本发明属于生物，尤其涉及一种苦瓜u6启动子mcu6p5及其应用。
背景技术：
1、遗传转化技术在作物性状改良上发挥了重要作用，改良的优异性状包括产量、品质、生物和非生物胁迫抗性等方面。其中，基于crispr/cas9的基因编辑技术因具有操作简便、编辑效率高、支持多靶点编辑、编辑形式多样等优势，成为作物遗传改良的新兴技术，已在许多作物性状改良上发挥了重要作用。u6启动子是一类细胞核内的rna聚合酶iii型启动子，常用于驱动sgrna(单链导向rna)在细胞核内的表达。在crispr/cas9基因编辑系统中，u6启动子起着至关重要的作用，因为它决定了sgrna的转录效率和特异性。一般构建作物的基因编辑载体都使用拟南芥的u6启动子(atu6p)，然而，不同物种的u6启动子具有物种特异性，使用植物本身的内源u6启动子能够显著提高编辑效率。截至目前，还未见苦瓜u6启动子的相关报道，这可能是导致苦瓜基因编辑体系无法突破的原因之一，因此克隆出具有高效转录活性的苦瓜的内源u6启动子，有利于crispr/cas9基因编辑载体的构建和体系的完善，对苦瓜功能基因研究及遗传育种具有重要的研究意义及应用价值。
技术实现思路
1、为克服现有技术的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种苦瓜u6启动子mcu6p5及其应用。
2、本发明是这样实现的，一种苦瓜u6启动子mcu6p5，所述启动子mcu6p5的dna核苷酸序列如seq id no:1所示。
3、本发明进一步公开了上述苦瓜u6启动子mcu6p5的克隆方法，该方法包括以下步骤：
4、(1)以苦瓜基因组dna为模板设计特异引物：
5、mcu6p5 f:5’-ttggtaatcagtatatgtctaattac-3’；
6、mcu6p5 r:5’-atgctaatcttctctgtatcgttcca-3’；
7、(2)通过上述特异引物对苦瓜基因组dna进行pcr扩增，得到苦瓜u6启动子mcu6p5。
8、本发明进一步公开了上述苦瓜u6启动子mcu6p5在苦瓜分子育种中的应用。
9、相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明将mcu6p5与gus基因融合构建到pbi121载体上，通过农杆菌侵染苦瓜的愈伤组织，经gus染色后明确mcu6p5具有启动子活性且活性比常用的拟南芥u6启动子(atu6p)强，该苦瓜u6启动子(mcu6p5)为苦瓜及近缘作物的基因编辑和遗传改良提供了新工具。
1.一种苦瓜u6启动子mcu6p5，其特征在于，所述启动子mcu6p5的dna核苷酸序列如seqid no:1所示。
2.权利要求1所述的苦瓜u6启动子mcu6p5的克隆方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
3.权利要求1所述的苦瓜u6启动子mcu6p5在苦瓜分子育种中的应用。
