本发明总体上涉及工程化淋巴细胞(如细胞毒性先天淋巴样(cil)细胞)、用于制备此类细胞的方法以及在免疫疗法中使用它们的方法。
背景技术：
1、细胞毒性先天淋巴样(cil)细胞是一类可以用于免疫疗法(包括癌症免疫疗法)的免疫细胞。一种类型的cil是自然杀伤(nk)细胞，其为一种通常被鉴定为对细胞表面蛋白cd56(cd56+)和其他标记物呈阳性并且被鉴定为具有细胞毒性活性的细胞类型。
2、在免疫疗法中使用的cil细胞(例如，nk细胞)可以获自原始来源(如外周血或脐带血)。cil细胞的人工来源包括多能干细胞(包括诱导多能干细胞(ipsc)，其为源自体细胞(通常是成纤维细胞或外周血单个核细胞[pbmc])的细胞)，以及人胚胎干细胞(hesc)(当经历适当的分化条件时，被诱导变得能够无限增殖并分化为其他细胞类型)。cil细胞可以通过以下方式源自ipsc：依序地，使ipsc分化为造血祖细胞(hpc)，也称为造血干细胞(hsc)；使hpc分化为共同淋巴样祖细胞(clp)；然后使clp分化为cil细胞，其称为ipsc来源的细胞毒性先天淋巴样细胞(ipsc-cil)。通常，ipsc-cil细胞表达cd56并且具有细胞毒性活性，像nk细胞那样；但ipsc-cil细胞可能在表型上和其他方面与nk细胞不同。
3、一旦获得，原代cil或ipsc-cil细胞可以在施用至患者前进行离体扩增。用于离体扩增cil细胞的方法包括使所述细胞与细胞因子白介素2(il-2)或白介素15(il-15)接触。已知的扩增方案通常将il-2或il-15与外源可溶性因子、珠结合因子或饲养细胞组合。
4、已知用于制造目的的用于cil细胞扩增的有效方法需要此类因子或饲养细胞。此类方法可以进一步为cil细胞提供其他因子以驱动扩增。例如，可以对抗原呈递细胞(apc)进行基因工程化以产生人工apc(aapc)。通常通过以下方式进一步增强扩增：将aapc工程化以分泌白介素15(il-15)或白介素21(il-21)；或以展示出重组膜结合il-15(mbil-15)或膜结合il-21(mbil-21)。总之，用于有效cil细胞扩增的已知方法通常依赖于多种外源可溶性因子和基于饲养细胞的因子。
5、用于使用类胚体(eb)或饲养细胞上单细胞ipsc的培养物使ipsc分化为cd34+hpc的方法是已知的。然后可以使cd34+hpc分化为clp，常规使用干细胞因子(scf)、骨形态发生蛋白4(bmp4)和血管内皮生长因子(vegf)的组合来进行。从clp分化为cil的已知方法通常涉及使clp与以下接触：scf、白介素17(il-7)、白介素15(il-15)、fms样酪氨酸激酶3配体(flt3l)和任选地白介素(il-3)。然后可以使用已经描述的方法扩增所得的ipsc-cil细胞。
6、本领域仍然需要与工程化细胞毒性先天淋巴样细胞相关的组合物和方法、用于制备此类细胞的方法以及在免疫疗法中使用它们的方法。
技术实现思路
1、本公开文本部分地基于诸位发明人对被工程化以表达合成细胞因子受体的淋巴细胞，如细胞毒性先天淋巴样(cil)细胞(例如，nk细胞)的意外特性的出人意料的发现。在一些实施方案中，被工程化以表达合成细胞因子受体的淋巴细胞，如cil细胞(例如，nk细胞)可以响应于所述受体的同源非生理配体而扩增，并且具有其他期望的特征，如等于或大于来自其他来源的非工程化淋巴细胞(如cil细胞)的功能活性。
2、根据本文所述的方法，淋巴细胞(如cil细胞)可以从原代细胞或ipsc来源的淋巴细胞(如细胞毒性先天淋巴样(ipsc-cil)细胞)大量产生，并且具有期望的功能特征。某些实施方案的非限制性优势可以包括本文所述的工程化淋巴细胞，如cil细胞(例如，nk细胞)在不使用外源因子(如不使用il-2、il-7、il-15和/或il-21)的情况下扩增的能力。因为相关领域中熟知，cil细胞(例如，nk细胞)的扩增通常依赖于对所述cil细胞的各种外源刺激，因此如本文所述，所述工程化cil细胞的扩增省略了这些刺激中的一种或多种是出人意料的和意外的。在某些实施方案中，本文公开的方法可以通过向所述工程化淋巴细胞(如工程化cil细胞)提供其他扩增因子来进一步增强扩增。本文所述的工程化淋巴细胞(如工程化cil细胞)和相关组合物可以用于使用离体扩增的免疫疗法。
3、本文所述的进一步非限制性优势可以包括与不表达合成细胞因子受体的淋巴细胞(例如，cil细胞，如nk细胞)相比增加的增殖能力、对衰老的抗性、细胞毒性活性。在一些情况下，优点还可以包括改善nk细胞特有的表面标记物的表达。
4、所提供的实施方案包括一种包含非生理配体的合成细胞因子受体的工程化淋巴细胞或祖细胞，其中所述细胞因子受体包含：(i)合成γ链多肽，所述合成γ链多肽包含第一二聚化结构域、第一跨膜结构域和白介素-2受体亚基γ(il-2rg)胞内结构域，以及(ii)合成α或β链多肽，所述合成α或β链多肽包含第二二聚化结构域、第二跨膜结构域和选自以下的胞内结构域：白介素-2受体亚基β(il-2rb)胞内结构域、白介素-7受体亚基β(il-7rb)胞内结构域、白介素-21受体亚基β(il-21rb)胞内结构域或白介素-9受体亚基α(il-9ra)胞内结构域。在一些实施方案中，所述工程化淋巴细胞或祖细胞中所述合成细胞因子受体的工程化提供了所述工程化细胞的受控分化和/或扩增。在一些实施方案中，所述非生理配体与所述合成细胞因子受体的结合激活所述工程化淋巴细胞或祖细胞中的所述合成细胞因子受体，以诱导细胞群中所述工程化淋巴细胞和/或祖细胞的分化和/或扩增。
