、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含vh，所述vh包含序列seq id no:11或由其组成。
195、seq id no:11
196、qvqlqqpgselvrpgasvrlsckasgytftsywmhwvrqrhgqglewi
197、gniypgsgftnydekfknkgtltvdtssstaymhlssltsedsavyycsld
198、egfaywgqgtlvtvsa
199、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含vh，所述vh包含序列seq id no:13或由其组成。
200、seq id no:13
201、qvqlkqsgpglvqpsqslsimctvsgfsltsyglhwvrqspgkglewlgv
202、iwrggntdynadfmsrltitkdnsksqvffkmnslqaddtavyycvkng
203、gnskdyaldywgqgtsvtvss
204、在一个实施方式中，所述vh包含序列seq id no:11或13或由其组成，其中所述序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多个氨基酸被不同氨基酸取代。
205、在一个实施方式中，所述vh具有与seq id no:11或13具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
206、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含vl，所述vl包含序列seq id no:12或由其组成。
207、seq id no:12
208、diqmnqspsslsaslgdtititcrasqginiwlnwyqqkpgnipkrliykas
209、nlhtgvpprfrgsgsgtdftltisslqpediatyyclqsqsypftfgsgtkle
210、ir
211、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含vl，所述vl包含序列seq id no:14或其组成。
212、seq id no:14
213、nivmtqspksmsmsvgervtlsckasenvgiyvswyqqkpeqspklliyg
214、ssnrytgvpdrftgsgsatdftliissvqaedladyhcgqsysypytfggg
215、tkleik
216、在一个实施方式中，所述vl包含序列seq id no:12或14或由其组成，其中所述序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多个氨基酸被不同氨基酸取代。
217、在一个实施方式中，所述vh具有与seq id no:12或14具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
218、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
219、-vh，其包含序列seq id no:11或由其组成；以及
220、-vl，其包含序列seq id no:12或由其组成。
221、在一个实施方式中，所述vh包含序列seq id no:11或由其组成，和/或所述vl包含序列seq id no:12或由其组成，其中所述序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多个氨基酸被不同的氨基酸取代。
222、在一个实施方式中，所述vh和/或vl具有分别与seq id no:11和/或seq id no:12具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一性的氨基酸序列。
223、此类抗体的实例是21c8抗体。
224、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
225、-vh，其包含序列seq id no:13或由其组成；以及
226、-vl，其包含序列seq id no:14或由其组成。
227、在一个实施方式中，所述vh包含序列seq id no:13或由其组成，和/或所述vl包含序列seq id no:14或由其组成，其中所述序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多个氨基酸被不同的氨基酸取代。
228、在一个实施方式中，所述vh和/或vl具有分别与seq id no:13和/或seq id no:14具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一性的氨基酸序列。
229、此类抗体的实例是22b12抗体。
230、如本文所用，关于给定序列的短语“表征为具有被不同氨基酸取代的[……]氨基酸”，是指在所述序列中出现保守性氨基酸修饰。
231、如本文所用，表述“保守性氨基酸修饰”是指，不显著影响或改变含有所述氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段的结合特性的修饰。这种保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。通过本领域已知的标准技术，诸如定点诱变和pcr介导的诱变，可以将修饰引入抗体或其抗原结合片段。
232、保守性氨基酸取代通常是其中氨基酸残基被具有相似物理化学性质的侧链的氨基酸残基取代。指定的可变区和cdr序列可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多个氨基酸插入、缺失和/或取代。当进行取代时，保守修饰是优选的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有以下侧链的氨基酸：碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，根据本发明的抗体或其抗原结合片段的cdr和/或可变区内的一个或多个氨基酸残基可以用来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替换，且可使用本文所述的测定法测试改变的抗体的保留的功能(即，本文所述的特性，例如，结合cd160-tm同种型)。在另一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段的cdr和/或可变区内的氨基酸串可以被替换为结构相似但在侧链家族成员顺序和/或组成上不同的氨基酸串。
233、本发明还涉及21c8样抗体，即结合与21c8相同的表位或结合与21c8基本相同的表位的抗体。因此，本发明还涉及与21c8竞争结合cd160-tm同种型的抗体或抗原结合片段。
234、本发明还涉及22b12样抗体，即结合与22b12相同的表位或结合与22b12基本相同的表位的抗体。因此，本发明还涉及与22b12竞争结合cd160-tm同种型的抗体或抗原结合片段。
235、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是多克隆的。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
236、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是单价的。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是二价的。
237、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含完整或基本上完整的鼠重链恒定区(本文缩写为ch)和/或轻链恒定区(本文缩写为cl)。在一个实施方式中，所述恒定区是鼠源的。
238、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是鼠抗体或其片段。
239、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体或其片段。
240、如本文所用，“嵌合抗体或其片段”是指包含与第二氨基酸序列连接的第一氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，其在自然界中并非天然连接。所述氨基酸序列通常可存在于分开的蛋白中，其集合于融合蛋白中，或者通常可以存在于同一蛋白中，但是在融合蛋白中以新的排列方式放置。嵌合蛋白可以例如通过化学合成或通过产生和翻译多核苷酸来产生，其中所述肽区域以所需关系编码。
241、术语“嵌合抗体或其片段”在本文中涵盖抗体及其抗原结合片段，其中
242、(a)恒定区或其部分，被改变、替换或交换，使得可变区连接至不同的恒定区或改变类型、效应子功能和/或物种的恒定区，或赋予嵌合抗体新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或
243、(b)可变区或其部分，被具有不同的或改变的抗原特异性的可变区或其部分改变、替换或交换；或具有来自另一物种或来自另一抗体类型或亚类的相应序列。
244、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是人源化抗体或其片段。
245、如本文所用，“人源化抗体或其片段”是指含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体或其抗原结合片段。其包括由具有可变区和恒定区的非人细胞制备的抗体，所述可变区和恒定区已被改变以更接近地类似于由人细胞制备的抗体，例如通过改变非人抗体氨基酸序列以掺入在人种系免疫球蛋白序列中发现的氨基酸。根据本发明的人源化抗体或其抗原结合片段可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，突变，其通过体外随机或位点特异性诱变，或通过体内体细胞突变引入)，例如在cdr中。
246、术语“人源化抗体或其片段”还包括抗体和其抗原结合片段，其中源自另一哺乳动物物种(诸如小鼠)种系的cdr序列移植到人框架序列上。换言之，术语“人源化抗体或其片段”是指其中受体人抗体的cdr被来自供体非人抗体的cdr替代的抗体或其抗原结合片段。人源化抗体或其抗原结合片段也可以在框架序列中包含供体来源的残基。人源化抗体或其抗原结合片段还可以包含至少一部分人免疫球蛋白恒定区。人源化抗体或其抗原结合片段还可以包含既不存在于受体抗体中也不存在于导入的cdr或框架序列中的残基。人源化可以使用本领域已知的方法进行(例如，jones et al.,1986.nature.321(6069):522-5；riechmann et al.,1988.nature.332(6162):323-7；verhoeyen et al.,1988.science.239(4847):1534-6；presta,1992.curr opin biotechnol.3(4):394-8；专利us4,816,567)，包括诸如“超人源化”抗体的技术(例如，tan et al.,2002.jimmunol.169(2):1119-25)和“表面重塑”(例如，staelens et al.,2006.mol immunol.43(8):1243-57；roguska et al.,1994.proc natl acad sci usa.91(3):969-73)。
247、“人源化抗体或其片段”可以保留与原始抗体或片段相似的抗原特异性。然而，使用某些人源化方法，可以增加抗体结合的亲和力和/或特异性。
248、根据本发明的抗体或其抗原结合片段的人源化方法是本领域公知的。选择用于制备人源化抗体或其抗原结合片段的人可变结构域，包括轻链和重链可变结构域，对于降低抗原性非常重要。根据所述的“最佳拟合”方法，根据本发明的抗体或其抗原结合片段的可变结构域的序列根据已知人可变结构域序列的完整文库进行筛选。最接近小鼠序列的人序列从而被接受为人源化抗体或片段的人框架区(fr)(sims et al.,1993.j immunol.151(4):2296-308；chothia&lesk,1987.j mol biol.196(4):901-17。
249、人源化根据本发明的抗体或其抗原结合片段的另一种方法使用来自轻链或重链的特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体或片段(carter et al.,1992.proc natl acad sci usa.89(10):4285-9；presta etal.,1993.j immunol.151(5):2623-32)。更重要的是，抗体或片段的人源化，保留了对cd160-tm同种型的高亲和力和其他有利的生物学特性。为实现该目的，根据优选的方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念上的人源化产物的方法，来制备人源化抗体及其抗原结合片段。三维免疫球蛋白模型通常可获得且是本领域技术人员所熟悉的。阐释和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维结构的计算机程序可以获得。检查这些显示可以分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合表位的能力的残基。由此，可以从共有序列和输入序列中选择和组合cdr残基，从而获得所需的抗体特征，诸如对cd160-tm同种型的亲和力增加。通常，cdr残基直接且最实质地参与影响抗原结合。
250、人源化根据本发明的抗体或其抗原结合片段的另一种方法是使用携带部分人免疫系统的转基因或转染色体动物进行免疫。作为宿主，这些动物的免疫球蛋白基因被功能性人免疫球蛋白基因取代。因此，由这些动物或在由这些动物的b细胞制备的杂交瘤中产生的抗体已经被人源化。这样的转基因或转染色体动物的实例包括但不限于：
251、-xenomouse(abgenix,fremont,ca)，如专利us5,939,598、us6,075,181、us6,114,598、us6,150,584和us6,162,963中所述；
252、-humab(medarex,inc.)，如lonberg et al.,1994.nature.
