本发明涉及化妆品，具体涉及一种乳酸菌和酵母共发酵来源的外泌体在制备护肤美容组合物中的应用。
背景技术：
1、外泌体是细胞分泌的球形脂质双层囊泡，是参与细胞间通讯的囊泡亚群，粒径大致为30～150nm，含有用于细胞间通讯的脂质、蛋白质和核酸等生物活性成分，其在疤痕改善、色素沉着矫正、皮肤年轻化和脱发恢复等方面具有显著功效(吴曙霞,邵佳青,杨健,等.国际外泌体化妆品管理现状与趋势.中国医药生物技术,2024,19(2):104-107.)。
2、动物、植物和微生物细胞都能产生外泌体。而考虑到安全性和便利性，酵母和乳酸菌成为制备外泌体的理想来源。
3、例如，专利文献cn116042422a公开了一种酵母(选自啤酒酵母、巴斯德毕赤酵母、假丝酵母)来源外泌体及其制备方法和应用，所得外泌体具备良好的抗炎症和抗氧化功效。
4、专利文献cn116867479a公开了一种包含黑酵母来源的外泌体，其作为有效成分的皮肤改善用化妆料组合物具有改善皮肤弹性、纹理、肤色和亮度，消减皮肤皱纹和美白效果。
5、专利文献cn113876643a公开了以源自酿酒酵母saccharomyces cerevisiae rd-03ri sc的外泌体及其溶解物为有效成分，具有抗老化、促进皮肤再生、改善皮肤弹性、消减皮肤皱纹的功能。
6、专利文献cn111225659a公开了一种以乳酸菌(选自由双歧杆菌属、乳杆菌属、链球菌属、明串珠菌属、片球菌属和乳球菌属)来源的外泌体为有效成分的抗衰老组合物，能够通过抑制mmp-1基因表达而促进胶原蛋白生成，从而消减皮肤皱纹，增加皮肤弹性，并预防紫外线引起的皮肤损伤。
7、现有技术主要是通过乳酸菌或酵母单独培养获取外泌体，应用于护肤美容，目前未见以茶叶作为发酵底物，细菌与真菌共发酵获取外泌体的研究报道。
技术实现思路
1、本发明的目的在于利用乳酸菌和酵母共发酵制备具有护肤美容功效的外泌体，将其应用于化妆品开发。
2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
3、本发明提供了一种乳酸菌和酵母共发酵来源的外泌体在制备护肤美容的组合物中的应用，所述外泌体从以茶叶为发酵底物，乳酸菌和酵母共发酵的发酵液中分离。
4、研究表明，以茶叶为发酵底物，以乳酸菌和酵母为发酵菌株，共发酵所制备的外泌体兼具两种菌株的属性。相比于单菌株发酵制备的外泌体，本发明共发酵制备的外泌体在促进皮肤细胞胶原蛋白生成和抑制皮肤细胞黑色素生成等方面的作用显著提升，显示协同作用。因此，本发明将共发酵制备的外泌体应用于制备护肤美容产品。
5、本发明以新鲜茶叶作为共发酵底物，具有丰富的活性物质来源。进一步的，所述共发酵的培养基由新鲜茶叶粉碎后加水稀释8-12倍，再加入红糖后制得，红糖与茶叶的质量比为1:5。红糖中富含蔗糖可供乳酸菌发酵，并且由于未经结晶，保留了大量来自于甘蔗的维生素和矿质元素，有利于乳酸菌生长。
6、进一步的，茶叶采用安吉白茶鲜叶。安吉白茶鲜叶可采用但不限于夏秋季鲜叶。安吉白茶是安吉当地特有茶种，种植于山区，由于山区昼夜温差大从而病虫害不易滋生，可不施用农药，以此为原料安全性高。相较于春季的明前茶和雨前茶，夏秋季茶叶内的茶多酚等活性物质因积累时间长使得含量更丰富。
7、本发明采用鼠李糖乳杆菌和酿酒酵母作为共发酵菌种，鼠李糖乳杆菌和酿酒酵母均是分布和用途广泛的食品级微生物，具有良好的发酵特性和充分的安全性，且两者在生理生化特性上具有互利共生关系。
8、进一步的，所述乳酸菌采用保藏号为cgmcc 1.60148的鼠李糖乳杆菌lactobacillus rhamnosus zju2303-rh11。
9、进一步的，所述酵母采用保藏号为cgmcc 2.6673的酿酒酵母saccharomycescerevisiae zju2014-rh05。
10、本发明采用的鼠李糖乳杆菌lactobacillus rhamnosus zju2303-rh11和酿酒酵母saccharomyces cerevisiae zju2014-rh05均为公众能够得到的生物材料，公开保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)。
11、进一步的，所述外泌体的制备方法包括以下步骤：
12、(1)配制发酵培养基：将安吉白茶鲜叶粉碎后冲水混合，茶叶与水的比例为100份水中加入茶叶10份，并加入2份红糖；
13、(2)将保藏号为cgmcc 1.60148的鼠李糖乳杆菌lactobacillus rhamnosuszju2303-rh11和保藏号为cgmcc 2.6673的酿酒酵母saccharomyces cerevisiae zju2014-rh05分别活化并按照接种密度0.5～1.5×107cfu/ml接种至发酵培养基中，25～30℃发酵48～72小时，得到发酵液；
14、(3)外泌体制备：将发酵液于4℃、以5000g离心10min，对分离菌体后得到的上清液先用0.45μm滤膜过滤，再于4℃、以15000g离心20min，所得沉淀即为所述外泌体。
15、上述方法制备的外泌体呈圆球状，双层膜结构，粒径30～130nm。
16、本发明提供的护肤美容组合物以乳酸菌和酵母共发酵来源的外泌体作为主要活性物质，添加不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或受试者无毒副作用的任何制剂或载体介质作为辅料。
17、进一步的，所述护肤美容包括消减皮肤皱纹、提高皮肤弹性、美白中至少一种。
18、具体的，本发明通过共发酵制备的外泌体能够促进皮肤细胞胶原蛋白生成，起到消减皮肤皱纹、提高皮肤弹性作用。
19、所述外泌体能够抑制皮肤细胞黑色素生成，起到皮肤美白作用。
20、进一步的，所述组合物为皮肤外用组合物。
21、进一步的，所述组合物为化妆品组合物。
22、本发明具备的有益效果：
23、本发明以新鲜茶叶作为发酵底物，利用乳酸菌和酵母共发酵制备外泌体，发酵原料安全性高，含有丰富活性物质，表现出协同效应，相比于单菌株发酵制备的外泌体，能够更好地发挥护肤美容功效。
1.乳酸菌和酵母共发酵来源的外泌体在制备护肤美容的组合物中的应用，其特征在于，所述外泌体从以茶叶为发酵底物，乳酸菌和酵母共发酵的发酵液中分离。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述共发酵的培养基由新鲜茶叶粉碎后加水稀释8-12倍，再加入红糖后制得，红糖与茶叶的质量比为1:5。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，茶叶采用安吉白茶夏秋季鲜叶。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述乳酸菌采用保藏号为cgmcc 1.60148的鼠李糖乳杆菌lactobacillus rhamnosus zju2303-rh11。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酵母采用保藏号为cgmcc 2.6673的酿酒酵母saccharomyces cerevisiae zju2014-rh05。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外泌体的制备方法包括以下步骤：
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外泌体的粒径为30～130nm。
8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述护肤美容包括消减皮肤皱纹、提高皮肤弹性、美白中至少一种。
9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物为皮肤外用组合物。
10.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。
