本发明涉及生物工程，具体涉及一种具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体及筛选方法和应用。
背景技术：
1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是由非洲猪瘟病毒(african swine fevervirus，asfv)感染家猪和各种野猪而引起的一种烈性传染病，给世界畜牧业造成了巨大经济损失。由于目前在世界范围内并没有研制出有效预防非洲猪瘟的疫苗，目前对于非洲猪瘟疫病的防控措施主要以预防传入和及时扑杀为主。鉴于当前疫苗研发过程的困难(耗时长，技术困难，疫苗评价体系不健全，高投入，需要专业人员)以及十分严峻的非洲猪瘟疫情，基于抗原抗体互作的免疫学方法以及单域抗体的应用优势可有助于疫病防控，该方法的核心在于制备出具有高特异性、稳定性以及强中和活性的单域抗体。目前报道的大多数为传统抗体，对于单域抗体鲜有报道，因此开发抗非洲猪瘟的单域抗体对非洲猪瘟病毒的检测以及疫病的防控具有重要意义。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体及筛选方法和应用，开发得到的单域抗体具有较强的特异性、高灵敏度以及强中和活性，可以用于日常疫病的免疫学检测和未来疫病防控的体系构建。
2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、本发明还提供了一种编码上述具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的基因，其核苷酸序列如seq id no.2所示。
4、本发明还提供了一种表达载体，包括上述编码具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的基因。
5、本发明还提供了一种噬菌体，表达上述编码具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的基因。
6、本发明还提供了上述具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体在非洲猪瘟病毒免疫学检测中的应用。
7、本发明还提供了一种检测试剂盒，包括上述具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体。
8、本发明还提供了一种e165r蛋白抑制剂，包括上述具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体。
9、本发明还提供了一种上述具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的筛选方法，包括以下步骤：
10、(1)使用e165r蛋白免疫表达重链抗体的小鼠；
11、(2)提取经e165r蛋白抗原免疫后的样本rna，然后pcr扩增分别得到重链可变区基因；
12、(3)将步骤(2)所得重链可变区基因克隆至载体中，然后转化至大肠杆菌er2738内，经辅助噬菌体m13ko7拯救后获得抗e165r蛋白噬菌体库，然后通过e165r蛋白筛选得到具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体。
13、进一步，步骤(3)中，所述载体为噬菌粒载体pcomb3xss。
14、进一步，步骤(3)中，筛选时的洗脱液采用5μg/ml浓度的非洲猪瘟病毒e165r蛋白纯品。
15、本发明具有以下有益效果：
16、1、本发明利用抗体基因工程技术和噬菌体展示技术构建e165r蛋白鼠源免疫噬菌体单域抗体库，从中筛选出e165r蛋白的单域抗体，为后期建立e165r蛋白的免疫学快速检测方法提供理论依据和物质基础。
17、2、本发明采用电穿孔法将重组载体转化至大肠杆菌er2738。同时，为了保证感受态的高活性，在本发明中转化前提前制备感受态并保证制备完成后能够立即用于转化，最大程度的保证转化的高效率。
18、3、本发明在后续的筛选过程中用高浓度的e165r蛋白纯品进行洗脱,目的是为了降低单域抗体非特异性结合，提高筛选的效率和准确率。
1.一种具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.一种编码权利要求1所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述的编码具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的基因。
4.一种噬菌体，其特征在于，表达权利要求2所述的编码具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的基因。
5.权利要求1所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体在非洲猪瘟病毒免疫学检测中的应用。
6.一种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体。
7.一种e165r蛋白抑制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体。
8.一种权利要求1所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，所述载体为噬菌粒载体pcomb3xss。
10.如权利要求8所述的具有中和活性的抗非洲猪瘟病毒e165r蛋白的单域抗体的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，筛选时的洗脱液采用5μg/ml浓度的非洲猪瘟病毒e165r蛋白纯品。