5、在一些实施方案中，所述工程化细胞是工程化祖细胞，其为造血祖细胞(hpc；也称为造血干细胞(hsc))或共同淋巴样祖细胞(clp)。在一些实施方案中，所述工程化细胞是细胞毒性先天淋巴细胞(cil)、nk细胞或t细胞。在一些实施方案中，所述t细胞是γδt细胞或αβt细胞。在特定实施方案中，所述工程化细胞是cil，如nk细胞。
6、在一些实施方案中，本文提供了一种包含非生理配体的合成细胞因子受体的工程化细胞毒性先天淋巴样(cil)细胞，其中所述细胞因子受体包含：合成γ链多肽，所述合成γ链多肽包含第一二聚化结构域、第一跨膜结构域和白介素-2受体亚基γ(il-2rg)胞内结构域；以及合成α或β链多肽，所述合成α或β链多肽包含第二二聚化结构域、第二跨膜结构域和选自以下的胞内结构域：白介素-2受体亚基β(il-2rb)胞内结构域、白介素-7受体亚基β(il-7rb)胞内结构域、白介素-21受体亚基β(il-21rb)胞内结构域或白介素-9受体亚基α(il-9ra)胞内结构域。在一些实施方案中，将非生理配体的所述合成细胞因子受体工程化到所述工程化cil细胞中，用于所述工程化cil的受控扩增和/或活性。在一些实施方案中，所述非生理配体与所述合成细胞因子受体的结合激活所述工程化cil细胞中的所述合成细胞因子受体，以诱导细胞群中所述工程化cil细胞的扩增和/或激活。
7、本文还提供了包含根据任何所提供的实施方案的工程化淋巴细胞或祖细胞的细胞群。本文还提供了包含根据任何所提供的实施方案的工程化cil细胞的细胞群。本文还提供了通过将编码合成细胞因子受体的核酸或载体引入细胞中来对所述细胞进行基因工程化以表达所述合成细胞因子受体的方法。在一些实施方案中，将所述合成细胞因子受体插入所述细胞中的内源基因中。在此类实施方案中，所述方法包括使淋巴细胞或祖细胞群(如cil细胞)与以下接触：(i)靶向内源基因中的靶位点的指导rna(grna)，(ii)rna指导的核酸内切酶，以及(iii)包含编码非生理配体的合成细胞因子受体的核苷酸序列的重组载体，从而将所述核苷酸序列插入所述内源基因中。可以使用用于所述合成细胞因子基因的基因编辑和插入的任何方法，包括如本文所述的任何方法。在一些实施方案中，所述插入的方法是通过同源定向修复(hdr)。还提供了通过任何所提供的方法产生的细胞群。
8、还提供了通过使任何所提供的工程化细胞与所述合成细胞因子受体的非生理配体接触来扩增工程化淋巴细胞(如工程化cil细胞)的方法。还提供了通过使任何所提供的工程化细胞群与所述合成细胞因子受体的非生理配体接触来扩增工程化淋巴细胞(如工程化cil细胞)的方法。在一些实施方案中，所述非生理配体是雷帕霉素或雷帕霉素类似物。
9、本文还提供了包含任何所提供的工程化细胞(如工程化cil)的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含药学上可接受的载体。
10、在一些实施方案中，本文还提供了任何所提供的工程化细胞或工程化细胞群的治疗方法和用途。本文还提供了任何所提供的药物组合物的治疗方法和用途。本文提供了任何所提供的工程化细胞、工程化细胞群或药物组合物在此类方法和治疗中以及在用于进行此类治疗方法的药剂的制备中的用途。在一些实施方案中，所述方法通过向患有、已经患有或疑似患有疾病或病症或障碍的受试者施用所述工程化细胞或包含其的组合物来进行。在一些实施方案中，所述方法由此治疗所述受试者的所述疾病或病症或障碍。在一些实施方案中，所述方法可以用于治疗任何疾病或病症，其中通过过继细胞疗法进行的免疫疗法可以用于治疗所述疾病或病症。在一些实施方案中，所述工程化细胞表达重组受体，如嵌合抗原受体(car)，所述重组受体靶向与疾病或病症相关的细胞上的抗原。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。本文描述了示例性方法和用途。
11、在某些实施方案中，本文提供了用于在使用离体产生的淋巴细胞(例如cil细胞，如nk细胞)的免疫疗法中使用的治疗方法、试剂盒和药物组合物。在某些实施方案中，产生本文所述的工程化淋巴细胞，如cil细胞，并且任选地离体扩增，然后将其施用至需要免疫疗法的受试者。
12、在优选的实施方案中，所述合成细胞因子受体是雷帕霉素激活的细胞因子受体(racr)。所述racr可以用雷帕霉素或其衍生物(rapalog)激活。
13、淋巴细胞，如cil细胞(例如，nk细胞)可以源自ipsc、共同淋巴样祖细胞(clp)或其他干细胞或祖细胞。本文进一步提供了被工程化以表达合成细胞因子受体的clp，以及通过使所述clp与所述细胞因子受体的同源非生理配体接触而使工程化clp分化为cil细胞的方法。
