本发明涉及抗体，例如特异性结合cd123的全长抗体。本发明进一步涉及包含所述cd123抗体的缀合物(例如抗体-药物缀合物或“adc“)、包含所述cd123抗体或其缀合物的组合物及使用所述cd123抗体或其缀合物治疗与表达cd123的细胞有关的病症(例如癌症)的方法。
背景技术：
1、cd123是介白素-3受体的α链(il-3rα或il3raa)，其与常见β链cd131形成异二聚体以帮助传递il-3的信号。il-3的生物学作用是刺激多能性细胞的存活及增殖。据信cd123涉及刺激急性骨髓性白血病(aml)细胞的增殖且在肿瘤生物学上具有直接功能。cd123经常表达在白血病干细胞(lsc)上，这种细胞群与病患复发相关。在正常人组织中，cd123表达大多限制在造血细胞，特别是浆细胞样树突细胞(pdc)，其构成<0.4％的人外周血单个核细胞。作为先天性免疫的组分，pdc应达病毒及细菌性刺激产生大量1型干扰素(ifn-α/β)。重要的是，cd123不表达在造血干细胞上。
2、预期白血病、淋巴瘤及骨髓瘤的新病例将占2017年在美国所诊断的1,688,780例预估新癌症病例的10.2％。cd123表达在多种血液恶性病的癌细胞上，包括急性骨髓性白血病(aml)，其中其表达>80％。表达cd123的血液癌细胞实例包括母细胞及白血病干细胞。与cd123表达相关的疾病包括aml、骨髓增生异常综合征(mds；低及高风险)、急性淋巴细胞性白血病(all，所有亚型)、弥漫性大型b细胞淋巴瘤(dlbcl)、慢性骨髓性白血病(cml)及母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(bpdcn)。
3、目前，这些疾病的治疗包括超过50种个别药物，尚有其他正在进行研究及临床试验。放射疗法还经常用于治疗血液癌症，有时连同药物疗法一起施用。还使用免疫疗法、基因疗法及个体化用药。然而，这些疗法可具有显著副作用及不良反应。因此，需要为表达cd123(il-3rα)的血液癌症提供新的改善的治疗。
技术实现思路
1、在本文中揭示的本发明涉及结合cd123的抗体及包含结合cd123的抗体的缀合物，如抗体-药物缀合物(adc)，以及制备及使用这些抗体及adc治疗病症的方法。
2、本文提供了特异性结合cd123的抗体。在一些实施方案中，本发明提供了一种分离的抗体，其特异性结合cd123，其中该抗体包含：重链可变区(vh)及轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含如下vh的三个互补决定区(cdr)，该vh包含seq id no:6、24、32、44、51或64的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如下vl的三个cdr，该vl包含seq id no:17、28、39、48、57或71的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述vh可包含：(i)vh cdr1，其包含seq id no:7、33、52或65的氨基酸序列；(ii)vh cdr2，其包含seq id no:8、25、34、45、53或66的氨基酸序列；及(iii)vh cdr3，其包含seq id no:9、35、46或67的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述vl区可包含：(i)vl cdr1，其包含seq id no:18、40、58或72的氨基酸序列；(ii)vl cdr2，其包含seq id no:19、42、60或74的氨基酸序列；及(iii)vl cdr3，其包含seq id no:20、42、60或74的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述vh可包含：(i)vh cdr1，其包含seq idno:7的氨基酸序列；(ii)vh cdr2，其包含seq id no:25的氨基酸序列；及(iii)vh cdr3，其包含seq id no:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述vl可包含：(i)vl cdr1，其包含seq id no:18的氨基酸序列；(ii)vl cdr2，其包含seq id no:19的氨基酸序列；及(iii)vlcdr3，其包含seq id no:20的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述vh可包含如seq id no:24或其在非cdr内的残基中具有一或多个保守性氨基酸取代的变体所示的序列，和/或所述vl可包含如seq id no:28或其在非cdr内的氨基酸中具有一或多个氨基酸取代的变体所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体可包含轻链及重链，所述轻链包含如seq idno:30所示的序列，所述重链包含如seq id no:27所示的序列。
3、还提供一种分离的抗体，其特异性结合cd123且包含由具有atcc登记号pta-124283的表达载体所产生的重链可变区及由具有atcc登记号pta-124284的表达载体所产生的轻链可变区。
