本发明涉及植物组培，具体来说是一种大青组织培养快速繁殖方法及应用。
背景技术：
1、大青（clerodendrum cyrtophyllum turcz.）是马鞭草科大青属的落叶灌木植物。株高可达10米；幼枝被柔毛；叶椭圆形或长圆状披针形，先端渐尖或尖，全缘或具圆齿，两面无毛或沿脉疏被柔毛；伞房状聚伞花序，被黄褐色细绒毛及腺点，花冠白色，裂片卵形；核果球形或倒卵圆形，呈蓝紫色，为红色宿萼所包；花果期6月至次年2月。大青的叶和根具有清热解毒，凉血止血等功效，可用于治疗外感热病、热盛烦渴、咽喉肿痛、热毒痢、急性肠炎、痈疽肿毒、外伤出血等症状，是传统中药材。大青的嫩叶可鲜食，是重要的森林食物资源。因其花序硕大，果实红紫色，可配植于林缘、草坪等处，大青也具备一定的园艺观赏价值。
2、大青主要分布于中国华东及广西壮族自治区、广东、贵州、云南等省地。生于海拔1700米以下的平原，丘陵、山地林下或溪谷旁，喜温暖湿润的环境，适宜在光照充足、肥沃的土壤上生长。
3、大青的繁殖有3种方式：一是上山采集自然野生苗木进行集中种植，但因野生资源有限，难以满足大规模栽培的需求；二是扦插繁殖，但成活率极低，即便用abt1号生根粉处理，成活率也仅20％左右，难以在生产上推广应用；三是种子播种育苗，种子繁殖因其花期长导致种子成熟时间更长，从而存在繁殖期长的问题，而且种子繁育无法保持母株的优良性状。
技术实现思路
1、本发明的目的是针对大青现有繁殖技术存在的问题，提供一种大青组织培养快速繁殖方法及应用，以解决繁殖率低和繁殖周期长的问题。
2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种大青组织培养快速繁殖方法，步骤包括：
3、（1）外植体采集：连续晴朗2～3天后的某天，于上午10点后取未木质化的幼嫩茎段为外植体；
4、（2）外植体灭菌：剪除叶片的茎段经清洗后转移至超净台，用75%酒精溶液浸泡震荡灭菌20～30 s，无菌水涮洗2～3次，0.1%升汞溶液浸泡震荡灭菌7～8 min，无菌水涮洗4～5次，无菌滤纸吸干茎段表面水分；
5、（3）初代诱导：外植体剪成1.0～2.0 cm的带节小段，按极性接种于初代诱导培养基中培养15～20天；
6、所述初代诱导培养基的配方为：wpm培养基 + 6-ba 0.4～0.6 mg/l + naa 0.01～0.02 mg/l + pvp 3.0～5.0 g/l + 蔗糖25.0～35.0 g/l + 琼脂6.5～7.5 g/l；
7、（4）继代增殖：初代诱导的丛生芽切成单芽，按极性接种于继代增殖培养基中培养25～35天；
8、所述继代增殖培养基的配方为：ms培养基 + 6-ba 1.0～1.2 mg/l + tdz 0.01～0.02 mg/l + iba 0.4～0.6 mg/l + 蔗糖25.0～35.0 g/l + 琼脂6.5～7.5 g/l；
9、（5）壮芽培养：继代增殖培养的丛生芽分成单芽，按极性接种于壮芽培养基中培养25～35天；
10、所述壮芽培养基的配方为：ms培养基 + 6-ba 1.8～2.0 mg/l + 椰汁45.0～55.0ml/l + 蔗糖25.0～35.0 g/l + 琼脂6.5～7.5 g/l；
11、（6）生根培养：壮芽培养后的单芽接种于生根培养基中培养30～40天；
12、所述生根培养基的配方为：1/2 ms培养基 + naa 0.5～0.7 mg/l + iba 0.2～0.3 mg/l + 椰汁45.0～55.0 ml/l + 蔗糖25.0～35.0 g/l + 琼脂6.5～7.5 g/l。
13、进一步的，步骤（3）、（4）、（5）和（6）中，培养条件为：温度25±2℃，光强2000～3000lx，每日光照10～14 h进行光暗交替培养。
14、进一步的，所述初代诱导培养基的配方为：wpm 培养基+ 6-ba 0.5 mg/l + naa0.01 mg/l + pvp 4.0 g/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
15、进一步的，所述继代增殖培养基的配方为：ms培养基 + 6-ba 1.1 mg/l + tdz0.01 mg/l + iba 0.5 mg/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
16、进一步的，所述壮芽培养基的配方为：ms培养基 + 6-ba 1.9 mg/l + 椰汁50.0ml/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
17、进一步的，所述生根培养基的配方为：1/2 ms培养基 + naa 0.6 mg/l + iba 0.3mg/l + 椰汁50.0 ml/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
18、本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种药用植物大青的组培快繁方法，以未木质化的幼嫩茎段为外植体，通过初代诱导、继代增殖、壮芽培养和生根培养，建立了大青组培快繁技术体系，为其生产繁殖，以及野生种质资源的收集保存、引种驯化、开发利用等提供技术支撑。
19、大青对灭菌特别敏感，灭菌时间过长极易导致外植体死亡，即使未死亡的外植体也会严重褐化导致无法成功诱导丛生芽，而灭菌时间过短，极易导致污染。本发明通过外植体采集时机和灭菌时长的掌控，使外植体接种污染率控制在15%以内，同时减少灭菌对外植体的损伤，使死亡率控制在10%以内，从而有利于初代丛生芽的诱导。
20、大青富含酚类物质，外植体极易沿切口褐化，本发明初代诱导时在培养基中添加一定浓度的聚乙烯吡咯烷酮（pvp）可有效抑制外植体的褐变。本发明在壮芽和生根培养时添加一定浓度的椰汁可使叶片更加鲜绿，芽和根更加健壮，从而最终提高炼苗成活率。
21、本发明初代诱导率高达80%以上，增殖系数达到11.6左右，生根率达95%以上，可实现大青的高效繁殖，且几乎不受季节、气候等因素限制。
1.大青组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（3）、（4）、（5）和（6）中，培养条件为：温度25±2℃，光强2000～3000 lx，每日光照10～14 h进行光暗交替培养。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述初代诱导培养基的配方为：wpm培养基+6-ba 0.5 mg/l + naa 0.01 mg/l + pvp 4.0 g/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述继代增殖培养基的配方为：ms培养基 +6-ba 1.1mg/l + tdz 0.01 mg/l + iba 0.5 mg/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述壮芽培养基的配方为：ms培养基 + 6-ba1.9 mg/l + 椰汁50.0 ml/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述生根培养基的配方为：1/2 ms培养基 +naa 0.6 mg/l + iba 0.3 mg/l + 椰汁50.0 ml/l + 蔗糖30.0 g/l + 琼脂7.0 g/l。
7.根据权利要求1～6任一项所述方法在大青组织培养快速繁殖中的应用。