253、368(6474):856-859；lonberg&huszar,1995.int rev immunol.
254、13(1):65-93；harding&lonberg,1995.ann n y acad sci.
255、764:536-46；taylor et al.,1992.nucleic acids res.20(23):6287-95；
256、chen et al.,1993.int immunol.5(6):647-56；tuaillon et al.,1993.
257、proc natl acad sci usa.90(8):3720-4；choi et al.,1993.nat genet.
258、4(2):117-23；chen et al.,1993.embo j.12(3):821-30；tuaillon et al.,1994.j immunol.152(6):2912-20；taylor et al.,1994.int immunol.6(4):579-91；fishwild et al.,1996.nat biotechnol.
259、14(7):845-51中所述；
260、-km如专利申请wo2002043478中所述；
261、-tc小鼠，如tomizuka et al.,2000.proc natl acad sci usa.
262、97(2):722-7中所述；以及
263、-omnirattm(omt,inc.)，如专利申请wo2008151081；geurts et al.,2009.science.325(5939):433；menoret et al.,2010.eur j immunol.
264、40(10):2932-41中所述。
265、人源化抗体及其抗原结合片段也可根据各种其他技术产生，诸如通过使用经工程化以表达人抗体所有组成成分的其他转基因动物用于免疫(jakobovitz et al.,1993.nature.362(6417):255-8)，或通过使用噬菌体展示方法筛选抗体所有组成成分。这些技术是本领域技术人员已知的，且可以从本技术公开的单克隆抗体或其抗原结合片段开始实施。
266、在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段来自igg类型。
267、在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段来自人igg1亚类。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段因而是igg1抗体，优选人igg1抗体。
268、在另一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段来自人igg2亚类。
269、igg抗体的fc区与细胞fcγ受体(fcγr)相互作用以刺激和调节下游效应子机制。有五种活化受体，即fcγri(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriic(cd32c)、fcγriiia(cd16a)和fcγriiib(cd16b)，以及一种抑制性受体fcγriib(cd32b)。igg抗体与免疫系统的通讯由fcγr控制和介导，fcγr传递由免疫系统的抗体感测和收集的信息，提供先天和适应性免疫系统间的联系，特别是在生物治疗的情况下(hayes j et al.,2016.j inflammres 9:209-219)。
270、igg亚类结合fcγr的能力不同，且这种不同的结合决定了它们引发一系列功能反应的能力。例如，在人中，fcγriiia是参与活化抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)的主要受体，且igg3(紧随其后的是igg1)对该受体显示最高的亲和力，反映了它们有效诱导adcc的能力。已表明igg2对该受体具有弱结合。
271、因此，抗体的恒定区对于抗体固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性和吞噬作用的能力是很重要的。因此，如本文所述，抗体的同种型可基于抗体是否需要介导细胞毒性/吞噬作用来选择。
272、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合fcγr，优选以高亲和力结合活化受体。
273、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合fcγri和/或fcγriia和/或fcγriic和/或fcγriiia和/或fcγriiib。
274、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是igg1抗体(优选人igg1抗体)或其片段，且结合至少一种fc活化受体。例如，抗体或其抗原结合片段可以结合一种或多种选自以下的受体：fcγri、fcγriia、fcγriic、fcγriiia和fcγriiib。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够结合fcγriiia。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够结合fcγriia。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够结合fcγriiia、fcγriic，以及，任选地fcγri。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够结合fcγriiia、fcγriia和以及，任选地fcγri。
275、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段以小于约10-6m、10-7m、10-8m、10-9m或10-10m的解离常数结合至少一种活化fcγ受体。
276、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是igg1抗体(优选人igg1抗体)或其片段，并以更高的亲和力结合fcγri、fcγriia、fcγriic、fcγriiia和/或fcγriiib，而以较低的亲和力结合fcyriib。
277、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段诱导抗体依赖性细胞毒性(adcc)。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段来自igg1(优选人igg1)亚类，并具有adcc活性。
278、术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“adcc”是指当与其抗原结合的所述抗体的fc区与效应细胞(诸如天然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞(例如，外周血单核细胞))上的fc受体结合，从而导致靶细胞的裂解时，以抗体依赖性方式诱导的细胞介导的细胞毒性。adcc可使用本领域已知和可用的测定来测量(例如，clyneset al.(1998)proc natl acad sci usa 95,652-6)。
279、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段诱导抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(adcp)。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段来自igg1(优选人igg1)亚类，并具有adcp活性。
280、术语“抗体依赖性细胞介导的吞噬作用”(adcp)或“调理作用”是指细胞介导的反应，其中表达fc受体(fcr)的非特异性细胞毒性细胞(例如吞噬细胞、巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体并诱导靶细胞的吞噬作用。adcp可以使用本领域已知且可用的测定来测量(例如，clynes et al.(1998)proc natl acad sci usa 95,652-6)。
281、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段诱导补体依赖性细胞毒性(cdc)。在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段来自igg1(优选人igg1)亚类并具有cdc活性。
282、术语“补体依赖性细胞毒性”(cdc)是指在补体存在下，诱导由本发明的抗体或其抗原结合片段识别的抗原表达细胞的裂解。补体活化途径由补体系统的第一组分(c1q)与同源抗原复合的分子(例如抗体)的结合启动。cdc可以使用本领域已知和可用的测定来测量(例如，clynes et al.(1998)proc natl acad sci usa 95,652-6；gazzano-santaro etal.,j.immunol.methods,202:163(1996))。
283、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段包含介导adcc、adcp和/或cdc的fc区。
284、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段不诱导adcc、adcp和/或cdc。
285、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段不包含介导adcc、adcp和/或cdc的fc区。
286、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段缺少fc结构域(例如缺少ch2和/或ch3结构域)或包含igg2或igg4同种型(优选人igg2或igg4)的fc结构域。
287、根据本发明的抗体或其抗原结合片段可通过本领域已知的任何技术产生，诸如但不限于任何化学、生物、遗传或酶技术，单独或组合。
288、因此，本发明的另一个目的是产生和纯化本文所述的抗体或其抗原结合片段的方法。
289、在一个实施方式中，所述方法包括：
290、-将本文所述的重组核酸或载体体外或离体引入感受态宿主细胞；
291、-在适于表达所述抗体或其抗原结合片段的条件下，体外或离体培养用所述核酸或表达载体转化的宿主细胞；
292、-任选地，选择表达和/或分泌所述抗体或其片段的细胞；以及
293、-回收所表达的抗体或其抗原结合片段。
294、该重组方法可用于大规模生产抗体或其抗原结合片段，包括用于体外、离体和/或体内治疗用途的单克隆抗体。
295、在一个实施方式中，进一步纯化表达的抗体或其抗原结合片段。
296、纯化抗体或其抗原结合片段的方法是本领域熟知的，包括但不限于蛋白a-琼脂糖、凝胶电泳、层析，优选通过亲和层析，更优选通过蛋白l琼脂糖上的亲和层析。
297、还可理解，根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以用本领域已知的方法修饰。
298、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是工程化抗体或其片段。
299、根据本发明的工程化抗体或其片段包括其中已对vh和/或vl的框架残基进行修饰，例如，以改善所述抗体的特性的那些。通常，进行此类框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”到相应的种系序列。更具体地，已经经历体细胞突变的抗体可含有不同于所述抗体来源的种系序列的框架残基。这类残基可以通过将抗体框架序列与抗体来源的种系序列进行比较来鉴定。为使框架区序列回复其种系构型，可通过例如定点诱变或pcr介导的诱变将体细胞突变“回复突变”到种系序列。这种“回复突变”抗体也意欲涵盖在本发明中。另一种类型的框架修饰包括突变框架区内或甚至一个或多个cdr区内的一个或多个残基，以除去t细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。这种方法也称为“去免疫化”，且在carr et al.的美国专利公开号20030153043中进一步详细描述。
