本发明属于生物医药，具体涉及一种提高免疫细胞病毒感染效率的方法及应用。
背景技术：
1、近年来，免疫疗法在多种癌症和慢性疾病的治疗方面展现出了巨大的潜力。其中，t细胞和自然杀伤细胞（nk细胞）作为关键的效应细胞，发挥了至关重要的作用。t细胞通过特异性识别并攻击癌细胞，执行细胞免疫的核心功能；nk细胞能够在无需预先识别特定抗原的情况下，迅速响应并消灭癌变或感染的细胞。鉴于独特的定位和攻击机制，这两种免疫细胞成为了理想的免疫治疗工具。
2、目前免疫细胞的广泛应用还存在阻碍，其中一个主要挑战是基因改造效率较低，进而影响转染效率。传统的病毒介导的基因转导方法虽然有一定成效，但在改造效率上存在局限，且会增加后续的免疫细胞治疗成本。目前还有开发感染试剂来提高免疫细胞的病毒感染效率。例如公布号为cn117721155a，发明名称为“一种提高免疫细胞慢病毒感染效率的感染试剂及感染方法”的专利，该感染试剂的成分包括鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂（泊洛沙姆），该感染试剂在目标细胞与慢病毒共培养时加入，或者在car-t或nk细胞培养时加入，可以提高病毒感染的阳性率。然而该专利是通过添加化学试剂的方式对目标细胞进行处理，可能会存在影响目标细胞生物功能的风险。
3、因此，需要开发一种能够提高免疫细胞病毒感染效率且几乎不影响免疫细胞生物功能的方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种简便的提高免疫细胞病毒感染效率的方法及应用，部分地解决或缓解现有技术中的上述不足，本发明具体采用以下技术方案。
2、一种提高免疫细胞病毒感染效率的方法，所述方法为物理方法，包括以下步骤：
3、s01：活化免疫细胞；
4、s02：将活化后的免疫细胞以500-1500rpm离心，例如离心2-5分钟，弃掉上清，将离心后收集的免疫细胞加入冻存液中；所述冻存液的成分包括cs10细胞冷冻保存液和质量百分比为2-10%的人血清白蛋白（hsa）；
5、s03：将加入冻存液后的免疫细胞混匀，然后置于-80℃~-70℃的条件下急速冻存，控制温度使所述免疫细胞在3分钟以内完全冻实，待所述免疫细胞冻实以后，继续冻存3-24h；
6、s04：将完成冻存的免疫细胞置于35℃-37℃水浴中快速解冻，控制温度使细胞在1分钟以内完全解冻；
7、s05：将完全解冻的细胞加入（提前）预热的培养基中重悬，得到病毒感染效率提高的免疫细胞。
8、进一步，所述免疫细胞包括t细胞或nk细胞。
9、作为一种优选方式，所述急速冻存的温度为-80℃。
10、作为一种优选方式，所述快速解冻的温度为37℃。
11、作为一种优选方式，所述急速冻存和所述快速解冻的温度并非固定不变的，以规定时间内使细胞完全冻实和完全解冻为目的来调节温度。
12、作为一种优选方式，免疫细胞冻实以后，在该温度下继续冻存的时间为24小时。
13、进一步，所述预热的培养基包括t细胞完全培养基，成分包括x-vivo无血清培养基和200-800u/ml的人源白细胞介素2。
14、进一步，所述预热的培养基包括nk细胞完全培养基，成分包括x-vivo无血清培养基和200-800u/ml的人源白细胞介素15。
15、进一步，所述s01中还包括检测活化后的免疫细胞表面特征分子的表达率，以判断所述免疫细胞是否已经充分活化。
16、由上述方法制备的病毒感染效率提高的免疫细胞在制备免疫细胞病毒感染试剂盒中的应用。
17、进一步，所述试剂盒中还设置慢病毒和慢病毒感染试剂。
18、有益技术效果：
19、（1）本发明提供了一种简便易操作的纯物理手段来处理免疫细胞，得到病毒感染效率提高的免疫细胞，本发明方法不仅适用于t细胞，还适用于nk细胞。此外，本发明提供的这种纯物理手段处理的免疫细胞，不仅没有破坏免疫细胞的正常杀伤功能，且经过该方法处理的免疫细胞的病毒感染阳性率更为持久。
20、（2）具体来说，本发明提供的这种纯物理手段是一种“快冻快融”的技术手段，通过调控冷冻和解冻的温度，以及配合特定的冻存液配方来实现。在传统细胞冻存过程中，一般采用“缓慢冷冻”和“快速复苏”，其目的是最大限度地保护细胞存活率并维持细胞功能。缓慢冷冻是为了防止细胞内和细胞间形成大冰晶，大冰晶会破坏细胞膜结构，导致细胞死亡。然而本发明却采用了一种快速冷冻的方式，在很短时间内使细胞完全冻实。经验证，这种方法不仅没有损伤细胞的功能，反而提高了细胞的病毒感染效率和感染效率持久性，推测可能与快速冷冻的时间和特定的冻存液的保护有关。此外，本发明还发现，在冻存液的保护下，细胞解冻的时间也更快。
21、综上，本发明的提高免疫细胞病毒感染效率的方法简单方便，容易操作，且无需引入其他化学试剂和基因改造手段。经过本发明方法改造后的细胞可高效用于后续科研或临床试验。
1.一种提高免疫细胞病毒感染效率的方法，其特征在于，所述方法为物理方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞包括t细胞或nk细胞。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述急速冻存的温度为-80℃。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述快速解冻的温度为37℃。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预热的培养基包括t细胞完全培养基，成分包括x-vivo无血清培养基和200-800u/ml的人源白细胞介素2。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预热的培养基包括nk细胞完全培养基，成分包括x-vivo无血清培养基和200-800u/ml的人源白细胞介素15。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冻存液中加入的免疫细胞的量为1×10^7/ml。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s01中还包括检测活化后的免疫细胞表面特征分子的表达率，以判断所述免疫细胞是否充分活化。
9.权利要求1-8任一项所述的方法制备的病毒感染效率提高的免疫细胞在制备免疫细胞病毒感染试剂盒中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中还设置慢病毒和慢病毒感染试剂。
