本发明涉及基因工程，具体地，涉及抗神经氨酸酶的单克隆抗体及其应用。
背景技术：
1、流感病毒表面有两种糖蛋白——血凝素(hemagglutinin,ha)和神经氨酸酶(neuraminidase，na)，两者通过协同作用促进病毒感染过程。
2、血凝素(ha)与细胞表面唾液酸(sa)受体结合，在病毒吸附和膜融合过程中起决定作用，是预防流感病毒感染的主要靶点。神经氨酸酶(na)又称为唾液酸酶，是流感病毒表面糖蛋白，可切割唾液酸，促进病毒颗粒从感染细胞中释放，同时神经氨酸酶可以通过切割黏液蛋白中的诱饵受体协助病毒穿过黏液层。
3、神经氨酸酶也是抗流感病毒治疗的重要靶点，神经氨酸酶抑制剂和神经氨酸酶抗体都被发现具有保护作用。神经氨酸酶抑制剂被广泛应用于抗病毒治疗，靶向神经氨酸酶抗体可以通过抑制活性中心或者与活性位点周围的表位结合抑制神经氨酸酶的活性。目前已报道神经氨酸酶抗体8h2、6c6、3d4，主要靶向n1亚型，抗体cr14011、cr14012、cr14017主要针对乙型流感病毒神经氨酸酶。然而，尽管近年来本领域技术人员已经发现几种人类神经氨酸酶的单克隆抗体，但对其靶向的神经氨酸酶表位的理解还不完全，不能完全解析神经氨酸酶蛋白保守表位，特别是对于那些具有广泛神经氨酸酶抑制活性的表位。而且，目前现有的针对神经氨酸酶的特异性广谱抗体数目有限，且不能同时针对甲型和乙型流感病毒，靶向神经氨酸酶抗体中和机制尚不完全清楚。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了抗神经氨酸酶的单克隆抗体及其应用。
2、本发明的第一个目的是提供一种抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段。
3、本发明的第二个目的是提供所述单克隆抗体或其抗原结合片段在制备预防和/或治疗流感病毒的产品中的应用。
4、本发明的第三个目的是提供一种生物材料。
5、本发明的第四个目的是提供所述生物材料在制备抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段中的应用。
6、本发明的第五个目的是提供制备抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法。
7、本发明的第六个目的是提供一种预防和/或治疗流感病毒的药物。
8、为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
9、本发明提供了具有神经氨酸酶抑制活性的f6抗体和ff34抗体，它们能强结合跨甲型和乙型流感病毒(a/brevig mission/1/1918、a/california/04/2009、a/india/pun151245/2015、a/switzerland/9715293/2013、a/red knot/delaware bay/310/2016、b/colorado/06/2017)的神经氨酸酶，并且表现出优异的抗感染和治疗功效。
10、一种抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含片段(1)或片段(2)；
11、所述片段(1)包含重链可变区(1)和轻链可变区(1)；所述重链可变区(1)包含cdr-f6-h1～cdr-f6-h3，其中cdr-f6-h1的氨基酸序列如seq id no.2所示，cdr-f6-h2的氨基酸序列如seq id no.3所示，cdr-f6-h3的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述轻链可变区(1)包含cdr-f6-l1～cdr-f6-l3，其中cdr-f6-l1的氨基酸序列如seq id no.10所示，cdr-f6-l2的氨基酸序列为gas，cdr-f6-l3的氨基酸序列如seq id no.11所示；
12、所述片段(2)包含重链可变区(2)和轻链可变区(2)；所述重链可变区(2)包含cdr-ff34-h1～cdr-ff34-h3，其中cdr-ff34-h1的氨基酸序列如seq id no.17所示，cdr-ff34-h2的氨基酸序列如seq id no.18所示，cdr-ff34-h3的氨基酸序列如seq id no.19所示；所述轻链可变区(2)包含cdr-ff34-l1～cdr-ff34-l3的轻链可变区，其中cdr-ff34-l1的氨基酸序列如seq id no.25所示，cdr-ff34-l2的氨基酸序列为aas，cdr-ff34-l3的氨基酸序列如seq id no.26所示。
13、优选地，所述重链可变区(1)还包含fr-f6-h1～fr-f6-h4，其中fr-f6-h1的氨基酸序列如seq id no.5所示，fr-f6-h2的氨基酸序列如seq id no.6所示，fr-f6-h3的氨基酸序列如seq id no.7所示，fr-f6-h4的氨基酸序列如seq id no.8所示；所述轻链可变区(1)还包含fr-f6-l1～fr-f6-l4，其中fr-f6-l1的氨基酸序列如seq id no.12所示，fr-f6-l2的氨基酸序列如seq id no.13所示，fr-f6-l3的氨基酸序列如seq id no.14所示，fr-f6-l4的氨基酸序列如seq id no.15所示。
14、更优选地，所述重链可变区(1)的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述轻链可变区(1)的氨基酸序列如seq id no.9所示。
15、优选地，所述重链可变区(2)还包含fr-ff34-h1～fr-ff34-h4，其中fr-ff34-h1的氨基酸序列如seq id no.20所示，fr-ff34-h2的氨基酸序列如seq id no.21所示，fr-ff34-h3的氨基酸序列如seq id no.22所示，fr-ff34-h4的氨基酸序列如seq id no.23所示；所述轻链可变区(2)还包含fr-ff34-l1～fr-ff34-l4，其中fr-ff34-l1的氨基酸序列如seq id no.27所示，fr-ff34-l2的氨基酸序列如seq id no.28所示，fr-ff34-l3的氨基酸序列如seq id no.29所示，fr-ff34-l4的氨基酸序列如seq id no.30所示。
16、更优选地，所述重链可变区(2)的氨基酸序列与seq id no.16具有至少95％以上一致性；所述轻链可变区(2)的氨基酸序列与seq id no.24具有至少95％以上一致性。
17、进一步优选地，所述重链可变区(2)的氨基酸序列如seq id no.16所示；所述轻链可变区(2)的氨基酸序列如seq id no.24所示。
18、优选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包含fc段，本发明对所述fc段的物种来源没有特殊限定，包括但不限于人源fc段、鼠源fc段、兔源fc段或其生物学上可接受的修饰或突变。