300、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段被工程化以引发增强的、增加的或改善的adcc、adcp和/或cdc应答。
301、增加adcc、adcp和/或cdc的方法是本领域熟知的。例如，adcc可以通过消除抗体聚糖中岩藻糖部分来增加，例如通过在yb2/0细胞系中产生抗体，或通过在人igg1的fc部分上引入特定突变(例如，s298a/e333a/k334a，s239d/i332e/a330l，g236a/s239d/a330l/i332e)(lazar et al.(2006)proc natl acad sci usa 103,2005-2010；smith et al.(2012)proc natl 25acad sci usa109,6181-6)。adcp也可通过在人igg1的fc部分上引入特定突变而增加(richards et al.(2008)mol cancer ther7,2517-27)。cdc应答可以随着抗体中增加c1q结合亲和力的突变来增加(idusogie et al.(2001)j immunol 166,2571-5)。
302、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段被工程化以引发降低的adcc、adcp和/或cdc应答。
303、降低或消除adcc、adcp和/或cdc的方法也是本领域熟知的。例如，通过修饰免疫球蛋白fc结构域的糖基化分布的方法可以降低或消除adcc。cdc可以通过用其他氨基酸替换一个或多个氨基酸而降低或消除，从而改变抗体的c2q结合(idusogie et al.，美国专利号6,194,551)。
304、如本文所用，术语“增强的、增加的或改善的adcc、adcp和/或cdc应答”和“降低的adcc、adcp和/或cdc应答”是与由其他抗cd160-tm抗体，例如未修饰的抗-cd160-tm单克隆抗体诱导的adcc、adcp和/或cdc应答相比，相对于由根据本发明的修饰的抗体或其片段诱导的adcc、adcp和/或cdc应答。
305、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段被工程化以修饰其糖基化。
306、例如，根据本发明的抗体或其片段是无糖基化的(即，所述抗体或其片段缺乏糖基化)。例如，可改变糖基化以增加抗体对抗原的亲和力或改变抗体的adcc活性。这种碳水化合物修饰可通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除该位点的糖基化。这种无糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。另外地或替代地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，例如具有减少量的岩藻糖残基或没有岩藻糖残基的低岩藻糖基化或非岩藻糖基化抗体，或具有增加的二等分glcnac结构的抗体。已证实这种改变的岩藻糖基化模式可增加抗体的adcc能力。这种碳水化合物修饰可通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化机制的细胞已经在本领域中描述，且可以用作宿主细胞，在其中表达本发明的重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。或者，本发明的抗体(优选单克隆抗体)可在酵母或丝状真菌中产生，所述酵母或丝状真菌经工程化以具有哺乳动物样糖基化模式且能够产生缺乏岩藻糖作为糖基化模式的抗体。
307、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是聚乙二醇化的抗体或其片段。
308、例如，抗体或其片段可聚乙二醇化，以增加抗体的生物(例如血清)半衰期。为使抗体或其片段聚乙二醇化，通常在一个或多个peg基团连接至抗体或抗体片段的条件下使抗体或其片段与聚乙二醇(peg)(诸如peg的反应性酯或醛衍生物)反应。peg化可以通过与反应性peg分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的peg，诸如单(dy12-dy120)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方式中，待聚乙二醇化的抗体是非糖基化抗体。用于蛋白质聚乙二醇化的方法是本领域已知的且可应用于根据本发明的抗体或片段，例如，ep0154316和ep0401384中所述(通过引用并入本文)。
309、本发明还涉及包含上述抗体或抗原结合片段的融合蛋白。
310、本发明还涉及偶联的上述抗体或抗原结合片段。
311、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或抗原结合片段与治疗部分即药物偶联。
312、所述治疗部分可以是，例如细胞毒素、化疗剂、细胞因子、免疫抑制剂、免疫刺激蛋白、裂解肽或放射性同位素。此类偶联物在本文中称为“抗体-药物偶联物”或“adc”。
313、放射性同位素的实例包括但不限于90y、131i或67cu。
314、在一个实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与细胞毒性部分偶联。
315、细胞毒性部分例如可以选自下组：紫杉醇；细胞松弛素b；短杆菌肽d；溴化乙锭；依米丁；丝裂霉素；依托泊苷；替尼泊苷；长春新碱；长春碱；秋水仙碱；多柔比星；柔红霉素；二羟基蒽二酮；微管蛋白抑制剂，诸如美登素或其类似物或衍生物；抗有丝分裂剂，诸如单甲基奥瑞他汀e或f或其类似物或衍生物；海兔毒素10或15或其类似物；伊立替康或其类似物；米托蒽醌；光神霉素；放线菌素d；1-脱氢睾酮；糖皮质激素；普鲁卡因；丁卡因；利多卡因；普萘洛尔；嘌呤霉素；卡奇霉素或其类似物或衍生物；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪、羟基脲、天冬酰胺酶、吉西他滨或克拉屈滨；烷化剂，诸如氮芥、塞替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(bsnu)、洛莫司汀(ccnu)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、达卡巴嗪(dtic)、丙卡巴肼、丝裂霉素c；铂衍生物诸如顺铂或卡铂；倍癌霉素a，倍癌霉素sa，拉奇霉素(cc-1065)；抗生素，诸如放线菌素d、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、伊达比星、光神霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、普卡霉素、安曲霉素(amc)；吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮杂(pdb)；白喉毒素和相关分子，诸如白喉毒素a链及其活性片段和杂合分子，蓖麻毒素诸如蓖麻毒素a或去糖基化蓖麻毒素a链毒素，霍乱毒素，志贺样毒素诸如slt i、slt ii、slt iiv、lt毒素，c3毒素，志贺菌毒素，百日咳毒素，破伤风毒素，大豆bowman-birk蛋白酶抑制剂，假单胞菌外毒素，alorin，皂草素，莫德菌素，吉利丁，相思豆毒素a链，莫德菌素a链，α-sarcin、油桐蛋白，香石竹蛋白，美洲商陆蛋白，诸如papi、papii和pap-s，苦瓜抑制剂，姜黄素，巴豆毒蛋白，皂草抑制剂，白树毒素，丝林霉素(mitogellin)，局限曲菌素(restrictocin)，酚霉素和伊诺霉素毒素；核糖核酸酶(rnase)；dna酶i，葡萄球菌肠毒素a；美洲商陆抗病毒蛋白；白喉毒素毒素；和假单胞菌属内毒素。
316、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或抗原结合片段被偶联至细胞杀伤细胞毒性药物(有效负载)，所述细胞杀伤细胞毒性药物选自包含或由其组成的下组：奥加米星、vedotin、emtansine、deruxtecan、govitecan、mafodotin、pasudotox和tesirine。
317、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或抗原结合片段与可检测标记偶联。
318、可以使用的根据本发明的抗cd160-tm抗体或其抗原结合片段的标记包括但不限于各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、磁性试剂和放射性材料。
319、此类酶的实例包括但不限于，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶过氧化物酶。
320、辅基复合物的实例包括但不限于，链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素。
321、荧光材料的实例包括但不限于有机分子，诸如荧光蛋白或荧光小有机分子，和无机分子。荧光材料的实例包括但不限于伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯、藻红蛋白、绿色荧光蛋白(gfp)及其衍生物或量子点。
322、发光材料的实例包括但不限于，鲁米诺。
323、磁性试剂的实例包括钆；且合适的放射性材料的实例包括125i、131i、35s或3h。
324、将分子与抗体或其抗原结合片段偶联的技术是本领域熟知的。通常，核酸分子分别通过n-羟基琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺官能团与抗体或其片段上的赖氨酸或半胱氨酸共价连接。据报道，使用工程化半胱氨酸或非天然氨基酸掺入的偶联方法可改善偶联物的均质性。
325、本发明还涉及上文所述的双特异性抗体或抗原结合片段。
326、本发明还涉及上文所述的未偶联的抗体或抗原结合片段。
327、本发明的另一个目的是分离的核酸，其编码上文所述的抗体或其抗原结合片段或融合蛋白。
328、如本文所用，“分离的核酸”意欲是指与其他基因组dna序列以及天然伴随天然序列的蛋白质或复合物(诸如核糖体和聚合酶)基本上分离的核酸。该术语包括从其天然环境中除去的核酸序列，包括重组或克隆的dna分离物和化学合成的类似物，或通过异源系统生物合成的类似物。基本上纯的核酸包括分离形式的核酸。当然，这是指最初分离的核酸，并不排除后来人工添加到分离的核酸中的基因或序列。
329、在一个实施方式中，所述分离的核酸是纯化的。
330、在一个实施方式中，所述分离的核酸纯化为：
331、(1)按重量计大于80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％
332、或更多的核酸，如通过吸光度方法或荧光方法(例如，通过测量在260和280nm处的吸光度的比率(a260/280))测定，且最优选地按重量计大于96％、97％、98％或99％；或
333、(2)通过琼脂糖凝胶电泳和用嵌入剂，诸如溴化乙锭、sybr green、gelgreen等显示的均一性。
334、在一个实施方式中，所述核酸至少编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或轻链可变区。
335、在一个实施方式中，所述核酸编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的可变区和恒定区。
336、在一个实施方式中，所述核酸可以在分开的核酸或同一核酸分子上编码抗体或其抗原结合片段的重链和轻链。
337、在一个实施方式中，所述核酸包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vh的序列，或由其组成。
338、在一个实施方式中，所述核酸包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vh的序列，或由其组成，其中所述序列选自下组：包含seq id no:17、seq id no:19以及与seqid no:17和19具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成。
339、seq id no:17
340、caggtccaactgcagcaacctgggtctgagctggtgaggcctggagct
341、tcagtgaggctgtcctgcaaggcttctggctacacattcaccagctact