4、还提供分离的抗体，其特异性结合cd123且与包含下列重链可变区(vh)及vl的抗体竞争结合cd123，所述重链可变区包含如下vh的三个cdr，该vh包含seq id no:6、24、32、44、51或64的氨基酸序列；所述vl包含如下vl的三个cdr，该vl包含seq id no:17、28、39、48、57或71的氨基酸序列。
5、还提供分离的cd123抗体，其包含：包含seq id no:7、8及9的氨基酸序列的vh及包含seq id no:18、19及20的氨基酸序列的vl。
6、还提供分离的cd123抗体，其包含：包含seq id no:7、25及9的氨基酸序列的vh及包含seq id no:18、19及20的氨基酸序列的vl。
7、还提供分离的cd123抗体，其包含：包含seq id no:33、34及35的氨基酸序列的vh及包含seq id no:40、41及42的氨基酸序列的vl。
8、还提供分离的cd123抗体，其包含：包含seq id no:33、45及46的氨基酸序列的vh及包含seq id no:40、41及42的氨基酸序列的vl。
9、还提供分离的cd123抗体，其包含：包含seq id no:52、53及54的氨基酸序列的vh及包含seq id no:58、59及60的氨基酸序列的vl。
10、还提供分离的cd123抗体，其包含：包含seq id no:65、66及67的氨基酸序列的vh及包含seq id no:72、73及74的氨基酸序列的vl。
11、在一些实施方案中，如本文所述的cd123抗体可包含经工程改造于特定位点包含含有酰基供体谷氨酰胺的标签。在一些实施方案中，该标签可包含选自如下的氨基酸序列：q、lqg、llqgg(seq id no:77)、llqg(seq id no:78)、lslsqg(seq id no:79)、gggllqgg(seq id no:80)、gllqg(seq id no:81)、llq、gsplaqshgg(seq id no:82)、gllqggg(seqid no:83)、gllqgg(seq id no:84)、gllq(seq id no:85)、llqllqga(seq id no:86)、llqga(seq id no:87)、llqyqga(seq id no:88)、llqgsg(seq id no:89)、llqyqg(seq idno:90)、llqllqg(seq id no:91)、sllqg(seq id no:92)、llqlq(seq id no:93)、llqllq(seq id no:94)、llqgr(seq id no:95)、llqgpp(seq id no:96)、llqgpa(seq id no:97)、ggllqgpp(seq id no:98)、ggllqga(seq id no:99)、llqgpgk(seq id no:100)、llqgpg(seq id no:101)、llqgp(seq id no:102)、llqp(seq id no:103)、llqpgk(seq id no:104)、llqapgk(seq id no:105)、llqgapg(seq id no:106)、llqgap(seq id no:107)及llqlqg(seq id no:108)。在一些实施方案中，所述含有谷氨酰胺的标签是llqg(seq idno:78)。
12、在一些实施方案中，本文所述的cd123抗体可包含在位置222、340或370处的氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述氨基酸修饰可是赖氨酸至精氨酸的取代。在一些实施方案中，所述氨基酸修饰可为k222r。
13、在一些实施方案中，本文所述的cd123抗体可包含接头。在一些实施方案中，所述接头可以是可切割的。在一些实施方案中，所述接头可选自：ac-lys-gly(乙酰基-赖氨酸-甘氨酸)、氨基己酸、ac-lys-β-ala(乙酰基-赖氨酸-β-丙氨酸)、氨基-peg2(聚乙二醇)-c2、氨基-peg3-c2、氨基-peg6-c2、ac-lys-val-cit-pabc(乙酰基-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧羰基)、氨基-peg6-c2-val-cit-pabc、氨基己酰基-val-cit-pabc、[(3r,5r)-1-{3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]丙酰基}哌啶-3,5-二基]双-val-cit-pabc、[(3s,5s)-1-{3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]丙酰基}哌啶-3,5-二基]双-val-cit-pabc、腐胺及ac-lys-腐胺。在一些实施方案中，所述接头可为ac-lys-val-cit-pabc(乙酰基-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧羰基)。
14、在一些实施方案中，本文所述的抗体包含恒定区。在一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体属于人igg1、igg2或igg2δa、igg3或igg4亚型。在一些实施方案中，所述抗体是igg1抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含n60g突变。