14、本公开文本还提供了其他组合物和方法，包括但不限于药物组合物、治疗方法、试剂盒等。前述优点可以存在于本文所述的一些但不是全部实施方案中，并且本文所述的组合物和方法的其他优点将根据下文的具体实施方式变得清楚。
1.一种被工程化用于受控扩增和/或活性的工程化细胞毒性先天淋巴样(cil)细胞，所述工程化淋巴细胞或祖细胞包含非生理配体的合成细胞因子受体，
2.根据权利要求1所述的工程化cil细胞，
3.根据权利要求1或权利要求2所述的工程化cil细胞，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域是胞外结构域。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述合成γ链多肽以n至c末端的顺序包含所述第一二聚化结构域、所述第一跨膜结构域和所述白介素-2受体亚基γ(il-2rg)胞内结构域，并且所述合成β链多肽以n至c末端的顺序包含所述第二二聚化结构域、所述第二跨膜结构域和所述胞内结构域。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述il-2rg胞内结构域包含与seq id no:1至少95％相同的多肽序列、或如seq id no:1中所示的多肽序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述第一跨膜结构域包括il-2rg跨膜结构域。
7.根据权利要求6所述的工程化cil细胞，其中所述il-2rg跨膜结构域包含与seq idno:8或31至少95％相同的多肽序列、或如seq id no:8或31中所示的多肽序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述β链胞内结构域包括所述il-2rb胞内结构域。
9.根据权利要求8所述的cil细胞，其中所述il-2rb胞内结构域包含与seq id no:2至少95％相同的多肽序列、或如seq id no:2中所示的多肽序列。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述β链胞内结构域包括所述il-7rb胞内结构域。
11.根据权利要求1-7中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述il-7rb胞内结构域包含与seq id no:3至少95％相同的多肽序列、或如seq id no:3中所示的多肽序列。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述β链胞内结构域包括所述il-21rb胞内结构域。
13.根据权利要求12所述的工程化cil细胞，其中所述il-21rb胞内结构域包含与seqid no:4至少95％相同的多肽序列、或如seq id no:4中所示的多肽序列。
14.根据权利要求2-7中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述合成α链多肽包含所述il-9ra胞内结构域。
15.根据权利要求14所述的工程化cil细胞，其中所述il-9ra胞内结构域包含与seq idno:51至少95％相同的多肽序列、或如seq id no:51中所示的多肽序列。
16.根据权利要求1-13中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述第二跨膜结构域包括来自与所述胞内结构域相同的多肽的跨膜结构域。
17.根据权利要求1-9和16所述的工程化cil细胞，其中所述第二跨膜结构域是包含以下的il-2rb的跨膜结构域：与seq id no:35或36至少95％相同的多肽序列、或如seq idno:35或36中所示的多肽序列。
18.根据权利要求1-9、16和17中任一项所述的工程化cil细胞，其中：
19.根据权利要求1-18中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域是选自以下的异二聚化结构域：大小为12kd的fk506结合蛋白(fkbp)和fkbp12-雷帕霉素结合(frb)结构域；和/或
20.根据权利要求19所述的工程化cil细胞，其中所述第一二聚化结构域是fkbp并且所述第二二聚化结构域是frb。
21.根据权利要求19所述的工程化cil细胞，其中所述第一二聚化结构域是frb并且所述第二二聚化结构域是fkbp。
22.根据权利要求19-21中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述frb结构域包含与seq id no:6或seq id no:7至少95％相同的多肽序列。