342、ggatgcactgggtgaggcagaggcatggacaaggccttgagtggattg
343、gaaatatttatcctggtagtggttttactaattacgatgagaaattcaag
344、aacaagggcacactgactgtagacacatcctccagtacagcctacatgc
345、acctcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgttcattg
346、gacgaagggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctct
347、gca
348、seq id no:19
349、caggtgcagctgaagcagtcaggacctggcctagtgcagccctca
350、cagagcctgtccataatgtgcacagtctctggtttctcattaacta
351、gctatggtttacactgggttcgccagtctccaggaaagggtctgg
352、agtggctgggagtgatatggagaggtggaaacacagactacaatg
353、cagatttcatgtccagactgaccatcaccaaggacaattccaaga
354、gccaagttttctttaaaatgaacagtctgcaagctgatgacactgc
355、cgtttactactgtgtcaaaaatggcggtaactccaaggactatgct
356、ttggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca
357、在一个实施方式中，所述核酸包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vl的序列，或由其组成。
358、在一个实施方式中，所述核酸包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vl的序列，或由其组成，其中所述序列选自下组：包含seq id no:18、seq id no:20以及与seqid no:18和20具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成。
359、seq id no:18
360、gacatccaaatgaaccagtctccatccagtctgtctgcatccctcggag
361、acacaattaccatcacttgccgtgccagtcagggcattaatatttggtta
362、aactggtaccagcagaaaccaggaaatattcctaaacgattgatctata
363、aggcttccaacttgcacacaggagtcccaccaaggtttagaggcagtg
364、gatctggaacagatttcacattaactatcagcagcctacagcctgaaga
365、cattgccacttactactgtctacagagtcaaagttatccattcacgttcg
366、gctcggggacaaagttggaaattaga
367、seq id no:20
368、aacattgtaatgacccaatctcccaaatccatgtccatgtcagtaggag
369、agagggtcaccttgagctgcaaggccagtgagaatgtgggtatttatgt
370、atcctggtatcaacagaaaccagagcagtctcctaaactgctgatatac
371、gggtcatccaaccggtacactggggtccctgatcgcttcacaggcagtg
372、gatctgcaacagatttcactctgatcatcagcagtgttcaggctgaaga
373、ccttgcagattatcactgtggacagagttacagttatccgtacacgttcg
374、gaggggggaccaagctggaaataaaa
375、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含以下或由以下组成：
376、-编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vh的序列；以及
377、-编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vl的序列。
378、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含以下或由以下组成：
379、-编码包含序列seq id no:17或由其组成的vh的序列；以及
380、-编码包含序列seq id no:18或由其组成的vl的序列。
381、在一个实施方式中，所述核酸编码21c8抗体的vh和vl。
382、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含以下或由以下组成：
383、-编码包含序列seq id no:19或由其组成的vh的序列；以及
384、-编码包含序列seq id no:20或由其组成的vl的序列。
385、在一个实施方式中，所述核酸编码22b12抗体的vh和vl。
386、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的完全或基本上完全的人ch和/或cl的序列。在这类实施方式中，恒定区可以源自任何人抗体恒定区。
387、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的完全或基本上完全的鼠ch和/或cl的序列。在这类实施方式中，恒定区可以源自任何鼠抗体恒定区。
388、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含编码根据本发明的嵌合抗体或其抗原结合片段的重链的序列，或由其组成。在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含编码本发明的嵌合抗体或其抗原结合片段的轻链的序列，或由其组成。
389、在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含编码根据本发明的人源化抗体或其抗原结合片段的重链的序列，或由其组成。在一个实施方式中，根据本发明的核酸包含编码根据本发明的人源化抗体或其抗原结合片段的轻链的序列，或由其组成。
390、通常，所述核酸是dna或rna分子，其可包含在任何合适的载体中，例如质粒、粘粒、附加体、人工染色体、噬菌体或病毒载体。
391、因此，本发明的另一个目的是包含上文所述的核酸的表达载体。
392、术语“载体”、“克隆载体”和“表达载体”是指可以将dna或rna序列(例如，外源基因)引入宿主细胞的载体，从而转化宿主并促进所引入序列的表达(例如，转录和翻译)。这类载体可以包含调节元件，诸如启动子、增强子、终止子等，以在施用于宿主时引起或指导所述蛋白质或抗体或其抗原结合片段的表达。用于动物细胞表达载体的启动子和增强子的实例包括sv40的早期启动子和增强子、moloney小鼠白血病病毒的ltr启动子和增强子、免疫球蛋白h链的启动子和增强子等。可使用用于动物细胞的任何表达载体，只要可以插入并表达编码蛋白质、抗体或其片段的基因。合适载体的实例包括page107、page103、phsg274、pkcr、psg1βd2-4等。质粒的其他实例包括含有复制起点的复制质粒，或整合质粒，例如puc、pcdna、pbr等。病毒载体的其他实例包括腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和aav载体。这种重组病毒可以通过本领域已知的技术产生，诸如通过转染包装细胞或通过用辅助质粒或病毒瞬时转染。病毒包装细胞的典型实例包括pa317细胞、psicrip细胞、gpenv+细胞、293细胞等。本领域中存在产生这种复制缺陷型重组病毒的详细方案。
393、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vh的序列，其与调节元件可操作地连接。
394、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含选自下组的序列：seq id no:17，seq id no:19，以及与seq id no:17和19具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成，其与调节元件可操作地连接。
395、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vl的序列，其与调节元件可操作地连接。
396、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含选自下组的序列：seq id no:18，seq id no:20，以及与seq id no:18和20具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成，其与调节元件可操作地连接。
397、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含：
398、-编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vh的序列，其与调节元件可操作地连接；以及
399、-编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的vl的序列，其与调节元件可操作地连接。
400、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含：
401、-编码vh的序列，其与调节元件可操作地连接，所述vh包含序列seq id no:17或与seq id no:17具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成，以及
402、-编码vl的序列，其与调节元件可操作地连接，所述vl包含序列seq id no:18或与seq id no:18具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成。
403、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含：
404、-编码vh的序列，其与调节元件可操作地连接，所述vh包含序列seq id no:19或与seq id no:19具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成，以及
405、-编码vl的序列，其与调节元件可操作地连接，所述vl包含序列seq id no:20或与seq id no:20具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的任何序列，或由其组成。
406、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的ch的序列，其与调节元件可操作地连接，其中所述ch源自任何的人抗体ch。
407、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的cl的序列，其与调节元件可操作地连接，其中所述cl可源自任何人抗体cl。
408、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的ch的序列，其与调节元件可操作地连接，其中所述ch可源自任何鼠抗体ch。
409、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的cl的序列，其与调节元件可操作地连接，其中所述cl可源自任何鼠抗体cl。
410、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的嵌合抗体或其抗原结合片段的重链的序列，其与调节元件可操作地连接。
411、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的嵌合抗体或其抗原结合片段的轻链的序列，其与调节元件可操作地连接。