15、还提供缀合物，其包含与药剂(agent)缀合的本文所述的cd123抗体。在一些实施方案中，所述药剂可选自：细胞毒性剂、免疫调节剂、显影剂、治疗蛋白质、生物聚合物及寡核苷酸。在一些实施方案中，所述药剂可为细胞毒性剂。在一些实施方案中，所述细胞毒性剂可选自：蒽环类化合物(anthracycline)、耳抑素(auristatin)、喜树碱、考布他汀(combretastatin)、cbi二聚体、环丙基吡咯并吲哚啉(cpi)二聚体、cti二聚体、海兔毒素(dolastatin)、多卡米星(duocarmycin)、烯二炔、格尔德霉素(geldanamycin)、吲哚啉并-苯并二氮杂卓二聚体、美坦辛(maytansine)、嘌呤霉素、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、紫杉烷、长春花生物碱、微管溶素(tubulysin)、半星芒体(hemiasterlin)、司普力西欧他汀(spliceostatin)、普拉二烯内酯(pladienolide)及其立体异构体、电子等排体、类似物或衍生物。在一些实施方案中，所述细胞毒性剂可为cpi二聚体。在一些实施方案中，所述cpi二聚体是cpi-8314。在一些实施方案中，所述cpi二聚体可具有下列结构：
16、
17、在一些实施方案中，所述细胞毒性剂可具有iupac名称：(8s)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1s)-1-(氯甲基)-5-羟基-8-甲基-1,6-二氢吡咯并[3,2-e]吲哚-3(2h)-基]羰基}双环[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氢吡咯并[3,2-e]吲哚-4-基二氢磷酸盐。在一些实施方案中，所述细胞毒性剂可为c31h31cl2n4o7p或药物可接受的盐或溶剂合物。在一些实施方案中，所述细胞毒性剂可为三氟乙酸(tfa)盐形式：c31h31cl2n4o7p.c2hf3o2。
18、在其他实施方案中，所述细胞毒性剂可为mmad(单甲基耳抑素d)、0101(2-甲基丙氨酰基-n-[(3r,4s,5s)-3-甲氧基-1-{(2s)-2-[(1r,2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1s)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧庚-4-基]-n-甲基-l-缬氨酰胺)、3377(n,2-二甲基丙氨酰基-n-{(1s,2r)-4-{(2s)-2-[(1r,2r)-3-{[(1s)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-甲氧基-1-[(1s)-1-甲基丙基]-4-氧代丁基}-n-甲基-l-缬氨酰胺)、0131(2-甲基-l-脯氨酰基-n-[(3r,4s,5s)-1-{(2s)-2-[(1r,2r)-3-{[(1s)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-n-甲基-l-缬氨酰胺)或0121(2-甲基-l-脯氨酰基-n-[(3r,4s,5s)-1-{(2s)-2-[(1r,2r)-3-{[(2s)-1-甲氧基-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-n-甲基-l-缬氨酰胺)。
19、在一些实施方案中，所述缀合物可包含下式：抗体-(含有酰基供体谷氨酰胺的标签)-(接头)-(细胞毒性剂)。在一些实施方案中，所述含有酰基供体谷氨酰胺的标签可包含氨基酸序列llqg(seq id no:78)且所述接头可包含乙酰基-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧羰基。在一些实施方案中，所述含有酰基供体谷氨酰胺的标签可插入抗体位置e294-n297。在一些实施方案中，所述缀合物可在根据kabat的eu指数编号的抗体位置222处进一步包含赖氨酸至精氨酸的氨基酸取代(k222r)。
20、还提供药物组合物，其包含治疗有效量的本文所述cd123抗体或本文所述的cd123adc及药学可接受的载剂。
21、还提供分离的多核苷酸，其包含编码本文所述cd123抗体的核苷酸序列。还提供载体，其包含这种多核苷酸。
22、还提供分离的宿主细胞，其重组产生本文所述cd123抗体的任一者。还提供产生抗体的方法，包括在导致产生所述抗体的条件下培养这种宿主细胞及自所述宿主细胞或培养物分离所述抗体。
23、还提供治疗对象中与表达cd123的细胞相关的病症的方法，包括给有需要的对象施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含本文所述cd123抗体之任一者或任一所述抗体的缀合物及药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，所述病症是癌症。