23.根据权利要求19-21中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述frb结构域包含seqid no:6或seq id no:7中所示的多肽序列。
24.根据权利要求1-18中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域是选自以下的异二聚化结构域：大小为12kd的fk506结合蛋白(fkbp)和钙调磷酸酶结构域；和/或
25.根据权利要求1-19中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述fkbp结构域包含与seq id no:5或seq id no:30至少95％相同的多肽序列。
26.根据权利要求1-19中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述fkbp结构域包含seqid no:5或seq id no:30中所示的多肽序列。
27.根据权利要求1-9和16-26中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述合成γ链多肽具有seq id no:28中所示的氨基酸序列或与seq id no:28至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列，并且所述合成β链多肽具有seqid no:33中所示的氨基酸序列或与seq id no:33至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。
28.根据权利要求1-9和16-27中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述合成γ链多肽具有seq id no:28中所示的氨基酸序列，并且所述合成β链多肽具有seq id no:33中所示的氨基酸序列。
29.根据权利要求1-18中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域是选自以下的同二聚化结构域：
30.根据权利要求1-29中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述cil细胞对雷帕霉素介导的mtor抑制具有抗性。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述细胞毒性先天淋巴样细胞表达与所述非生理配体结合的胞质多肽，任选地其中所述胞质多肽是胞质frb结构域。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述非生理配体是雷帕霉素或rapalog，并且所述细胞毒性先天淋巴样细胞表达胞质frb结构域或其变体。
33.根据权利要求26或权利要求27所述的工程化cil细胞，其中所述胞质frb结构域包含与seq id no:6或seq id no:7至少95％相同的多肽序列。
34.根据权利要求26或权利要求27所述的工程化cil细胞，其中所述胞质frb结构域包含与seq id no:6或seq id no:7至少98％相同的多肽序列。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述cil细胞包含减少fkbp12表达的破坏的fkbp12基因。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述cil细胞包含所述fkbp12基因的敲除。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述cil细胞包含插入所述cil细胞基因组中的编码所述合成细胞因子受体的核苷酸序列。
38.根据权利要求37所述的工程化cil细胞，其中将编码所述合成细胞因子受体的核苷酸序列插入所述cil细胞基因组中的非靶基因座中。
39.根据权利要求37所述的工程化cil细胞，其中将编码所述合成细胞因子受体的核苷酸序列插入所述cil细胞的内源基因中。
40.根据权利要求39所述的工程化cil细胞，其中所述插入减少了所述基因座中的内源基因的表达。
41.根据权利要求39或权利要求40所述的工程化cil细胞，其中所述插入敲除了所述基因座中的所述内源基因。
42.根据权利要求39-41中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述插入是通过同源定向修复进行的。
43.根据权利要求39-42中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述内源基因是管家基因、血液谱系特异性基因座或免疫相关基因。
44.根据权利要求43所述的工程化cil细胞，其中所述内源基因是管家基因，并且所述管家基因选自真核翻译延伸因子1α(eef1a)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、泛素c(ubc)和肌动蛋白β(actb)。