412、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的人源化抗体或其抗原结合片段的重链的序列，其与调节元件可操作地连接。
413、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体包含编码根据本发明的人源化抗体或其抗原结合片段的轻链的序列，其与调节元件可操作地连接。
414、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体是单顺反子的。
415、“单顺反子”是指，在单个表达载体中表达单个核酸。
416、在一个实施方式中，根据本发明的表达载体是多顺反子的。
417、“多顺反子”是指，在单个表达载体中表达至少两种或多种核酸。
418、本发明的另一个目的是分离的宿主细胞，其包含上文所述的表达载体。
419、所述宿主细胞可用于重组生产根据本发明的抗体或其抗原结合片段。
420、在一个实施方式中，宿主细胞可以是原核细胞、酵母或真核细胞，优选哺乳动物细胞，例如：sv40转化的猴肾cv1系(cos-7，atcc crl1651)；人胚肾细胞系(293或293细胞亚克隆，用于悬浮培养生长，graham et al.,j.gen.virol.36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(bhk，atcc ccl10)；中国仓鼠卵巢细胞/-dhfr(cho，urlaub et al.,proc.natl.acad.sci.usa77:4216(1980))；小鼠足细胞(tm4，mather,biol.reprod.23:243-251(1980))；小鼠骨髓瘤细胞sp2/0-ag14(atcc crl1581；atcc crl8287)或nso(hpa培养物保藏中心no.85110503)；猴肾细胞(cvl atcc ccl 70)；非洲绿猴肾细胞(vero-76，atcc crl-1587)；人宫颈癌细胞(hela，atcc ccl 2)；犬肾细胞(mdck，atcc ccl 34)；水牛大鼠肝细胞(brl 3a，atcc crl1442)；人肺细胞(w138，atcc ccl 75)；人肝细胞(hep g2，hb8065)；小鼠乳腺肿瘤(mmt 060562，atcc ccl51)；tri细胞(mather et al.,annalsn.y.acad.sci.383:44-68(1982))；mrc 5细胞；fs4细胞；和人肝癌细胞系(hep g2)，以及dsm perc-6细胞系。适用于这些宿主细胞的表达载体通常也是本领域已知的。应注意，术语“宿主细胞”通常是指培养的细胞系。在一个实施方式中，引入编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的表达载体的所有人细胞被排除在“宿主细胞”的定义之外。
421、本发明的另一个目的是组合物，其包含上文所述的抗体或抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白，基本上由上述组成或由上述组成。
422、本发明的另一个目的是药物组合物，其包含上文所述的抗体或抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白，和至少一种药学上可接受的赋形剂，基本上由上述组成或由上述组成。
423、如本文所用，关于组合物的“基本上由……组成”意指，抗体或其抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白是所述组合物中唯一的一种具有生物活性的治疗剂或试剂。
424、术语“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。当向动物，优选哺乳动物，更优选人施用时，所述赋形剂不产生不利的、过敏的或其他不良反应。对于人施用，制剂应符合监管机构(例如fda办公室或ema)要求的无菌、致热原性以及一般安全性和纯度标准。
425、可用于本发明组合物的药学上可接受的赋形剂的实例包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白诸如人血清白蛋白，缓冲物质诸如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶体二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基物质(例如羧甲基纤维素钠)，聚乙二醇，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。
426、在一个实施方式中，根据本发明的药物组合物包含对于能够注射至受试者的制剂药学上可接受的载体。这些可以特别是等渗的、无菌的盐水溶液(磷酸一钠或磷酸二钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁等或这些盐的混合物)，或干燥的，特别是冻干的组合物，根据情况加入无菌水或生理盐水后，可以配制可注射溶液。
427、本发明的另一个目的是药物，其包含如上所述的抗体或抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白，基本上由上述组成，或由上述组成。
428、在一个实施方式中，配制根据本发明的组合物、药物组合物或药物，用于施用于受试者。
429、在一个实施方式中，根据本发明的组合物、药物组合物或药物通过胃肠外、通过吸入喷雾、直肠、鼻腔或经由植入式储液器施用。
430、在一个实施方式中，所述组合物、药物组合物或药物通过注射施用，包括但不限于皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。
431、适用于注射的形式的实例包括但不限于溶液，例如无菌水溶液、凝胶、分散液、乳液、悬浮液、适用于在使用前添加液体后制备溶液或悬浮液的固体形式，例如粉末、脂质体形式等。
432、本发明的组合物、药物组合物或药物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂配制。无菌可注射制剂还可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，天然的药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙烯化形式。这些油溶液剂或混悬剂还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或类似分散剂，通常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳剂和混悬剂)。其他常用的表面活性剂，诸如吐温、失水山梨醇脂肪酸酯和其他乳化剂或生物利用度增强剂，其常用于制备药学上可接受的固体、液体或其他剂型，也可用于制剂目的。
433、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸、表达载体、组合物、药物组合物或药物以治疗有效量施用于有需要的受试者。
434、然而，应理解，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸、表达载体、组合物、药物组合物或药物的总日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括待治疗的疾病和疾病的严重程度；使用的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体的活性；受试者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；使用的特异性抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗持续时间；与所用的特异性抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体组合或同时使用的药物；以及医学领域公知的类似因素。例如，本领域技术人员可以以低于达到预期治疗效果所需的水平开始化合物的剂量，然后逐渐增加剂量直至达到预期效果。每次治疗所需的总剂量可以以多剂量或以单剂量施用。
435、根据本发明的抗体或其抗原结合片段的日剂量可以在10-1000mg/成人/天的宽范围内。
436、本发明还涉及上文所述的抗体或抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白，其用作药物，即用于治疗有需要的受试者的疾病、紊乱或病症。
437、本发明还涉及上文所述的组合物、药物组合物或药物，其用作药物，即用于治疗有需要的受试者的疾病、紊乱或病症。
438、本发明还涉及用于治疗有需要的受试者中的疾病、紊乱或病症的方法，其包括向所述受试者施用上文所述的抗体或抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白。
439、本发明还涉及用于治疗有需要的受试者中的疾病、紊乱或病症的方法，其包括向所述受试者施用如上文所述的组合物、药物组合物或药物。
440、本发明还涉及上文所述的抗体或抗原结合片段、核酸、表达载体或融合蛋白在制备用于治疗有需要的受试者中的疾病、紊乱或病症的药物中的用途。
441、本发明可治疗的疾病、紊乱或病症包括但不限于癌症、感染性疾病、炎症性疾病和/或自身免疫性疾病。本发明可治疗的疾病、紊乱或病症的另一个实例是阵发性睡眠性血红蛋白尿症。
442、如本文所用，术语“癌症”具有其在本领域中的一般含义且包括但不限于实体瘤和血源性肿瘤。术语癌症包括但不限于皮肤、组织、器官、骨、软骨、血液和血管的疾病。术语“癌症”还包括原发性和转移性癌症。
443、本发明中可治疗的癌症的实例包括但不限于，来自膀胱、血液、骨、骨髓、脑、乳腺、结肠、食道、胃肠、牙龈、头、肾、肝、肺、鼻咽、颈、卵巢、前列腺、皮肤、胃、睾丸、舌、子宫内膜、胰腺或子宫的癌细胞。
444、此外，癌症可选自以下非限制性列表：恶性肿瘤；未分化癌；巨细胞癌和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母细胞癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管癌；肝细胞癌；混合性肝细胞癌和胆管癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉中的腺癌；与家族性结肠息肉病相关的腺癌；实体癌；恶性类癌瘤；鳃-肺泡腺癌；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸细胞癌；嗜酸性腺癌；嗜碱性细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡性腺癌；乳头状和滤泡性腺癌；无包膜硬化癌；肾上腺皮质癌；子宫内膜样癌；皮肤附属器癌；顶泌腺癌；皮脂腺癌；蜡样腺癌；粘液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；粘液性囊腺癌；粘液性腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；乳腺佩吉特病；腺泡细胞癌；腺鳞癌；腺癌伴鳞状化生；恶性胸腺瘤；卵巢恶性间质瘤；恶性卵泡膜瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性成纤维细胞瘤；足细胞癌；恶性间质细胞瘤；恶性脂质细胞瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳房外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；血管肉瘤；恶性黑素瘤；无色素性黑素瘤；浅表扩散性黑素瘤；巨大色素性痣中的恶性黑素瘤；上皮样细胞黑素瘤；恶性蓝痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维组织细胞瘤；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；肺泡横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合肿瘤；苗勒式管混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间质瘤；恶性勃勒纳肿瘤；恶