本发明涉及生物，具体涉及一种特异性结合小反刍兽疫病毒磷蛋白的单克隆抗体。
背景技术：
1、小反刍兽疫(peste des petits ruminants，ppr)是由小反刍兽疫病毒(pestedes petits ruminants virus，pprv)引起的一种急性、烈性、接触性重大传染病，可感染山羊、绵羊、小鹿瞪羚及长角羚等，主要表现为发热、腹泻、肠炎、肺炎等临床症状，发病率和致死率均较高。2012年明确将ppr列入13种重点防范的外来动物疫病。因此，我们必须加强对ppr的研究工作。
2、pprv基因组共编码6种结构蛋白和2种非结构蛋白(mahapatra,et al,2006)，其中磷蛋白(p)是一个多功能蛋白，作为分子伴侣维持核蛋白(n)以可溶状态与病毒rna相连，与大蛋白(l)n端结合形成具有活性的rna聚合酶并在转录酶复合物中发挥辅助因子作用(chattopadhyay and shaila,2004；cevik,et al,2004)。过去，由于人们对pprv的错误认识，导致了国内外对pprv的研究很少。麻疹病毒属其他成员的p蛋白研究比较多，发现p蛋白与关键生物过程中调节转录、翻译和控制细胞周期等多种功能有关。fuentes等(2010)报道麻疹病毒p蛋白n-端有助于诱导n蛋白的折叠，p蛋白磷酸化对rna的合成尤其重要。sai ki等(2008)发现p蛋白的磷酸化对于牛瘟病毒基因组的转录和复制起着重要的调节作用。此外，p蛋白是麻疹病毒属中最不保守的蛋白，这也预示着该蛋白在小反刍兽疫病毒中起着重要的作用。
3、研究表明，prrv p蛋白在病毒免疫逃避反应中均发挥重要的作用。新近研究发现，pp rv p蛋白是一种新拮抗因子，可通过多种方式抑制ifn的产生，对抗宿主抗病毒先天免疫反应。p蛋白通过与stat1相互作用抑制stat1磷酸化，进而阻断jak-stat信号传导，对宿主抗病毒免疫反应表现为强烈的负调控作用(li p等，viruses，2019)。pprv p蛋白能够诱导宿主细胞生长停滞dna损伤蛋白(gadd34)的表达，抑制eif2α磷酸化和sgs的形成，进而抵抗宿主免疫应答，促进病毒复制(alfred n等，front vet sci，2021)。pprv p蛋白通过靶向人胚胎肾293t细胞和原代山羊成纤维细胞中ifn-调节因子(irf)3，与tbk1竞争结合irf3结合结构域(iad)，阻断tbk1与irf3之间的相互作用，降低irf3的磷酸化，进而干扰irf3的二聚化并阻断irf3的核运输，其结果表现为显著抑制rig-i样受体通路信号传导，并损害ifn-β和isgs的表达，从而抑制i型ifn的产生并促进病毒复制(li p等，j immunol，2021)。由此可见，pprv p蛋白在病毒致病与免疫机制中发挥着重要作用。
4、单克隆抗体是由单个b淋巴细胞克隆所分泌且只识别单个抗原表位的抗体，具有高度特异性、亲和力和定向性，在疾病诊断和治疗、生物学研究及工业领域都得到了广泛应用。抗体与特定抗原的结合能力取决于每对轻/重链对的可变区，且主要由互补决定区(cdr)确定。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本发明利用重组pprv p蛋白免疫动物，获得了稳定分泌抗pprv p蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测序得到了该单克隆抗体的互补决定区及可变区序列，可用于小反刍兽疫病毒体外检测或小反刍兽疫病毒致病与免疫机制研究。具体包括以下内容：
2、第一方面，本发明提供了一种特异性结合小反刍兽疫病毒磷蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链；
3、所述抗体重链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.2所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.3所示的cdr3；
4、所述抗体轻链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.4所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.5所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.6所示的cdr3。
5、优选地，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。
6、第二方面，本发明提供了一种核酸，所述核酸编码上述第一方面所述单克隆抗体的抗体重链和抗体轻链。
7、优选地，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。
8、第三方面，本发明提供了上述第一方面所述的单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒的试剂或试剂盒中的应用。
9、第四方面，本发明提供了上述第一方面所述的单克隆抗体在以非疾病诊断为目的的小反刍兽疫病毒体外检测或在小反刍兽疫病毒致病与免疫机制研究中的应用。
10、第五方面，本发明提供了一种荧光标记单克隆抗体，所述荧光标记单克隆抗体为荧光标记物的上述第一方面所述的单克隆抗体。
11、优选地，所述荧光标记物为可检测的小分子荧光标记物。
12、优选地，荧光标记物为小分子荧光有机染料fitc。
13、第六方面，本发明提供了上述第五方面所述的荧光标记单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒的试剂中的应用。
14、优选地，所述试剂用于直接免疫荧光法检测小反刍兽疫病毒。
15、第七方面，本发明提供了一种检测小反刍兽疫病毒的直接免疫荧光试剂盒，所述试剂盒包括上述第五方面所述的荧光标记单克隆抗体。
16、本发明的有益效果是：①本发明提供了一种特异性结合小反刍兽疫病毒磷蛋白的单克隆抗体；②所述单克隆抗体与小反刍兽疫病毒以及小反刍兽疫病毒磷蛋白均具有高亲和力和良好的反应原性；可用于非疾病诊断为目的的小反刍兽疫病毒体外检测以及小反刍兽疫病毒致病与免疫机制研究。
1.一种特异性结合小反刍兽疫病毒磷蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链；
2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1或2所述单克隆抗体的抗体重链和抗体轻链。
4.如权利要求3所述的核酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。
5.如权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒的试剂中的应用。
6.如权利要求1或2所述的单克隆抗体在以非疾病诊断为目的的小反刍兽疫病毒体外检测或在小反刍兽疫病毒致病与免疫机制研究中的应用。
7.一种荧光标记的单克隆抗体，其特征在于，所述荧光标记单克隆抗体为权利要求1或2所述的单克隆抗体。
8.如权利要求7所述的荧光标记单克隆抗体，其特征在于，所述荧光标记物为可检测的小分子荧光标记物。
9.如权利要求7或8所述的荧光标记单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒的试剂中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述试剂用于直接免疫荧光法检测小反刍兽疫病毒。