45.根据权利要求43所述的工程化cil细胞，其中所述内源基因是血液谱系特异性基因座，并且所述血液谱系特异性基因座选自蛋白质酪氨酸磷酸酶受体c型(ptprc)、il2rg和il2rb。
46.根据权利要求43所述的工程化cil细胞，其中所述免疫相关基因选自β-2-微球蛋白(b2m)基因、t细胞受体α恒定(trac)基因和信号调节蛋白α(sirpa)基因。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述cil细胞包含b2m敲除。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的工程化cil细胞，其中所述cil细胞包含b2m敲除和fkbp12敲除。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的工程化cil细胞，所述工程化cil细胞包含嵌合抗原受体(car)。
50.根据权利要求49所述的工程化cil细胞，其中所述car是抗fitc car。
51.一种细胞群，所述细胞群包含根据权利要求1-50中任一项所述的工程化cil细胞。
52.一种基因工程化cil细胞以表达合成细胞因子受体的方法，所述方法包括：
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述核苷酸序列经由同源定向修复(hdr)插入。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述载体包含核酸，所述核酸从5’至3’包含(a)与位于所述靶位点上游的区域同源的核苷酸序列，(b)编码非生理配体的合成细胞因子受体的所述核苷酸序列，和(c)与位于下游的区域同源的核苷酸序列。
55.根据权利要求52所述的方法，其中所述核苷酸序列经由非同源末端连接(nhej)插入。
56.根据权利要求52-55中任一项所述的方法，其中所述rna指导的核酸内切酶选自cas核酸内切酶、mad核酸内切酶和cpf1核酸内切酶。
57.根据权利要求52-56中任一项所述的方法，其中所述rna指导的核酸内切酶是cas9或mad7。
58.根据权利要求52-57中任一项所述的方法，其中所述内源基因选自b2m、trac和sirpa。
59.根据权利要求52-58中任一项所述的方法，其中所述内源基因是b2m。
60.根据权利要求52-59中任一项所述的方法，其中所述grna包含seq id no:18中所示的序列。
61.根据权利要求54-60中任一项所述的方法，其中与位于所述靶位点上游的区域同源的所述核苷酸序列包含与seq id no:22中所示的核酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的核酸序列；并且与位于下游的区域同源的所述核苷酸序列包含与seq id no:23中所示的核酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的核酸序列。
62.根据权利要求52-61中任一项所述的方法，其中编码所述合成细胞因子受体的所述核苷酸序列包含编码γ链的第一核酸序列和编码β链的第二核酸序列，所述第一核酸序列与seq id no:37中所示的核酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，所述第二核酸序列与seq id no:38中所示的核酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列由可切割接头或ires分开。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述可切割接头是蛋白质定量报告(pqr)接头，任选地如seq id no:42中所示。
65.根据权利要求52-64中任一项所述的方法，其中编码非生理配体的合成细胞因子受体的所述核苷酸序列处于异源启动子的可操作控制之下。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述异源启动子是ef1α启动子或mnd启动子。
67.根据权利要求52-65中任一项所述的方法，其中编码所述合成细胞因子受体的所述核苷酸序列包含多腺苷酸化序列。
68.根据权利要求52-67中任一项所述的方法，其中所述重组载体包含seq id no:40中所示的序列或与seq id no:40中所示的核酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列。
69.根据权利要求52-68中任一项所述的方法，所述方法包括将所述cil细胞群工程化以对雷帕霉素介导的mtor抑制具有抗性。
70.根据权利要求69所述的方法，其中工程化所述cil细胞群以对雷帕霉素具有抗性包括敲除fkbp12基因。
