本公开涉及用于生物制品生产系统的哺乳动物细胞系，其中哺乳动物细胞系被工程改造为具有减少或消除的天冬酰胺生物合成途径的组分的表达，以建立天冬酰胺营养缺陷细胞系。
背景技术：
1、用于生物制造的高产量克隆细胞系的开发通常利用一种或多种众所周知的选择方法，比如谷氨酰胺合成酶(gs用于谷氨酰胺选择)、二氢叶酸受体(dhfr用于次黄嘌呤和胸苷选择)、抗生素选择(嘌呤霉素、潮霉素、杀稻瘟菌素等)或p5c合成酶(p5cs-脯氨酸选择)。gs系统已成为行业的标准，但需要允许多种选择方法的细胞系，以便可将多于一个载体引入细胞系以促进生产分子，比如双特异性抗体、多特异性抗体以及其他多链酶/蛋白或需要效应蛋白用于表达的蛋白/酶的分子。
技术实现思路
1、本公开的各个方面中提供了用于生物生产系统的哺乳动物细胞系，其中哺乳动物细胞系被工程改造为具有减少或消除的内源天冬酰胺合成酶(asns)基因表达。在缺乏内源表达的功能性asns蛋白的情况下，细胞需要外源的氨基酸天冬酰胺。可以使用靶向内切核酸酶介导的基因组修饰，例如crispr核糖核蛋白(rnp)复合物或锌指核酸酶，来灭活染色体asns序列。本公开的其他方面提供了哺乳动物细胞系，其中哺乳动物细胞系被工程改造为具有减少或消除的内源asns基因表达，以及减少或消除的内源谷氨酰胺合成酶(gs)基因表达。
2、本公开的另一个方面包括用于选择具有表达的生物治疗蛋白的增强的生产力的细胞系的过程。在本公开的其他方面提供了一种生物生产系统，用于更方便地通过利用多种选择系统表达双特异性抗体或需要效应蛋白表达的生物治疗蛋白。这些过程包括在任何哺乳动物细胞系中表达至少一种重组蛋白。
3、本公开的其他方面和迭代在下文更详细地描述。
1.生产重组蛋白产品的方法，过程包括
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述(a)的哺乳动物细胞系进一步包含减少或消除的内源谷氨酰胺合成酶(gs)表达。
3.根据权利要求1所述的方法，其中通过灭活所述哺乳动物细胞系的内源asns基因来减少或消除内源asns表达。
4.根据权利要求1所述的方法，其中使用靶向内切核酸酶介导的基因组修饰技术来灭活所述内源asns基因。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述靶向内切核酸酶是crispr核糖核蛋白复合物或一对锌指核酸酶。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢(cho)细胞系、婴儿仓鼠肾(bhk)细胞系、ns0小鼠骨髓瘤细胞系、hek293细胞系或vero非洲绿猴肾细胞系。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞系是cho细胞系。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组蛋白产品选自抗体、抗体片段、疫苗、生长因子、细胞因子、激素或凝血因子。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述抗体是双特异性或多特异性抗体。
10.用于生物制品生产系统的遗传工程改造的哺乳动物细胞系，其中所述哺乳动物细胞系被工程改造为具有减少或消除的内源asns表达。
11.根据权利要求10所述的哺乳动物细胞系，其中asns表达经由灭活至少一个编码asns的染色体序列的等位基因来减少或消除。
12.根据权利要求11所述的哺乳动物细胞系，其中两个编码asns的染色体序列的等位基因都被灭活。
13.根据权利要求10所述的哺乳动物细胞系，其中所述细胞系被工程改造为具有减少或消除的内源谷氨酰胺合成酶(gs)表达。
14.根据权利要求12所述的哺乳动物细胞系，其中使用靶向内切核酸酶介导的基因组修饰技术来灭活所述染色体序列。
15.根据权利要求14所述的哺乳动物细胞系，其中所述靶向内切核酸酶是核糖核蛋白复合物或一对锌指核酸酶。
16.根据权利要求15所述的哺乳动物细胞系，其中所述非人类细胞系是中国仓鼠卵巢(cho)细胞系、婴儿仓鼠肾(bhk)细胞系、ns0小鼠骨髓瘤细胞系、hek293细胞系或vero非洲绿猴肾细胞系。
17.根据权利要求16所述的哺乳动物细胞系，其中所述细胞系是cho细胞系。
18.根据权利要求17所述的哺乳动物细胞系，其中细胞活力、活细胞密度、滴度、生长速率、增殖反应、细胞形态和/或一般细胞健康状况与非工程改造的亲本哺乳动物细胞系相当。
19.根据权利要求10所述的哺乳动物细胞系，进一步包括至少一个编码选自抗体、抗体片段、疫苗、生长因子、细胞因子、激素或凝血因子的重组蛋白的核酸。
20.根据权利要求19所述的哺乳动物细胞系，其中所述抗体是双特异性或多特异性抗体。
21.包含编码功能性asns和至少一个目的重组蛋白的核酸序列的多核苷酸。
22.多核苷酸，其包含
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述功能性asns基因包含内源启动子序列。
24.根据权利要求24所述的方法，其中所述内源启动子是内源asns启动子。
25.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述功能性asns包含内源asns启动子。