在一些实施方案中，所述癌症可为选自下组中的癌症：急性髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(bpdcn)、毛细胞白血病、b细胞非霍奇金氏(non-hodgkin’s)淋巴瘤(nhl)、多发性骨髓瘤、恶性浆细胞肿瘤、霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin’slymphoma)、结节性淋巴细胞为主型霍奇金氏淋巴瘤、卡勒氏病(kahler’s disease)及骨髓瘤病、浆细胞白血病、浆细胞瘤、b细胞幼淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、滤泡性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(burkitt’s lymphoma)、边缘区淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤、髓样白血病、瓦登斯特隆巨球蛋白血症(waldenstrom’s macroglobulienemia)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、小细胞淋巴细胞性淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(burkitt lymphoma)、原发性纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦登斯特隆巨球蛋白血症( macroglobulinemia)、结内边缘区b细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、富含t细胞/组织细胞大b细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性皮肤弥漫性大b细胞淋巴瘤(腿型)、老年人之ebv阳性弥漫性大b细胞淋巴瘤、炎症相关弥漫性大b细胞淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、alk阳性大b细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、hhv8相关多中心型克斯特曼病(hhv8-associated multicentric castleman disease)中产生的大b细胞淋巴瘤、特征介于弥漫性大b细胞淋巴瘤与伯基特淋巴瘤之间的未分类的b细胞淋巴瘤、特征介于弥漫性大b细胞淋巴瘤与典型霍奇金淋巴瘤之间的未分类的b细胞淋巴瘤及其他b细胞相关淋巴瘤。在一些实施方案中，所述癌症是aml。
24、还提供在具有表达cd123的恶性细胞的对象中抑制肿瘤生长或进展的方法，包括给有需要的对象施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含本文所提供的cd123抗体之任一者或所述抗体任一者的缀合物及药学上可接受的载剂。
25、还提供抑制对象中表达cd123的恶性细胞转移的方法，包括给有需要的对象施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含本文所提供的cd123抗体之任一者或所述抗体任一者的缀合物及药学上可接受的载剂。
26、还提供在具有表达cd123的恶性细胞的对象中诱导肿瘤退行的方法，包括给有需要的对象施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含本文所提供的cd123抗体之任一者或所述抗体任一者的缀合物及药学上可接受的载剂。
27、在另一方面，本发明提供有效量的组合物(例如药物组合物)，其包含本文所述cd123抗体或cd123 adc用于治疗有需要的对象中与cd123表达相关的病症(例如癌症或自身免疫病)。在一些实施方案中，有效量的组合物(例如药物组合物)包含用于在具有表达cd123的恶性细胞的对象中抑制肿瘤生长或进展的本文所述的cd123抗体或cd123adc。在一些实施方案中，提供有效量的组合物(例如药物组合物)，其包含用于在有需要的对象中抑制表达cd123的恶性细胞转移的本文所述的cd123抗体或cd123 adc。在一些实施方案中，有效量的组合物(例如药物组合物)包含用于在具有表达cd123的恶性细胞的对象中诱导肿瘤退行的本文所述的cd123抗体或cd123 adc。
28、在另一方面中，本发明提供本文所述的cd123抗体或cd123 adc用于治疗有需要的对象中与cd123表达相关的病症(例如癌症或自身免疫病)。在一些实施方案中，提供本文所述的cd123抗体或cd123 adc用于在具有表达cd123的恶性细胞的对象中抑制肿瘤生长或进展。在一些实施方案中，提供本文所述的cd123抗体或cd123 adc用于在有需要的对象中抑制表达cd123的恶性细胞的转移。在一些实施方案中，提供本文所述的cd123抗体或cd123adc用于在具有表达cd123的恶性细胞的对象中诱导肿瘤退行。
29、在另一方面，本发明提供本文所述的cd123抗体或cd123 adc在制备用于治疗与cd123表达相关的病症(例如癌症或自身免疫病)的药物中的用途。在一些实施方案中，提供了本文所述的cd123抗体或cd123 adc在制备用于抑制肿瘤生长或进展的药物中的用途。在一些实施方案中，提供了本文所述的cd123抗体或cd123 adc在制备用于抑制表达cd123的恶性细胞转移的药物中的用途。在一些实施方案中，提供了本文所述的cd123抗体或cd123adc在制备用于诱导肿瘤退行的药物中的用途。