71.根据权利要求69所述的方法，其中所述方法进一步包括使所述cil细胞群与靶向所述fkbp12基因中的靶位点的指导rna(grna)接触。
72.根据权利要求69所述的方法，其中所述grna包括选自含有seq id no:19、seq idno:20或seq id no:21中所示序列的grna的一种或多种grna。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述grna是包含2或3种grna的grna库。
74.根据权利要求52-73中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述cil细胞群中引入嵌合抗原受体(car)。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述car是抗fitc car。
76.一种通过根据权利要求52-75中任一项所述的方法产生的细胞群。
77.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-37和76中任一项所述的细胞群。
78.一种扩增工程化细胞毒性先天淋巴样(cil)细胞的方法，所述方法包括使根据权利要求1-50中任一项所述的cil与所述合成细胞因子受体的非生理配体接触。
79.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1-50中任一项所述的工程化cil、根据权利要求76所述的细胞群、或根据权利要求77所述的药物组合物。
80.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1-50中任一项所述的工程化cil、根据权利要求76所述的细胞群、或根据权利要求77所述的药物组合物。
81.根据权利要求80所述的方法，其中在施用所述cil、所述cil群或所述药物组合物之前，所述受试者尚未被施用淋巴细胞清除疗法。
82.根据权利要求80或权利要求81所述的方法，其中所述cil表达靶向所述受试者中的癌细胞的car。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述car是抗fitc car，并且所述受试者已经被施用fitc-配体以标记所述受试者中的癌细胞，其中所述配体特异性结合在肿瘤上表达的分子。
84.根据权利要求83所述的方法，其中所述fitc-配体是fitc-叶酸。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述非生理配体是雷帕霉素或雷帕霉素类似物，任选地其中所述雷帕霉素类似物是rapalog。
86.根据权利要求78-85中任一项所述的方法，其中所述非生理配体以如下浓度进行接触：5nm与200nm之间、5nm与150nm之间、5nm与100nm之间、5nm与50nm之间、5nm与20nm之间、5nm与10nm之间、10nm与200nm之间、10nm与150nm之间、10nm与100nm之间、10nm与50nm之间、10nm与20nm之间、20nm与200nm之间、20nm与150nm之间、20nm与100nm之间、20nm与50nm之间、50nm与200nm之间、50nm与150nm之间、50nm与100nm之间、100nm与200nm之间、100nm与150nm之间以及150nm与200nm之间。
87.根据权利要求78-85中任一项所述的方法，其中所述非生理配体以为或约10nm的浓度进行接触。
88.根据权利要求78-85中任一项所述的方法，其中所述非生理配体以为或约100nm的浓度进行接触。
89.一种杀伤癌细胞或抑制癌细胞增殖的方法，所述方法包括使癌细胞与根据权利要求1-50中任一项所述的工程化cil、根据权利要求76所述的细胞群、或根据权利要求77所述的药物组合物接触。
90.根据权利要求89所述的杀伤癌细胞或抑制癌细胞增殖的方法，其中所述方法在受试者体内进行。
91.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1-50中任一项所述的工程化cil、根据权利要求76所述的细胞群、或根据权利要求77所述的药物组合物以及用于向有需要的受试者施用的说明书。
92.根据权利要求91所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包含容器，所述容器包含所述非生理配体和用于在施用所述细胞群后向所述受试者施用所述非生理配体的说明书。
93.根据权利要求91或92所述的试剂盒，其中所述受试者患有癌症。
94.根据权利要求89或权利要求90所述的方法或根据权利要求91-93中任一项所述的试剂盒，其中所述非生理配体以如下剂量施用：1mg至100mg，任选地在10-100mg之间，任选地为或约10mg、20mg、25mg、30mg、40mg、50mg或任何前述值之间的任何值。