性叶状肿瘤；滑膜肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎癌；恶性畸胎瘤；卵巢恶性甲状腺肿；绒毛膜癌；恶性中肾瘤；血管肉瘤；恶性血管内皮瘤；卡波西肉瘤；恶性血管外皮细胞瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；近皮质骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性软骨母细胞瘤；间叶性软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤文氏肉瘤；牙源性恶性肿瘤；成釉细胞性牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；成釉细胞的纤维肉瘤；恶性松果体瘤；脊索瘤；恶性神经胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原生质星形细胞瘤；纤维性星形细胞瘤；星形母细胞瘤；胶质母细胞瘤；少突神经胶质瘤；少突胶质细胞瘤；原始神经外胚层；小脑肉瘤；神经节神经母细胞瘤；成神经细胞瘤；成视网膜细胞瘤；嗅觉神经源性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金病；霍奇金淋巴瘤；副肉芽肿；恶性淋巴瘤-小淋巴细胞；恶性弥漫性大细胞淋巴瘤；恶性滤泡性淋巴瘤；蕈样肉芽肿病；其他特定的非霍奇金氏淋巴瘤；恶性组织细胞增多症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增生性小肠疾病；白血病；淋巴样白血病；浆细胞白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞白血病；髓样白血病；嗜碱性白血病；嗜酸性白血病；单核细胞白血病；肥大细胞白血病；巨核细胞白血病；髓样肉瘤；和毛细胞白血病。
445、在一个实施方式中，所述癌症是乳腺癌。可用本发明的抗体或抗原结合片段治疗的乳腺癌亚型的实例包括但不限于，管腔a型乳腺癌、管腔b型乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)、her2阳性乳腺癌。
446、如本文所用，管腔a型乳腺癌为雌激素受体和/或孕酮受体呈阳性，her2呈阴性，且具有低蛋白ki-67(也称为mki67或抗原ki-67)水平。如本文所用，管腔b型乳腺癌为雌激素受体和/或孕酮受体呈阳性，her2呈阳性，且具有高ki-67水平。如本文所用，tnbc为雌激素受体和孕酮受体呈阴性，且her2呈阴性。如本文所用，her2-阳性乳腺癌为雌激素受体和孕酮受体呈阴性，且her2呈阳性。
447、在一个实施方式中，所述癌症是选自包含或由其组成的下组的乳腺癌：管腔a型乳腺癌、管腔b型乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)和her2阳性乳腺癌。
448、在一个实施方式中，所述癌症是管腔a型乳腺癌。在一个实施方式中，所述癌症是管腔b型乳腺癌。在一个实施方式中，所述癌症是tnbc。在一个实施方式中，所述癌症是her2阳性乳腺癌。
449、如本文所用，术语“感染性疾病”包括由病毒、细菌、原生动物、霉菌或真菌引起的任何感染。
450、在一些实施方式中，病毒感染包括一种或多种病毒的感染，所述病毒选自下组但不限于：沙粒病毒科、星状病毒科、双rna病毒科、溴病毒科、布尼亚病毒科、杯状病毒科、长线形病毒科、豇豆花叶病毒科、囊病毒科、黄病毒科、线性病毒科、肝炎病毒科、光滑噬菌体科、黄槀病毒科、单股负链病毒目、花叶病毒、巢病毒目、诺达病毒科、正粘病毒科、小双节rna病毒科、小rna病毒科、马铃薯y病毒科、呼肠孤病毒科、逆转录病毒科、伴生病毒科、纤细病毒属、披膜病毒科、番茄丛矮病毒科、整体病毒科、芜菁发黄镶嵌病毒科、嗜肝dna病毒科、疱疹病毒科、副粘病毒科或乳头瘤病毒科。rna病毒的相关分类学家族包括但不限于星状病毒科、双rna病毒科、溴病毒科、杯状病毒科、长线形病毒科、豇豆花叶病毒科、囊病毒科、黄病毒科、线性病毒科、肝炎病毒科、光滑噬菌体科、黄槀病毒科、单股负链病毒目、花叶病毒、巢病毒目、诺达病毒科、正粘病毒科、小双节rna病毒科、小rna病毒科、马铃薯y病毒科、呼肠孤病毒科、逆转录病毒科、伴生病毒科、纤细病毒属、披膜病毒科、番茄丛矮病毒科、整体病毒科和芜菁发黄镶嵌病毒科病毒。
451、在一些实施方式中，所述病毒感染包括一种或多种病毒的感染，所述病毒选自下组但不限于：腺病毒、alfuy病毒、banzi病毒、牛腹泻病毒、冠状病毒、柯萨奇病毒、克里米亚-刚果病毒、登革热病毒、埃博拉病毒、脑炎病毒(包括日本脑炎病毒、加利福尼亚脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、蜱传脑炎病毒)、瓜纳里多病毒、汉坦病毒、肝炎病毒、伊列乌斯病毒、免疫缺陷病毒、流感病毒包括甲型和乙型流感病毒(包括人、禽和猪)以及副流感病毒、胡宁病毒、kokobera病毒、昆津病毒、基萨努尔森林病病毒、拉克罗斯病毒、拉沙病毒、羊跳跃病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、麻疹病毒、马丘波病毒、马尔堡病毒、默里谷病毒、帕钦达病毒、皮钦德病毒、脊髓灰质炎病毒、波瓦桑病毒、蓬塔托罗病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、裂谷热病毒、罗西病毒、严重急性呼吸道综合征(sars)、天花病毒、塔卡里伯病毒、西尼罗河病毒和黄热病病毒。
452、可在本发明中治疗的细菌感染的实例包括但不限于由以下引起的感染：葡萄球菌属；链球菌属，包括酿脓链球菌(s.pyogenes)；肠球菌；芽孢杆菌，例如炭疽芽孢杆菌(bacillus anthracis)，和乳杆菌；李斯特菌；白喉棒状杆菌(corynebacteriumdiphtheriae)；加德纳菌(gardnerella)，诸如加德纳杆菌(g.vaginalis)；诺卡氏菌；链霉菌；普通嗜热温放线菌(thermoactinomyces vulgaris)；密螺旋体；弯曲杆菌，假单胞菌，例如，铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)；军团菌；奈瑟菌，例如淋病奈瑟菌(n.gonorrhoeae)和脑膜炎奈瑟菌(n.meningitides)；黄杆菌，例如脑膜炎败血性黄杆菌(f.meningosepticum)和臭黄杆菌(f.odoraturn)；布鲁氏杆菌；博德特氏杆菌，例如百日咳博德特氏杆菌(b.pertussis)和支气管败血博德特氏杆菌(b.bronchiseptica)；大肠杆菌(escherichia)，例如大肠杆菌(e.coli)，克雷伯氏菌；肠杆菌，沙雷氏菌，例如粘质沙雷氏菌(s.marcescens)和液态沙雷氏菌(s.liquefaciens)；爱德华氏菌属；变形杆菌，例如普通变形杆菌(p.mirabilis)和奇异变形杆菌(p.vulgaris)；链杆菌；立克次氏体，例如r.fickettsfi，衣原体，例如鹦鹉热衣原体(c.psittaci)和沙眼衣原体(c.trachornatis)；分枝杆菌，例如结核分枝杆菌(m.tuberculosis)，胞内分枝杆菌(m.intracellulare)，绒毛分枝杆菌(m.folluiturn)，麻风分枝杆菌(m.laprae)，鸟分枝杆菌(m.avium)，牛分枝杆菌(m.bovis)，非洲分枝杆菌(m.africanum)，堪萨斯分枝杆菌(m.kansasii)，以及m.lepraernurium；和诺卡氏菌。
453、可在本发明中治疗的原生动物感染的实例包括但不限于，由利什曼原虫(leishmania)、可可地亚虫(kokzidioa)和锥虫(trypanosoma)引起的感染。
454、感染性疾病的完整列表可在疾病控制中心(center for disease control,cdc)的国家传染病中心(national center for infectious disease,ncid)的网站(万维网(www)atcdc.gov/ncidod/diseases/)上发现，该列表通过引用并入本文。
455、如本文所用，术语“炎症性疾病”包括特征在于炎症的大量紊乱和病症。
456、炎症性疾病的实例包括但不限于关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、银屑病关节炎、幼年特发性关节炎、幼年类风湿性关节炎、荨麻疹性关节炎、痛风、慢性多关节炎、肩周炎、颈关节炎、腰骶关节炎、肠病性关节炎和强直性脊柱炎、哮喘、皮炎、银屑病、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、青少年皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、纤维化、囊性纤维化、肺纤维化、肝硬化、心内膜纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、肾源性纤维化、瘢痕疙瘩、硬皮病、关节纤维化、移植后晚期和慢性实体器官排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、天疱疮、寻常天疱疮、疱疹样天疱疮、增殖性天疱疮、iga天疱疮、红斑天疱疮、大疱性天疱疮、妊娠天疱疮、粘膜皮肤病、结节性天疱疮、线性iga大疱性皮肤病、大疱性扁平苔藓、获得性大疱性表皮松解症、自身免疫性糖尿病、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病血管病变、眼部炎症、葡萄膜炎、鼻炎、缺血再灌注损伤、血管成形术后再狭窄、慢性阻塞性肺病(copd)、肾小球肾炎、格雷夫斯病、胃肠过敏、结膜炎、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、小动脉疾病、急性播散性脑脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、系统性硬化、抗磷脂综合征、舍格伦综合征、自身免疫性溶血性贫血、结肠炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病(ibd)、栓塞、肺栓塞、动脉栓塞、静脉栓塞、过敏性炎症、心血管疾病、移植物相关疾病、移植物抗宿主病(gvhd)与移植物移植排斥、慢性排斥和组织或细胞同种异体移植物或异种移植物相关的病症、自身免疫性疾病、创伤后退化、中风、移植排斥、过敏性病症和超敏反应，例如过敏性鼻炎、过敏性湿疹等，皮肤病、皮肤炎症性疾病或其任何组合。
457、如本文所用，术语“自身免疫性疾病”是指免疫系统存在缺陷，引起对自身组织的免疫应答的疾病。
458、自身免疫性疾病的实例包括但不限于，狼疮(例如红斑狼疮、狼疮性肾炎)，桥本氏甲状腺炎，韦格纳氏病；原发性粘液水肿，格雷夫斯病，恶性贫血，自身免疫性萎缩性胃炎，阿迪森氏病，糖尿病(例如胰岛素依赖型糖尿病、i型糖尿病、ii型糖尿病)，肺动脉高压综合征，重症肌无力，天疱疮，肠道炎性病症诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎；交感性眼炎，自身免疫性葡萄膜炎，多发性硬化，自身免疫性溶血性贫血，特发性血小板减少，原发性胆汁性肝硬化，慢性活动性肝炎，溃疡性结肠炎，干燥综合征，关节炎病症诸如类风湿性关节炎，银屑病关节炎，强直性脊柱炎和幼年特发性关节炎；多发性肌炎，硬皮病，银屑病，原发性硬化性胆管炎；哮喘，移植排斥(宿主抗移植物疾病)；移植物抗宿主病和混合性结缔组织病。
459、如本文所用，术语“阵发性睡眠性血红蛋白尿症”或“pnh”具有其在本领域中的一般含义，且是指获得性克隆造血干细胞病症，特征是红细胞溶血性贫血、骨髓衰竭和频繁血栓形成。在一些实施方式中，受试者未发生piga基因(磷脂酰肌醇聚糖锚生物合成a类，geneid：5277)突变。
460、应理解，取决于本发明的抗体或其抗原结合片段的效应子功能，可以通过不同的机制介导疾病、紊乱或病症的治疗。
461、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段介导adcc、adcp和/或cdc，可以靶向并耗尽它们所结合的表达cd160-tm的细胞。
462、在一个实施方式中，所述抗体或其片段的施用可导致表达cd160-tm的细胞的耗尽(例如，导致10％、20％、30％、40％、50％、60％或更高数量的cd160-tm+nk细胞的消除或减少)，例如表达cd160-tm的肿瘤细胞。