30、本文还提供了将抗体与aclysvalcitpabc-dmae-co_cpi-000638314(aclyspabc-cpi-8314)缀合的方法。在一些实施方案中，该方法包括制备组合物，该组合物包含于包含30至100mm kpo4及150至200mm nacl的缓冲剂中的抗体与aclyspabc-cpi-8314；添加细菌转谷氨酰胺酶至该组合物；及温育该组合物以允许所述抗体与aclyspabc-cpi-8314缀合。在一些实施方案中，该组合物的ph为7。在一些实施方案中，该组合物包含每mg抗体0.5至2单位(u)的细菌转谷氨酰胺酶。在一些实施方案中，该组合物包含每mg抗体1u的细菌转谷氨酰胺酶。在一些实施方案中，aclyspabc-cpi-8314以对所述抗体10倍摩尔过量存在。在一些实施方案中，该组合物在25℃和持续混合下过夜保温。在一些实施方案中，该组合物进一步包含7.5％(v/v)二甲亚砜(dmso)。在一些实施方案中，缓冲剂包含30mm kpo4及150mmnacl。在一些实施方案中，缓冲剂包含100mm kpo4及200mm nacl。在一些实施方案中，所述抗体是抗肿瘤抗体。在一些实施方案中，所述抗肿瘤抗体是cd123抗体。
1.一种分离的抗体，其特异性结合cd123，其中该抗体包含重链可变区(vh)及轻链可变区(vl)，所述重链可变区包含包含seq id no:6、24、32、44、51或64的氨基酸序列的vh的三个互补决定区(cdr)，所述轻链可变区包含包含seq id no:17、28、39、48、57或71的氨基酸序列的vl的三个cdr。
2.权利要求1的抗体，其中所述vh包含：(i)vh cdr1，其包含seq id no:7、33、52或65的氨基酸序列；(ii)vh cdr2，其包含seq id no:8、25、34、45、53或66的氨基酸序列；及(iii)vh cdr3，其包含seq id no:9、35、46或67的氨基酸序列；和/或其中所述vl区包含：(i)vlcdr1，其包含seq id no:18、40、58或72的氨基酸序列；(ii)vl cdr2，其包含seq id no:19、42、60或74的氨基酸序列；及(iii)vl cdr3，其包含seq id no:20、42、60或74的氨基酸序列。
3.权利要求2的抗体，其中所述vh包含：(i)vh cdr1，其包含seq id no:7的氨基酸序列，(ii)vh cdr2，其包含seq id no:25的氨基酸序列，及(iii)vh cdr3，其包含seq id no:9的氨基酸序列；和/或其中所述vl包含：(i)vl cdr1，其包含seq id no:18的氨基酸序列，(ii)vl cdr2，其包含seq id no:19的氨基酸序列，及(iii)vl cdr3，其包含seq id no:20的氨基酸序列。
4.权利要求3的抗体，其中所述vh包含seq id no:24所示的序列或其在不在cdr内的残基中具有一或若干个保守性氨基酸取代的变体，和/或所述vl包含seq id no:28所示的氨基酸序列或其在不在cdr内的氨基酸中具有一或若干个氨基酸取代的变体。
5.权利要求3的抗体，其中所述抗体包含轻链及重链，所述轻链包含seq id no:30所示的序列，所述重链包含seq id no:27所示的序列。
6.一种分离的抗体，其特异性结合cd123，其中所述抗体包含由具有atcc登记号pta-124283的表达载体产生的重链可变区及由具有atcc登记号pta-124284的表达载体产生的轻链可变区。
7.一种分离的抗体，其特异性结合cd123且与权利要求1-6任一项的抗体竞争结合cd123。
8.权利要求1-7任一项的抗体，其中所述抗体包含于特定位点经工程改造的含有酰基供体谷氨酰胺的标签。
9.权利要求8的抗体，其中所述含有酰基供体谷氨酰胺的标签包含选自如下的氨基酸序列：q、lqg、llqgg(seq id no:77)、llqg(seq id no:78)、lslsqg(seq id no:79)、gggllqgg(seq id no:80)、gllqg(seq id no:81)、llq、gsplaqshgg(seq id no:82)、gllqggg(seq id no:83)、gllqgg(seq id no:84)、gllq(seq id no:85)、llqllqga(seq idno:86)、llqga(seq id no:87)、llqyqga(seq id no:88)、llqgsg(seq id no:89)、llqyqg(seq id no:90)、llqllqg(seq id no:91)、sllqg(seq id no:92)、llqlq(seq id no:93)、llqllq(seq id no:94)、llqgr(seq id no:95)、llqgpp(seq id no:96)、llqgpa(seq idno:97)、ggllqgpp(seq id no:98)、ggllqga(seq id no:99)、llqgpgk(seq id no:100)、llqgpg(seq id no:101)、llqgp(seq id no:102)、llqp(seq id no:103)、llqpgk(seq idno:104)、llqapgk(seq id no:105)、llqgapg(seq id no:106)、llqgap(seq id no:107)及llqlqg(seq id no:108)。
10.权利要求9的抗体，其中所述含有酰基供体谷氨酰胺的标签是llqg(seq id no:78)。
