本发明属于蒙药制剂及质量检测，特别涉及一种蒙药炒蒺藜配方颗粒及其指纹图谱的构建方法和指纹图谱。
背景技术：
1、炒蒺藜(tribuli fructus)，为蒺藜科植物蒺藜(tribulus terrestris l.)的干燥成熟果实。在蒙医理论体系中，炒蒺藜性甘、微苦，温，轻、锐、稀。可祛肾寒，镇“赫依”，利尿，消肿，强壮。用于尿频，尿闭，肾寒，肾“赫依”病，腰腿痛，游痛症，遗精，阳痿，水肿。现代研究表明，炒蒺藜具有降血压、免疫调节、解毒止痒，以及抑制乙酰胆碱作用等。传统蒙医倾向于将药材研磨成粉后直接入药，但此方式患者适应性较差，吞咽困难，口感不佳；且此种药材粉末极易吸潮，流动性差，无法适配现代自动配药机。针对以上问题，蒙药配方颗粒应运而生，在保证药效的同时，具有口感好、剂量调解方便、流动性好、吸湿性弱、规格标准统一等优点。但由于每种药材的物理性质不同，因此不同的药材所适合的辅料及其比例也不同，对本领域的技术人员来说也非显而易见的，这也加大了蒙药配方颗粒的制备难度。指纹图谱技术具有整体性和模糊性的特点，能够较为全面地反应出药物的内在成分，现已广泛应用于中药及民族药的质量评价、真伪鉴别等方面，也在国际上得到了广泛的认可，成为传统药物的新一代质量控制手段。
2、但目前暂无炒蒺藜药材及相关制剂超高效液相指纹图谱的专利和文献报道，2020版《中国药典》中仍采用紫外-可见分光光度法测定有效部位含量作为蒺藜的质量评价标准，如何提高炒蒺藜的质量控制方法，成为目前亟待解决的问题。指纹图谱虽然能全面地反应出药物的内在成分，但对于具体化合物的详细信息却难以提供。因此有学者采用液质构建指纹图谱，但采用液质构建指纹图谱成本太高，从而难以普及。此外，有学者尝试用液相构建指纹图谱，用液质来定性指纹图谱中的化学成分，但由于液相和液质的仪器内部构造不同，即使是同样的色谱柱和液相条件下，同一化合物在保留时间上仍有着较大差别，使得液相与液质上的色谱峰无法对应。且中药中的成分复杂，可能会有一些无市售及无法获得的对照品化合物，从而无法对指纹图谱进行峰指认。目前尚未有文献和专利报道这些问题的解决方案。
技术实现思路
1、本发明提供了一种蒙药炒蒺藜配方颗粒及其制备方法，旨在解决传统炒蒺藜给药方式(即炒蒺藜粉)依从性差、携带不便、易吸潮、流动性差等问题。同时提供一种炒蒺藜配方颗粒指纹图谱的构建方法，该构建方法属于“双标一质”法，“内标”用来推测超高效液相色谱图中未知色谱峰在超高效液相-质谱联用上的保留时间，使得超高效液相与超高效液相-质谱联用上的色谱峰相对应，是连接二者的桥梁；“外标”为采用对照品对液相色谱图进行峰指认，也是对超高效液相-质谱联用定性化合物结果的验证；“一质”为采用超高效液相-质谱联用来定性化合物，三者结合为“双标一质”。一方面旨在弥补单一指纹图谱只能模糊评价药材相似度而无法提供具体化学成分信息的缺陷；另一方面旨在提供一种快速、准确、成本较低的质量评价方法，确保炒蒺藜配方颗粒的质量可控性、安全性和有效性，克服现有质量控制方法单一性的缺陷，为提升炒蒺藜的质量标准和完善民族药质量检测体系提供了科学依据。
2、为实现本发明的上述目的，采用以下技术方案。
3、本发明提供一种蒙药炒蒺藜配方颗粒，组成成分包括炒蒺藜细粉和药用辅料。
4、进一步地，所述炒蒺藜细粉为蒙药炒蒺藜药材经粉碎后能够通过80～120目的筛下物，所述炒蒺藜药材为道地药材。
5、进一步地，所述药用辅料为药学上的常用辅料，包括羧甲基纤维素钠(cmc-naph7)、羟丙基甲基纤维素(hpmc e5)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp k-25、pvp k-30)中的一种或者多种组合。
6、进一步地，所述药用辅料中羧甲基纤维素钠(cmc-na ph7)的添加量为1wt％～5wt％。
7、进一步地，所述药用辅料中羟丙基甲基纤维素(hpmc e5)的添加量为3wt％～7wt％。
8、进一步地，所述药用辅料中聚乙烯吡咯烷酮(pvp k-25、pvp k-30)的添加量为3wt％～7wt％。
9、本发明还提供一种蒙药炒蒺藜配方颗粒的制备方法，具体包括以下步骤：
10、步骤1：将蒙药炒蒺藜药材粉碎后过筛，得到炒蒺藜细粉；
11、步骤2：将步骤1得到的炒蒺藜细粉与药用辅料和纯净水混合，进行湿法制粒；