463、如本文所用，关于细胞或细胞群的术语“耗尽”是指受试者中所述细胞数量可测量的减少。减少可以是至少约10％，例如至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多。在一些实施方式中，所述术语是指受试者或样品中的细胞数量减少至低于可检测限度。
464、因此，本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中耗尽表达cd160-tm同种型的细胞群的方法，包括向受试者递送治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段介导adcc、adcp和/或cdc。
465、本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中耗尽表达cd160-tm同种型的恶性nk细胞群的方法，包括向受试者递送治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段介导adcc、adcp和/或cdc。
466、本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中耗尽表达由21c8或22b12抗体识别的表位的细胞群的方法，其包括向受试者递送治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段介导adcc、adcp和/或cdc。
467、本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中治疗其中癌细胞表达cd160-tm的癌症的方法，包括向受试者递送治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段介导adcc、adcp和/或cdc。
468、本发明的另一个目的涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗有需要的受试者的癌症，其中癌细胞表达cd160-tm，其中所述抗体或其片段介导adcc、adcp和/或cdc。
469、在一个实施方式中，所述癌症是实体瘤。在一个实施方式中，所述癌症是血液肿瘤，即其中癌细胞存在于体液中，诸如血液或骨髓。
470、其中癌细胞表达cd160-tm的癌症的实例包括但不限于，nk白血病或nk淋巴瘤，例如结外和非结外nk/t淋巴瘤；nk细胞源性恶性肿瘤；急性nk细胞白血病和外周t细胞淋巴瘤(ptcl)，例如外周t细胞淋巴瘤非特指型(ptcl-nos)。
471、其中癌细胞表达cd160-tm的癌症的实例包括但不限于乳腺癌，例如管腔a型乳腺癌、管腔b型乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)和her2阳性乳腺癌。
472、因此，在一个实施方式中，所述癌症是乳腺癌。在一个实施方式中，癌症是选自包含或由其组成的下组的乳腺癌：管腔a型乳腺癌、管腔b型乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)和her2-阳性乳腺癌。
473、在一个实施方式中，所述癌症是管腔a型乳腺癌。在一个实施方式中，所述癌症是管腔b型乳腺癌。在一个实施方式中，所述癌症是tnbc。在一个实施方式中，所述癌症是her2阳性乳腺癌。
474、本发明的另一个目的是结合人cd160-tm的抗体或其片段，用于治疗ptcl，例如外周t细胞淋巴瘤非特指型(ptcl-nos)。
475、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段不介导adcc、adcp和/或cdc，可以靶向并活化它们所结合的表达cd160-tm的细胞。
476、在一个实施方式中，所述抗体或其片段的施用不直接或间接导致表达cd160-tm多肽的nk细胞的耗尽(例如，不导致cd160-tm+nk细胞数量的10％、20％、30％、40％、50％、60％或更高的消除或减少)。
477、在一个实施方式中，所述抗体或其片段的施用导致nk细胞活性或nk细胞效应子功能的增强或改善。
478、因此，本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中增强nk细胞活性或nk细胞效应子功能，特别是nk细胞杀伤活性的方法，包括向受试者施用治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
479、如本文所用，“nk细胞”是指，参与先天或非常规免疫的淋巴细胞亚群。nk细胞可以通过某些特征和生物学特性来鉴定，诸如人nk细胞的特异性表面抗原的表达(包括cd56和/或cd16)，细胞表面上α/β或γ/δtcr复合物的缺失，通过特异性细胞溶解机制的活化而结合并杀死不能表达“自身”mhc/hla抗原的细胞的能力，杀死表达nk活化受体的配体的肿瘤细胞或其他患病细胞的能力，以及释放称为细胞因子的刺激或抑制免疫应答的蛋白质分子的能力(“nk细胞活性”)。术语nk细胞也包括nk细胞的任何亚群。在本发明的上下文中，“活性”nk细胞是指生物活性nk细胞，包括具有裂解靶细胞或增强其他细胞的免疫功能的能力的nk细胞。例如，“活性”nk细胞能够杀死表达活化nk受体的配体的细胞和/或不能表达由nk细胞上的kir识别的mhc/hla抗原的细胞。
480、根据本发明的抗体或抗原结合片段增强nk细胞活性，特别是nk细胞杀伤活性的能力可以通过本领域熟知的任何测定方法来确定。通常，所述测定是体外测定，其中将nk细胞与靶细胞(例如，被nk细胞识别和/或裂解的靶细胞)接触。例如，可选择具有增加nk细胞特异性裂解的能力的抗体或抗原结合片段，其增加量比在与根据本发明的抗体或其片段接触的nk细胞或nk细胞系相同的效应物:靶细胞的比例下获得的特定裂解量增加超过约20％，优选至少约30％，至少约40％，至少约50％或更多。通常，nk细胞细胞毒性可以通过实施例部分中描述的任何测定来确定，诸如i)使用活性染料染色体外测定评估nk细胞诱导的靶细胞裂解，或ii)体外测定评估nk细胞活化标记物的表达(诸如cd107a表达)。nk细胞的细胞毒性也可以通过细胞毒性的经典体外铬释放试验来测量。效应细胞可以是来自健康供体的新鲜pb-nk或nk92细胞系。所述靶细胞可以是鼠肥大细胞瘤p815细胞，ebv感染的b细胞系，或其他细胞系，诸如k562细胞。
481、因此，选择根据本发明的抗体或抗原结合片段，因为其引起nk细胞对靶细胞(感染细胞、肿瘤细胞、促炎细胞等)的反应性或细胞毒性增加，nk细胞中活化，活化标记(例如cd107表达)和/或ifnγ产生增加，和/或这种活化、反应、细胞毒性和/或活化的nk细胞的体内频率增加。
482、本发明的另一个目的涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其用于在有需要的受试者中治疗癌症，其中癌细胞不表达cd160-tm，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
483、本发明的另一个目的涉及治疗有需要的受试者中其中癌细胞不表达cd160-tm的癌症的方法，包括向受试者递送治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
484、上文提供了癌症的实例。
485、本发明的另一个目的涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其用于在有需要的受试者中治疗感染性疾病，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
486、下文提供感染性疾病的实例。
487、本发明的另一个目的涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其用于在有需要的受试者中治疗炎症性疾病，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
488、下文提供炎症性疾病的实例。
489、本发明的另一个目的涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其用于在有需要的受试者中治疗自身免疫性疾病，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
490、下文提供自身免疫性疾病的实例。
491、本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中治疗感染性疾病、炎症性疾病和/或自身免疫性疾病的方法，包括向受试者递送治疗有效量的如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
492、本发明的另一个目的涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其用于在有需要的受试者中治疗阵发性睡眠性血红蛋白尿症(pnh)，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
493、本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中治疗pnh的方法，其包括向所述受试者递送治疗有效量的上文所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
494、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体是施用于有需要的受试者的唯一活性剂或治疗剂。
495、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体与至少一种其他治疗剂组合使用。
496、在一个实施方式中，至少一种其他的治疗剂和根据本发明的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体的施用是同时、单独或依次进行的。
497、在一个实施方式中，至少一种其他治疗剂和根据本发明的抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、核酸或表达载体的同时施用视情况作为一种组合物，或作为分开的组合物施用。
498、在一个实施方式中，至少一种其他的治疗剂是可用于治疗上文所述的疾病、紊乱或病症的治疗剂。
499、其他的治疗剂的实例包括但不限于，化疗剂、靶向癌症疗法、放疗、免疫治疗剂或抗癌免疫原、抗癌抗体、细胞毒性剂、抗血管生成剂、细胞周期控制/凋亡调节剂、激素调节剂和其他免疫抑制和/或抗炎药(选自皮质激素类，诸如糖皮质激素)。
500、在一个实施方式中，所述至少一种其他治疗剂是nk细胞活化受体的天然配体，或结合并活化除cd160-tm以外的nk细胞活化受体的抗体。在一个实施方式中，所述试剂是增加靶细胞(例如，被感染细胞或肿瘤细胞)表面上nk细胞活化受体的天然配体的存在的试剂。
501、在一个实施方式中，其中抗体或其抗原结合片段不介导adcc、cdc和/或adcp，所述抗体或其片段与其他的治疗剂组合使用，所述其他的治疗剂(i)是nk细胞活化的天然配体或结合并活化除cd160-tm以外的nk细胞活化受体的抗体，和/或(ii)增加靶细胞表面上nk细胞活化受体的天然配体的存在。
502、nk细胞活化受体包括，例如nkg2d或活化kir受体(kir2ds受体、kir2ds2、kir2ds4)。
503、如本文所用，术语“活化nk受体”是指nk细胞表面上的任何分子，当其被刺激时，引起与nk活性相关的本领域已知的任何特性或活性的可测量的增加，诸如细胞因子(例如ifn-γ和tnf-α)的产生、细胞内游离钙水平的增加，如例如本说明书中别处所述的重定向杀伤测定中靶向细胞的能力，或刺激nk细胞增殖的能力。术语“活化nk受体”包括但不限于活化形式或kir蛋白(例如kir2ds蛋白)、nkg2d、il-2r、il-12r、il-15r、il-18r和il-21r。作为活化受体激动剂的配体的实例包括例如il-2、il-15、il-21多肽。