19、更优选地，所述fc段为人源fc段或其生物学上可接受的修饰或突变。
20、优选地，所述片段(1)还包含重链恒定区(1)和轻链恒定区(1)，所述重链恒定区(1)的氨基酸序列如seq id no.31所示，所述轻链恒定区(1)的氨基酸序列如seq id no.32所示。
21、优选地，所述片段(2)还包含重链恒定区(12)和轻链恒定区(2)，所述重链恒定区(2)的氨基酸序列如seq id no.31所示，所述轻链恒定区(2)的氨基酸序列如seq id no.32所示。
22、任一所述单克隆抗体或其抗原结合片段在制备预防和/或治疗流感病毒的产品中的应用也应在本发明的保护范围之内。
23、一种生物材料，其为以下(1)～(3)中的任意一种：
24、(1)编码任一所述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子；
25、(2)包含(1)中所述核酸分子的载体；
26、(3)包含(2)中载体的宿主细胞。
27、本发明对宿主细胞的来源和种类没有特殊限定，包括但不限于大肠杆菌、hek293细胞、cho细胞等常规可以携带所述载体的原核与真核细胞均可实现本发明的目的。
28、优选地，(3)中所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
29、更优选地，(3)中所述宿主细胞为293t细胞。
30、所述生物材料在制备抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段中的应用也应在本发明的保护范围之内。
31、所述生物材料在制备预防和/或治疗流感病毒的产品中的应用也应在本发明的保护范围之内。
32、一种制备抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，在允许所述单克隆抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养所述生物材料中的(3)中所述宿主细胞，从培养的宿主细胞培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段。
33、本发明对宿主细胞的来源和种类没有特殊限定，包括但不限于大肠杆菌、hek293细胞、cho细胞等常规可以携带所述载体的原核与真核细胞均可实现本发明的目的。
34、优选地，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
35、更优选地，中所述宿主细胞为293t细胞。
36、一种预防和/或治疗流感病毒的药物，包含任一所述单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
37、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
38、本发明提供的单克隆抗体具有显著的神经氨酸酶抑制活性，以及广谱性的抗流感病毒抗原结合能力，对于多种季节性流感病毒都具有优异的预防和治疗效果，为抵流感感染提供了新的技术选择，具有重要的应用价值。
1.一种抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含片段(1)或片段(2)；
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区(1)还包含fr-f6-h1～fr-f6-h4，其中fr-f6-h1的氨基酸序列如seq id no.5所示，fr-f6-h2的氨基酸序列如seq id no.6所示，fr-f6-h3的氨基酸序列如seq id no.7所示，fr-f6-h4的氨基酸序列如seq id no.8所示；所述轻链可变区(1)还包含fr-f6-l1～fr-f6-l4，其中fr-f6-l1的氨基酸序列如seq id no.12所示，fr-f6-l2的氨基酸序列如seq id no.13所示，fr-f6-l3的氨基酸序列如seq id no.14所示，fr-f6-l4的氨基酸序列如seq id no.15所示。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区(1)的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述轻链可变区(1)的氨基酸序列如seq id no.9所示。
4.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区(2)还包含fr-ff34-h1～fr-ff34-h4，其中fr-ff34-h1的氨基酸序列如seq id no.20所示，fr-ff34-h2的氨基酸序列如seq id no.21所示，fr-ff34-h3的氨基酸序列如seq id no.22所示，fr-ff34-h4的氨基酸序列如seq id no.23所示；所述轻链可变区(2)还包含fr-ff34-l1～fr-ff34-l4，其中fr-ff34-l1的氨基酸序列如seq id no.27所示，fr-ff34-l2的氨基酸序列如seq id no.28所示，fr-ff34-l3的氨基酸序列如seq id no.29所示，fr-ff34-l4的氨基酸序列如seq id no.30所示。
5.根据权利要求4所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区(2)的氨基酸序列与seq id no.16具有至少95％以上一致性；所述轻链可变区(2)的氨基酸序列与seq id no.24具有至少95％以上一致性。
6.权利要求1～5任一项所述单克隆抗体或其抗原结合片段在制备预防、检测或治疗流感病毒的产品中的应用。
7.一种生物材料，其特征在于，其为以下(1)～(3)中的任意一种：
8.权利要求7所述生物材料在制备抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段中的应用。
9.一种制备抗神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其特征在于，在允许所述单克隆抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求7中所述的宿主细胞，从培养的宿主细胞培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段。
10.一种预防和/或治疗流感病毒的药物，其特征在于，包含权利要求1～5任一项所述单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