12、步骤3：将步骤2所得制粒干燥，干燥后进行整粒，得到蒙药炒蒺藜配方颗粒。
13、优选的，步骤1中所述过筛为过80～120目筛，收集所筛下部分为炒蒺藜细粉。
14、优选的，步骤2中所述纯净水为药用纯化水，添加量为60～80ml/(100g炒蒺藜细粉)。
15、优选的，步骤2中所述混合的时间为20～40min。
16、优选的，步骤2中所述湿法制粒所用筛网的目数为10～20目。
17、优选的，步骤3中所述干燥的温度为40℃～60℃，干燥时间为3h～6h。
18、优选的，步骤3中所述整粒所用筛网的目数为14～25目。
19、进一步地，所述蒙药炒蒺藜配方颗粒的含水量＜8％；蒙药炒蒺藜配方颗粒的休止角＜40°，引湿率＜15％，粒度＜10％。
20、本发明还提供一种蒙药炒蒺藜配方颗粒指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
21、步骤1：取炒蒺藜配方颗粒研细，精密加入提取溶剂，密塞进行超声提取，滤过，取续滤液即得样品溶液；
22、步骤2：将步骤1得到的样品溶液采用超高效液相色谱进行检测，得到样品色谱图；
23、步骤3：将步骤2所得样品色谱图导入色谱评价软件中，标记共有峰，建立指纹图谱，生成对照图谱，并计算各批样品指纹图谱与对照图谱相似度，通过相似度对多个批次的炒蒺藜配方颗粒的质量进行评价；
24、步骤4：选择合适的内标成分，加甲醇混合，配成内标溶液，将内标溶液与待测样品溶液混合，配成供试品溶液；
25、步骤5：将供试品溶液采用超高效液相色谱进行检测，得到供试品超高效液相色谱图；
26、步骤6：将供试品溶液采用超高效液相-质谱联用进行检测，得到供试品超高效液相-质谱联用离子色谱图、一级和二级质谱相关信息；
27、步骤7：在步骤5所得超高效液相色谱图上选择一个与内标成分色谱峰保留时间相近的未知色谱峰，通过计算未知色谱峰与内标成分色谱峰在超高效液相色谱图上的相对保留时间，推测其在超高效液相-质谱联用上的保留时间，具体计算公式为tx2＝tr2(tx1/tr1)；(tx1为未知色谱峰在超高效液相色谱图上的保留时间，tr1为内标成分色谱峰在超高效液相色谱图上的保留时间，tx2为未知色谱峰在超高效液相-质谱联用上的保留时间，tr2为内标成分色谱峰在超高效液相-质谱联用上的保留时间)；
28、步骤8：根据步骤7所推测的未知色谱峰保留时间下的质谱图，进一步解析，定性该未知色谱峰所对应的化学成分；
29、步骤9：重复步骤7、步骤8可实现对超高效液相色谱图中所有未知色谱峰的定性鉴别；
30、步骤10：根据定性结果，选择相对应的化合物标准品按照步骤2的液相条件进样分析，对超高效液相色谱图进行对照品确认。
31、优选的，在步骤1中，所述提取溶剂为100％的甲醇；炒蒺藜配方颗粒质量与所述提取溶剂的料液体积比为1:100，如1g:100ml。
32、优选的，在步骤1中，所述超声提取的功率为160～200w；所述超声的频率为59khz；所述提取时间为30min。
33、优选的，在步骤2中，所述超高效液相色谱的检测波长为250nm～340nm，优选为340nm；所述超高效液相色谱采用的色谱柱为c18色谱柱(100×2.1mm，1.8μm)，所述超高效液相色谱的流速为0.2ml/min；所述超高效液相色谱的柱温为25～35℃，优选为30℃；所述超高效液相色谱的的进样量为1μl～5μl，优选为2μl；所述超高效液相色谱的流动相是以乙腈为流动相a，0.1％甲酸水为流动相b，进行梯度洗脱。
34、进一步地，所述梯度洗脱程序包括：
35、0～10min，流动相a的体积分数由13％～17％变至16％～20％；
36、10～11min，流动相a的体积分数由16％～20％变至23％～27％；
37、11～30min，流动相a的体积分数由23％～27％变至33％～37％；
38、30～35min，流动相a的体积分数由33％～37％变至58％～62％；
39、35～40min，流动相a的体积分数由58％～62％变至73％～77％。
40、所述洗脱程序优选为：
41、0～10min，流动相a的体积分数由15％变至18％；
42、10～11min，流动相a的体积分数由18％变至25％；
43、11～30min，流动相a的体积分数由25％变至35％；