504、在一个实施方式中，所述至少一种其他的治疗剂是对cd137具有特异性的抗体。如本文所用，术语“cd137”具有其在本领域中的一般含义，也可称为ly63、ila或4-1bb。cd137是肿瘤坏死因子(tnf)受体家族的成员。该受体家族的成员及其结构相关的配体是多种生理过程的重要调节剂，且在免疫应答的调节中起重要作用。cd137由活化的nk细胞、t和b淋巴细胞以及单核细胞/巨噬细胞表达。该基因编码在胞外结构域(该受体家族的特征)、跨膜区和含有潜在磷酸化位点的短n-端胞质部分中具有3个富含半胱氨酸基序的255个氨基酸的蛋白质。原代细胞中的表达是严格活化依赖性的。所述受体的配体是tnfsf9。据报道，人cd137仅与其配体结合。激动剂包括天然配体(tnfsf9)、适体(参见mcnamara et al.(2008)j.clin.invest.1 18:376-386)，和抗体。
505、在一个实施方式中，至少一种其他的治疗剂是通过adcc诱导表达所述抗体结合的抗原的细胞死亡的抗体。
506、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段不介导adcc、adcp和/或cdc，所述抗体或其片段与通过adcc诱导表达所述抗体结合的抗原的细胞死亡的抗体联合使用。
507、在一个实施方式中，所述第二抗体对细胞表面抗原，例如膜抗原具有特异性。
508、在一些实施方式中，所述第二抗体对肿瘤抗原(例如，由肿瘤细胞特异性表达的分子)，诸如cd20、cd52、erbb2(或her2/neu)、cd33、cd22、cd25、muc-1、cea、kdr、αvβ3等，特别是淋巴瘤抗原(例如，cd20)具有特异性。
509、因此，本发明还提供了增强抗肿瘤抗原的单克隆抗体的抗肿瘤效果的方法。在本发明的方法中，通过依次施用抗一种或多种肿瘤抗原的抗体和根据本发明的抗体或抗原结合片段，来特异性增强adcc功能，从而又增强靶细胞杀伤。
510、因此，本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中增强抗体的nk细胞adcc的方法，包括向受试者施用所述抗体，以及向受试者施用根据本发明的抗体或抗原结合片段，其中优选地根据本发明的抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
511、本发明的另一个目的涉及在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用对癌细胞抗原具有选择性的第一抗体，以及向受试者施用根据本发明的抗体或抗原结合片段，其中优选地根据本发明的抗体或其片段不介导adcc、adcp和/或cdc。
512、目前许多抗体在临床上用于治疗癌症，而其他抗体处于不同的临床发展阶段。用于本发明方法的目标抗体通过adcc起作用，且通常对肿瘤细胞具有选择性，尽管本领域技术人员认识到一些临床上有用的抗体确实作用于非肿瘤细胞，例如cd20。存在许多用于治疗b细胞恶性肿瘤的抗原和相应的单克隆抗体。一种流行的靶抗原是cd20，其存在于b细胞恶性肿瘤。利妥昔单抗是针对cd20抗原的嵌合非偶联单克隆抗体。cd20在b细胞活化、增殖和分化中具有重要的功能作用。单克隆抗体阿仑妥珠单抗靶向cd52抗原，其可用于治疗慢性淋巴细胞白血病。许多抗体靶向cd22，且最近已证明其与毒素组合在化疗耐药性的毛细胞白血病中的功效。靶向cd20的单克隆抗体还包括托西莫单抗和替伊莫单抗。可用于本发明方法的已用于实体瘤的单克隆抗体包括但不限于，依决洛单抗和曲妥珠单抗(赫赛汀)。依决洛单抗靶向在结肠癌和直肠癌中所见的17-1a抗原，且已在欧洲批准用于这些适应症。其抗肿瘤作用通过adcc、cdc和抗独特型网络的诱导来介导。曲妥珠单抗靶向her-2/neu抗原。该抗原存在于25％-35％的乳腺癌。曲妥珠单抗被认为以多种方式起作用：下调her-2受体表达、抑制过表达her-2蛋白的人肿瘤细胞的增殖、增强针对过表达her-2蛋白的肿瘤细胞的免疫募集和adcc以及下调血管生成因子。阿仑妥珠单抗(campath)可用于治疗慢性淋巴细胞白血病；结肠癌和肺癌；吉妥珠单抗(mylotarg)可用于治疗急性骨髓性白血病；替伊莫单抗(zevalin)可用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤；帕妥尤单抗(vectibix)可用于治疗结肠癌。西妥昔单抗(爱必妥)也用于本发明的方法中。所述抗体与egf受体(egfr)结合，并已用于治疗实体瘤，包括结肠癌和头颈部鳞状细胞癌(scchn)。
513、在一个实施方式中，所述至少一种其他的治疗剂是免疫检查点抑制剂(ici)。
514、各种肿瘤能够表达保护其免受免疫系统攻击的分子因子，因此能够成功地逃避免疫系统监督控制。这种“肿瘤免疫逃逸”主要是由于免疫细胞配体靶向的受体和结合位点的拮抗性阻断。免疫检查点抑制剂是特别靶向由肿瘤细胞发展的这类抑制机制的分子。
515、ici的实例包括但不限于ctla-4的抑制剂(例如伊匹木单抗和曲麦利尤单抗)、pd-1的抑制剂(例如帕博利珠单抗、信迪利单抗、纳武单抗和amp-224)、pd-l1的抑制剂(例如阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、度伐鲁单抗和bms-936559)、lag3的抑制剂(例如imp321)以及b7-h3的抑制剂(例如mga271)。
516、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段不介导adcc、adcp和/或cdc，所述抗体或其片段与至少一种免疫检查点抑制剂(ici)组合使用。
517、本发明还涉及本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段在体外或体内检测样品，优选生物样品中的cd160-tm的用途。本发明还涉及根据本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段在体外或体内检测和/或定量样品，优选生物样品中的cd160-tm的用途。
518、本发明还涉及根据本发明的抗体或其抗原结合片段，其用于体内检测受试者中表达cd160-tm的肿瘤，优选其中所述抗体或其片段与可检测标记偶联。上文提供了癌细胞表达cd160-tm的癌症的实例。上文提供了可检测标记的实例。
519、本发明还涉及体外检测样品，优选生物样品中cd160-tm的方法，包括将样品与至少一种如上所述的抗体或其抗原结合片段接触的步骤。
520、可使用根据本发明的抗体或其抗原结合片段的测定的实例包括但不限于elisa、夹心elisa、放射免疫测定(ria)、萤光活化细胞分选(facs)、组织免疫组化、蛋白质印迹和免疫沉淀。
521、本发明还涉及检测样品中cd160-tm的方法，包括将样品与根据本发明的抗体或其抗原结合片段接触的步骤，以及检测与cd160-tm结合的抗cd160-tm抗体或其片段的步骤，从而指示样品中存在cd160-tm。在一个实施方式中，所述方法是体外方法。
522、在一个实施方式中，所述样品是生物样品。生物样品的实例包括但不限于体液，优选血液，更优选血清、血浆、滑液、支气管肺泡灌洗液、痰、淋巴、腹水、尿、羊水、腹膜液、脑脊液、胸膜液、心包液和肺泡巨噬细胞、从患病组织制备的组织裂解物和提取物。
523、在一个实施方式中，样品是乳腺肿瘤组织。在一个实施方式中，所述乳腺肿瘤组织来自管腔a型乳腺癌、管腔b型乳腺癌、her2阳性乳腺癌和tnbc。
524、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段与可检测标记偶联且可以直接检测。上文提供了可检测标记的实例。
525、在一个实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段是未标记的(且称为第一/初级抗体)，且与能够结合抗cd160-tm抗体的第二抗体或其他分子组合使用，且被标记。可与所述第二抗体或其他分子结合的可检测标记的实例包括但不限于上文提供的可检测标记。
526、与现有技术的抗cd160-tm抗体相比，根据本发明的抗体或抗原结合片段可具有一个或几个以下的优点：
527、-在一些实施方式中，根据本发明的抗体或抗原结合片段不需要第二抗体来引发adcc、cdc和/或adcp；
528、-在一些实施方式中，与现有技术的cd160-tm抗体相比，根据本发明的抗体或抗原结合片段表现出增加的adcc、cdc和/或adcp；
529、-在一些实施方式中，与现有技术的cd160-tm抗体相比，根据本发明的抗体或抗原结合片段表现出增加的nk细胞活化能力或诱导增加的nk细胞诱导的裂解；
530、-在一些实施方式中，根据本发明的抗体或抗原结合片段适合于治疗用途，例如在人中；
531、-在一些实施方式中，与现有技术的cd160-tm抗体相比，根据本发明的抗体或其抗原结合片段对cd160-tm呈现增加的亲和力，特别是在elisa试验中对cd160-tm呈现增加的亲和力。
532、-在一些实施方式中，根据本发明的抗体或抗原结合片段可以检测非天然形式的cd160-tm，例如，在固定的样品或组织上；因此可用于免疫组织化学或免疫荧光应用。
技术实现思路
1.分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区(vl)包含下列互补决定区3(cdr3)：x1qsx2sypx3t(seq id no:15)，其中x1是g或l，x2是y或q，且x3是y或f。
2.根据权利要求1所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区(vh)包含以下三个互补决定区(cdr)：
3.根据权利要求1所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区(vh)包含以下三个互补决定区(cdr)：
4.根据权利要求1或2任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与seq idno:11具有至少70％同一性的序列，所述轻链可变区包含与seq id no:12具有至少70％同一性的序列。
5.根据权利要求1或3任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链，所述重链可变区包含与seq id no:13具有至少70％同一性的序列，所述轻链包含与seq id no:14具有至少70％同一性的序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其是嵌合的或人源化的，优选地其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其为双特异性抗体。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，其为偶联的，优选地其中所述抗体或其片段与可检测的标记偶联。
9.融合蛋白，其包含根据权利要求1-8中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段。
10.核酸，其编码根据权利要求1-8中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段或权利要求9所述的融合蛋白。
11.药物组合物，其包含根据权利要求1-8任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，或根据权利要求9所述的融合蛋白，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
12.权利要求1-8中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，根据权利要求9所述的融合蛋白或根据权利要求11所述的药物组合物，用作药物。
13.根据权利要求1-8任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，根据权利要求9所述的融合蛋白或根据权利要求11所述的药物组合物，其用于在有需要的受试者中治疗癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、炎症性疾病或阵发性睡眠性血红蛋白尿症。
14.体外检测样品，优选生物样品中cd160-tm的方法，包括将样品与至少一种根据权利要求1-8中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段接触的步骤。
15.权利要求1-8中任一项所述的分离的抗人cd160-tm抗体或其抗原结合片段，用于体内检测受试者中表达cd160-tm的肿瘤。
