本公开涉及具有l-异亮氨酸生产能力的微生物，所述微生物中导入了编码谷氨酸脱氢酶的外源基因；使用所述微生物生产l-异亮氨酸的方法；和用于生产l-异亮氨酸的组合物，所述组合物包括所述微生物。
背景技术：
1、l-异亮氨酸是20种氨基酸当中的一种支链氨基酸，并且被分类成必需氨基酸并广泛用于动物饲料、食品添加剂和医药领域。由于l-异亮氨酸具有代谢后产生能量、产生血红蛋白、控制血糖水平、肌肉构建和修复等功能，因此其越来越多地不仅用于流体、营养物质和运动营养，还用于动物饲料。
2、对于l-异亮氨酸的生产，谷氨酸棒状杆菌(corynebacterium glutamicum)和大肠杆菌(escherichia coli)作为代表性微生物来使用。在这些微生物中，l-异亮氨酸与其它支链氨基酸、l-缬氨酸和l-亮氨酸共享一条主要的生物合成途径。关于l-异亮氨酸的生物合成途径，糖酵解过程中产生的丙酮酸和由l-苏氨酸(一种源自天冬氨酸(aspartic acid,aspartate)的氨基酸)产生的2-酮丁酸被用作最终生产l-异亮氨酸的前体。
3、已知一种使用各种微生物及其变体生产l-氨基酸的方法(美国专利号10113190)。然而，在使用变体的方法中，会生成除l-异亮氨酸以外的多种副产物，从而引起纯化步骤中l-异亮氨酸纯度降低的问题。
4、对此，为了提高l-异亮氨酸的纯度，已知一种纯化l-异亮氨酸的方法(美国专利号6072083)。然而，这种纯化方法的缺点是需要单独另外的纯化过程。因此，需要开发一种提高l-异亮氨酸纯度的方法。
5、与此同时，l-谷氨酸是一种前体，其在包括l-异亮氨酸在内的氨基酸的合成中提供胺基。在生产氨基酸时，加强前体l-谷氨酸的合成是必不可少的。然而，谷氨酸脱氢酶(已知在生产l-异亮氨酸的微生物中生产谷氨酸)的增强会引起副反应，即通过异亮氨酸的中间体2-酮丁酸脱氢生产副产物α-氨基丁酸(aaba)(microb cell fact.2017mar23；16(1):51)。因此，存在降低l-异亮氨酸纯度和生物合成效率的问题。
技术实现思路
1、[技术问题]
2、本发明人开发了具有l-异亮氨酸生产能力的微生物，所述微生物中导入了编码谷氨酸脱氢酶的外源基因；使用所述微生物生产l-异亮氨酸的方法；和用于生产l-异亮氨酸的组合物，所述组合物包括所述微生物，从而完成了本公开。
3、[技术方案]
4、本发明的一个目的是提供具有l-异亮氨酸生产能力的微生物，所述微生物中导入了源自枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)或红螺菌目(rhodospirillales)的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因。
5、本发明的另一个目的是提供生产l-异亮氨酸的方法，所述方法包括在培养基中培养所述微生物的步骤。
6、本公开的又一个目的是提供用于生产l-异亮氨酸的组合物，所述组合物包括所述微生物。
7、[有利效果]
8、本公开的具有l-异亮氨酸生产能力的微生物，所述微生物中导入了编码谷氨酸脱氢酶的外源基因，可通过产生较少的副产物，以高产率生产l-异亮氨酸，因此其可有用地适用于l-异亮氨酸的工业生产。
1.具有l-异亮氨酸生产能力的微生物，所述微生物中导入了源自枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)或红螺菌目(rhodospirillales)的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因。
2.根据权利要求1所述的微生物，其中所述源自枯草芽孢杆菌的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因；和所述源自红螺菌目的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因分别具有seq id no:2和4的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物的α-氨基丁酸(aaba)的生产量相对于l-异亮氨酸的生产量降低。
4.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物是棒状杆菌属(corynebacterium)微生物。
5.根据权利要求4所述的微生物，其中所述棒状杆菌属微生物是谷氨酸棒状杆菌(corynebacterium glutamicum)。
6.生产l-异亮氨酸的方法，所述方法包括在培养基中培养具有l-异亮氨酸生产能力的微生物的步骤，所述微生物中导入了源自枯草芽孢杆菌或红螺菌目的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因。
7.根据权利要求6所述的方法，进一步包括从培养的所述微生物或培养基中回收l-异亮氨酸的步骤。
8.根据权利要求6所述的方法，其中所述源自枯草芽孢杆菌的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因；和所述源自红螺菌目的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因分别具有seq id no:2和4的核苷酸序列。
9.根据权利要求6所述的方法，其中所述方法使α-氨基丁酸(aaba)的生产量相对于l-异亮氨酸的生产量降低。
10.用于生产l-异亮氨酸的组合物，所述组合物包括具有l-异亮氨酸生产能力的微生物，所述微生物中导入了源自枯草芽孢杆菌或红螺菌目的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述源自枯草芽孢杆菌的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因；和所述源自红螺菌目的编码谷氨酸脱氢酶的外源基因分别具有seq id no:2和4的核苷酸序列。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述组合物使α-氨基丁酸(aaba)的生产量相对于l-异亮氨酸的生产量降低。