44、30～35min，流动相a的体积分数由35％变至60％；
45、35～40min，流动相a的体积分数由60％变至75％。
46、优选的，步骤3中，所述色谱评价软件采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)》。
47、优选的，在步骤3中，所述共有峰共标记了16个，以9号峰为参照峰，16个峰的相对保留时间和相对峰面积如下：
48、1号峰：相对保留时间为0.231～0.234，相对峰面积为0.057～0.066；
49、2号峰：相对保留时间为0.338～0.344，相对峰面积为0.090～0.104；
50、3号峰：相对保留时间为0.369～0.376，相对峰面积为0.067～0.077；
51、4号峰：相对保留时间为0.484～0.489，相对峰面积为0.123～0.146；
52、5号峰：相对保留时间为0.510～0.517，相对峰面积为0.037～0.049；
53、6号峰：相对保留时间为0.535～0.542，相对峰面积为0.052～0.062；
54、7号峰：相对保留时间为0.787～0.795，相对峰面积为0.066～0.080；
55、8号峰：相对保留时间为0.813～0.818，相对峰面积为0.107～0.124；
56、9号峰：相对保留时间为1.000，相对峰面积为1.000；
57、10号峰：相对保留时间为1.049～1.052，相对峰面积为0.067～0.087；
58、11号峰：相对保留时间为1.347～1.350，相对峰面积为0.063～0.076；
59、12号峰：相对保留时间为1.670～1.674，相对峰面积为0.063～0.067；
60、13号峰：相对保留时间为1.803～1.808，相对峰面积为0.095～0.118；
61、14号峰：相对保留时间为1.825～1.832，相对峰面积为0.057～0.079；
62、15号峰：相对保留时间为2.045～2.053，相对峰面积为0.014～0.016；
63、16号峰：相对保留时间为2.208～2.215，相对峰面积为1.427～1.195。
64、优选的，16个共有峰分别为1号峰为咖啡酸、2号峰为槲皮素-3-龙胆二糖苷、3号峰为香兰素、4号峰为阿魏酸、5号峰为芦丁、6号峰为金丝桃苷、7号峰为阿文蒽酰胺e、8号峰为n-咖啡酰酪胺、9号峰为蒺藜酰胺、10号峰为二阿魏酰腐胺、11号峰为n-[4,5-二羟基-2-[[4-[羟基(苯基)甲基]-5-氧代-3-苯基-2h-呋喃-2-基]氧基]-6-(甲氧基甲基)氧杂-3-基]乙酰胺、12号峰为芹菜素-7-木糖苷、13号峰为克罗酰胺、14号峰为大麻素f、15号峰为白杨素-5-木糖苷、16号峰为对甲氧基肉桂酸乙酯。
65、优选的，在步骤3中，所述相似度比较结果为各批次供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.90。
66、进一步地，在步骤4中内标成分为常见的已知中药化学成分标准物质，选择原则为：与待测样品中其他成分在超高效液相色谱图上分离度良好，且在同一色谱条件下有较好的紫外吸收。
67、进一步地，步骤5中超高效液相色谱条件和步骤6中超高效液相-质谱联用中的超高效液相色谱条件应与步骤2中色谱条件一致。
68、进一步地，在步骤7中所述与内标成分色谱峰保留时间相近的未知色谱峰，该保留时间相近的范围建议为±5min以内；若未知色谱峰的保留时间在±5min以外，可从步骤8中所解析出的、定性后的色谱峰中选择与其保留时间相近的作为内标成分色谱峰。
69、进一步地，在步骤7中，所述内标成分色谱峰为步骤4中加入供试品溶液中的内标成分或者步骤8中所解析出的、定性后的化学成分。
70、优选的，在步骤10中，所述化合物标准品为香兰素、阿魏酸、芦丁、金丝桃苷、对甲氧基肉桂酸乙酯，进样分析的浓度分别为6.92μg/ml、2.389μg/ml、1.780μg/ml、2.552μg/ml、117.719μg/ml。
71、与现有技术相比，本发明的有益效果如下。
