本发明涉生物样本保存的领域。更具体地,本发明涉及一种用于粪便样本保存的样本保存液、用于配制所述样本保存液的试剂盒、使用所述样本保存液或试剂盒来保存粪便样本的方法以及所述样本保存液或试剂盒在粪便样本保存中的应用。
背景技术:
1、据报道,幽门螺杆菌(hp)感染率约为44.2%。临床共识认为,根除幽门螺杆菌可有效地降低胃癌发生风险。幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性微需氧的细菌,该细菌生存能力极强,能够在胃中强酸性环境中生存,是目前发现的唯一能够在胃里面生存的细菌。现在常规检测幽门螺旋杆菌的非侵入性方法主要是尿素呼气实验等,但c13/c14呼气实验具有放射性,对人体有害,且检测值处于临界值附近时,结果不可靠,需要其他手段检测。现在有研究使用粪便样本作为来源检测其中的幽门螺旋杆菌的核酸进行的检测也是一种重要的检测方法,也正在被临床所接受。
2、众所周知,人的粪便产自肠道,其中携带了大量的肠道微生物,同时含有大量的消化残余物及细菌产生的各种核酸降解酶和各种pcr抑制剂,使得粪便样本中的细胞及核酸极易受到破坏和降解。而且,粪便离体后,其环境也发生了变化,主要是从无氧环境转变为有氧环境,其中的部分细菌还保持了部分活性,继续代谢和生长,而由于环境的变化,不同细菌其增长与死亡的速率已不同于排便前。
3、目前常用的保存方法是通过采集粪便样本后立即冻存在-20℃或者更低的温度中,以避免脱落细胞的降解或其它生化反应,同时保持粪便内的细菌构成不发生显著性的变化。但是,粪便样本采集很多时候并不是在实验室中进行,即,采集的粪便样本或多或少都需要在常温下放置一段时间才能放入冰箱中-20℃保存。这个过程容易造成原本就很少量的脱落细胞进一步损失以及大量厌氧菌的死亡,从而影响后续检测。
4、保存生物样本的保存液,经常使用市售utm保存液,又或者细胞保存液等保存生物样本如唾液中的细胞,但是对于细胞样本中的核酸则不能长期保存。粪便样本检测幽门螺旋杆菌中的dna的第一步就是粪便样本的采集和保存,若无一种良好的粪便样本dna的保存技术,则整个从粪便样本中检测幽门螺旋杆菌dna的方案变无从开始。
5、针对上述现有技术,现在需要一种可以在环境温度下保存粪便中幽门螺旋杆菌dna的样本保存液及其使用方法来辅助幽门螺旋杆菌核酸检测,以提高现有基因检测或临床诊断的便利性和准确性。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题中的一个或多个技术问题,本发明在第一方面提供了一种用于粪便样本保存的样本保存液,所述样本保存液包含十二烷基硫酸锂、柠檬酸钠、磷酸氢钠肌酸二钠、酒石酸、氯化锂、尿素、乙醇和脱乙酰壳多糖。
2、本发明在第二方面提供给了一种用于粪便样本保存的试剂盒,所述试剂盒包含用于配制本发明第一方面所述的样本保存液的试剂。
3、本发明在第三方面提供了一种保存粪便样本的方法,所述方法使用本发明第一方面所述的样本保存液或本发明第二方面所述的试剂盒进行保存。
4、本发明在第四方面提供了本发明第一方面所述的样本保存液或本发明第二方面所述的试剂盒在粪便样本保存中的应用,优选的是,所述保存为常温保存。
5、相对于现有技术,本发明主要具有以下优点:
6、(1)可实现粪便样本的总dna在环境稳定下运输和保存,对样本保存液中的核酸进行提取纯化后,获得的dna和rna质量好、得量高,可完成pcr、qpcr、ngs等各种基因检测及分析实验。
7、(2)确保粪便样本的dna在保存过程中的完整性,即获得高分子量的dna。
8、(3)能够快速灭活粪便样本中的病原体微生物,抑制各种病毒或细菌生长。
9、(4)室温保存痕量的幽门螺旋杆菌dna不降解,从而能够实现对幽门螺旋杆菌核酸检测的高质量保存。
1.一种用于粪便样本保存的样本保存液,其特征在于,所述样本保存液包含十二烷基硫酸锂、柠檬酸钠、磷酸氢钠肌酸二钠、酒石酸、氯化锂、尿素、乙醇和脱乙酰壳多糖。
2.根据权利要求1所述的样本保存液,其特征在于:
3.根据权利要求1或2所述的样本保存液,其特征在于:
4.根据权利要求1至3中任一项所述的样本保存液,其特征在于:
5.根据权利要求1至4中任一项所述的样本保存液,其特征在于:
6.一种用于粪便样本保存的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含用于配制权利要求1至5中任一项所述的样本保存液的试剂。
7.一种保存粪便样本的方法,其特征在于,所述方法使用权利要求1至5中任一项所述的样本保存液或权利要求6所述的试剂盒进行保存。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:
10.根据权利要求1至5中任一项所述的样本保存液或权利要求6所述的试剂盒在粪便样本保存中的应用;优选的是,所述保存为常温保存。