本发明属于分子生物学检测，涉及一种基于res基因的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒。
背景技术：
1、沙门氏菌是严重危害家禽健康养殖的细菌性疫病，根据疾病类型可以分为鸡白痢、鸡伤寒和副伤寒三类。其中鸡白痢和鸡伤寒两种疫病对种鸡生产影响极大，属于必须净化的种源性疾病。鸡白痢和鸡伤寒分别由鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌感染所致，鸡白痢沙门氏菌主要引起雏鸡急性系统性疾病，死亡率可超过90％，成年鸡感染后很少有临床症状，但对受精率、出雏率等生产性能影响较大。鸡伤寒沙门氏菌则引起急性或慢性败血病，主要危害成年家禽。目前鸡白痢和鸡伤寒仍是发展中国家养禽业的顽症，并造成严重的经济损失。
2、鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌在病原学方面相似度极高，如均不能表达鞭毛，不具有运动性，在琼脂平板上的菌落大小也明显小于其它沙门氏菌血清型，且具有相同的菌体抗原(o抗原)，所以目前被归类于鸡伤寒沙门氏菌血清型，但分属于该血清型的两种不同生物型(鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌)。研究表明，这两种生物型无法通过血清学实验进行区分，必须使用鸟氨酸、卫矛醇等特殊生化试剂，但因无法满足快速、批量化的检测要求导致其应用受到限制。随着分子生物学的快速发展，目前也报道了一些鉴别鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌的分子检测技术，但上述方法有的需要使用多对引物，有的需要对扩增产物进一步酶切鉴定，且有的方法还存在特异性问题，所以仍需进一步开发简便的快速鉴别方法(龚建森等.鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的验证.中国动物传染病学报.2021)。
3、为了能够快速、准确、简便的鉴别鸡伤寒沙门氏菌血清型中鸡白痢和鸡伤寒这2种生物型，本发明根据已公开的沙门氏菌基因组序列，通过分析筛选出一种基于res基因的检测靶标，进一步设计检测引物，成功开发了一种用于快速鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的实用技术。
技术实现思路
1、本发明针对传统技术在鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌中存在的不足，提供了一种特异性鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的分子试剂盒及其非诊断性检测方法。
2、本发明技术方案如下：
3、本发明提供了一种基于res基因的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒及其非诊断性检测方法，所述鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒包括10×pcr缓冲液、10mm dntps、2.5u/μl taq dna聚合酶、pcr检测引物、阳性对照、阴性对照和空白对照，所述阳性对照物为鸡白痢沙门氏菌atcc10398基因组dna，阴性对照为鸡伤寒沙门氏菌atcc9184基因组dna，空白对照为灭菌双蒸水；所述pcr引物组的引物包括：
4、for：5’-atctcatcaaccagcatact-3’
5、rev：5’-ttcttacgcagcaatgag-3’。
6、进一步的，所述pcr检测体系的组分为：每25μl反应液中包括10×pcr缓冲液2.5μl、dntps 2μl、taq dna聚合酶0.25μl、检测引物1μl、dna模板1～2μl以及适量的灭菌双蒸水。
7、进一步的，所述pcr检测方法的制作方法程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；58℃退火30s；72℃延伸40s；共30个循环，最后72℃延伸10min。
8、进一步的，所述10×pcr缓冲液含有100mm kcl、80mm(nh4)so4、ph为9.0的100mmtris-hcl、15mm mgcl2和0.5％tergitol-type np-40。
9、进一步的，所述的引物浓度为10μm。
10、进一步的，所述dntps包括datp、dttp、dctp、dgtp，各组分浓度均为2.5mm。
11、进一步的，所述试剂盒不包括其它引物。更进一步的，一种使用鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒进行非诊断性检测的方法，包括以下步骤：
12、s1：使用煮沸法或商品化试剂盒提取细菌基因组dna，得到检测模板。
13、s2：pcr扩增，将10×pcr缓冲液、dntps、taq dna聚合酶、检测引物组以及dna模板加入灭菌pcr反应管中，添加灭菌双蒸水至总体积25μl，同时设置阳性、阴性和空白对照，使用pcr仪进行扩增反应；采用1.5％琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行电泳检测并分析结果；
14、所述引物组的引物包括：
15、for：5’-atctcatcaaccagcatact-3’
16、rev：5’-ttcttacgcagcaatgag-3’。
17、相比于现有技术，本发明的有益效果为：
18、本发明通过一次反应，即可对鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行快速鉴别，即出现528bp条带者为鸡伤寒沙门氏菌，未出现条带者为鸡白痢沙门氏菌。相比传统的生化分型与其它pcr检测方法，在检测时间与检测成本方面具有较大优势，适合于批量检测。
1.一种鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒，其特征在于：包括pcr检测引物、阳性对照、阴性对照和空白对照，所pcr述检测引物包括：
2.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为鸡伤寒沙门氏菌atcc9184基因组dna，阴性对照为鸡白痢沙门氏菌atcc10398基因组dna，空白对照为灭菌双蒸水。
3.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒，其特征在于：所述pcr检测体系的组分为：每25μl反应液中包括10×pcr缓冲液2.5μl、taq dna聚合酶0.25μl、dntps 2μl、检测引物组1μl、dna模板1μl以及适量的灭菌双蒸水。
4.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒，其特征在于：所述pcr检测引物浓度为10μm。
5.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒，其特征在于：所述dntps包括datp、dttp、dctp、dgtp，各组分浓度均为2.5mm。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒，其特征在于：所述试剂盒不包括其它引物。
7.一种使用鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌快速鉴别试剂盒进行非诊断性检测的方法，包括以下步骤：