72、1、本发明优化了药用辅料的种类及其用量，从药学上的常用辅料中优选出羧甲基纤维素钠(cmc-na ph7)、羟丙基甲基纤维素(hpmc e5)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp k-25、pvp k-30)这三种，并进一步优化了各个药用辅料的添加量。采用优化后的药用辅料，能避免堵塞制粒机器，使得制粒过程顺畅，颗粒出成率高。
73、2、本发明提出并制备了蒙药炒蒺藜配方颗粒，只采用了单一药用辅料和纯净水，配方简单，成本降低，简化生产流程的同时最大程度降低了辅料对药材药效的影响。与传统炒蒺藜粉相比，休止角下降17.8°～21.3°，流动性增加，利于临床药品调剂，可适配现代自动配药机；引湿率下降4.1％～7.8％，吸湿性下降，稳定性增加；适口性得到改善，患者顺应性提高。实现了对蒙药剂型的改良，解决了蒙药传统给药方式流动性差、易吸潮、储藏条件苛刻、不便服用、不易携带等问题，也进一步为蒙药等民族药开发做出了贡献。
74、3、本发明建立蒙药炒蒺藜配方颗粒的uplc指纹图谱测定方法，优化了uplc的检测条件，包括流动相的组成、检测波长、梯度洗脱程序、柱温、流速、进样量等参数。采用优化后的方法和参数，所构建的uplc指纹图谱基线平稳、分离度好、精密度高、重复性好，能够全面地反应蒙药炒蒺藜的内在质量，填补了国内缺少炒蒺藜相关指纹图谱构建方法的空白，提高了现有的质量标准。此外基于“双标一质”技术，提供了共有峰所对应的完整化合物信息，对于一些价格及其昂贵的或市面上无市售及无法获得的对照品化合物，也能够进行峰指认。相较于传统的hplc指纹图谱分析速度更快，所消耗流动相溶液更少；相较于完全采用液质构建指纹图谱，此方法只需少量几针液质即可，运行成本较低，为炒蒺藜的质量控制提供更为科学、合理的依据。
1.一种蒙药炒蒺藜配方颗粒，其特征在于，组成成分包括炒蒺藜细粉和药用辅料；
2.根据权利要求1所述的蒙药炒蒺藜配方颗粒，其特征在于，所述羧甲基纤维素钠的添加量为1wt % ~5wt %；羟丙基甲基纤维素的添加量为3wt %~7wt %；聚乙烯吡咯烷酮的添加量为3wt %~7wt %。
3.一种蒙药炒蒺藜配方颗粒的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述蒙药炒蒺藜配方颗粒的制备方法，其特征在于，步骤1中所述过筛为过80~120目筛；步骤2中所述纯净水为药用纯化水，添加量为60~80ml/100g炒蒺藜细粉，步骤3中所述干燥的温度为40℃~60℃，干燥时间为3h~6h。
5.一种蒙药炒蒺藜配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述蒙药炒蒺藜配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤3中，所述共有峰共标记了16个，以9号峰为参照峰，16个峰的相对保留时间和相对峰面积分别如下：
7.根据权利要求5所述的一种炒蒺藜配方颗粒超高效液相指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤7中所述内标成分色谱峰为步骤4中加入供试品溶液中的内标成分，或是待测样品中已知的化学成分。
8.根据权利要求5所述蒙药炒蒺藜配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤9中，所述所有未知色谱峰的定性鉴别，定性结果为1号峰为咖啡酸、2号峰为槲皮素-3-龙胆二糖苷、3号峰为香兰素、4号峰为阿魏酸、5号峰为芦丁、6号峰为金丝桃苷、7号峰为阿文蒽酰胺e、8号峰为n-咖啡酰酪胺、9号峰为蒺藜酰胺、10号峰为二阿魏酰腐胺、11号峰为n-[4,5-二羟基-2-[[4-[羟基（苯基）甲基]-5-氧代-3-苯基-2h-呋喃-2-基]氧基]-6-（甲氧基甲基）氧杂-3-基]乙酰胺、12号峰为芹菜素-7-木糖苷、13号峰为克罗酰胺、14号峰为大麻素f、15号峰为白杨素-5-木糖苷、16号峰为对甲氧基肉桂酸乙酯。
9.根据权利要求5所述蒙药炒蒺藜配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤10中，所述化合物标准品为香兰素、阿魏酸、芦丁、金丝桃苷、对甲氧基肉桂酸乙酯，进样分析的浓度分别为6.92μg/ml、2.389μg/ml、1.780μg/ml、2.552μg/ml、117.719μg/ml。
