本发明涉及饲料中农药残留的测定方法，特别涉及一种饲料中三唑类农药的同步测定方法。
背景技术：
1、饲料是畜禽养殖中最重要的投入品，饲料质量安全是动物性食品安全的前提和根本保证。畜禽养殖中饲料的主要来源为蔬菜、水果、农作物等等，而三唑类农药作为一类高效、广谱的杀菌剂，广泛应用于蔬菜、水果、稻谷等农作物种植中的病虫害防治，这使得三唑类农药很容易在蔬菜、水果、农作物、土壤和水体中残留，不仅带来严重的环境污染问题，还可通过食物链传递、环境蓄积污染饲料等方式，在动物组织中富集，引发食品质量安全隐患，对消费者健康造成威胁。而且，gb 2763—2019《食品安全国家标准食品中农药残留最大限量》中对部分三唑类农药的残留限量作出了明确的规定。为控制该类农药残留，需从饮用水、土壤、饲料、畜产品等环节进行全链条的监测。
2、然而，现有技术中，对三唑类农药残留的测定主要集中在水体、土壤和蔬菜、水果等植物性样品上，在其过程中，样品净化多采用固相萃取小柱净化，操作步骤繁琐、费时费力。现有技术中，缺少对饲料基质样品中三唑类农药残留的测定方法，也鲜有文献对此进行论述。
3、因此，建立一种简便、快速、准确测定饲料中多种三唑类农药的方法，对从养殖环节控制动物性食品中的农药残留风险，保障动物性食品安全具有重要的意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明提供一种饲料中三唑类农药的同步测定方法，其采用captivaemr-lipid固相萃取柱对饲料样品的提取液进行净化，建立了饲料中7种三唑类农药的分析方法，可以为饲料质量安全检测提供技术支撑，具有重要研究意义和实际应用价值。
2、本发明公开了一种饲料中三唑类农药的同步测定方法，所述三唑类农药为氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑；所述方法包括以下步骤：
3、s1，基于各待测药物的相应标准品，配制基质匹配系列标准工作溶液；
4、s2，将待测饲料试样用乙腈提取，得到待净化溶液；
5、s3，将所述待净化溶液全部通过captiva emr-lipid固相萃取柱，收集全部流出液，用乙腈定容，混匀后通过微孔滤膜，得到待测试样溶液；
6、s4，将所述基质匹配系列标准工作溶液和待测试样溶液进行高效液相色谱-串联质谱测定，以基质匹配系列标准工作溶液的浓度为横坐标，以测定的各待测药物的色谱峰面积为纵坐标，绘制工作曲线，采用外标法对各待测药物进行定量。
7、在本发明所公开的方法中，由于采用通过式capt iva emr-lipid固相萃取柱进行净化，不但能够高选择性和高效的去除脂类杂质，而且能够最大程度的减少分析物的流失，从而显著提供本发明方法的可靠性和耐用性。同时，其无需活化、洗脱等操作，即，无需活化和平衡等步骤即可获得较高的回收率，从而简化了样品前处理过程。
8、本发明通过采用通过式固相萃取柱captiva emr-lipid结合高效液相色谱-串联质谱法，建立了能够对饲料中氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑残留准确定性和定量的快速检测方法，对养殖环节控制动物性食品中的农药残留风险、保证动物性食品安全提供了新思路。
9、在根据本发明所公开的方法中，在所述步骤s4中，所述高效液相色谱-串联质谱中高效液相色谱的色谱柱为c18柱，流动相体系为流动相a和流动相b，其中，流动相a为水，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱。在本发明中，由于采用水和甲醇作为流动相，使得饲料中氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑七种三唑类农药的响应值均较高，并且各色谱峰之间能够实现较好的分离度，而且峰形对称性较好，极好的满足了检测要求。
10、在根据本发明所公开的方法中，其中在高效液相色谱中，流动相体系的流速为0.1-0.5ml/min,流动相体系的梯度洗脱程序为：
11、0.0～1.0min，所述流动相a的体积百分比为30％；
12、1.0～5.0min，所述流动相a的体积百分比由30％匀速降至5％；
13、5.0～9.0min，所述流动相a的体积百分比为5％；
14、9.0～9.1min，所述流动相a的体积百分比由5％匀速增至30％；
15、9.1～12.0min，所述流动相a的体积百分比为30％。
16、初始甲醇比例设为70％，这适当增大流动相中的有机相比例可以缩短样品检测时间，解决因七种三唑类药物的极性较小而出峰时间较晚的问题；1-5min，甲醇比例逐渐增大，能够使得各待测物依次从色谱柱中流出；当5-9min，甲醇比例为95％，借助于高比例的有机相能够使得样品中的非极性杂质尽可能流出，避免在色谱柱中的堆积，污染色谱柱；而当9-12min，回到初始比例，平衡3min后从而能够进下一针样品。基于本发明所设定的整个梯度洗脱程序，使得能够保证氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑七种药物在合适的时间出峰并获得良好的峰型，同时避免其他杂质在色谱柱中的堆积，保证在反复多次进样时依旧能获得较好的重复性。
17、在根据本发明所公开的方法中，高效液相色谱-串联质谱中质谱的测定条件为：离子源为电喷雾离子源，监测方式为多反应监测，扫描方式为正离子扫描，电喷雾电压5.5kv，去溶剂温度550℃，气帘气35psi，喷雾气50ps i，碰撞气9ps i。
18、在根据本发明所公开的方法中，在所述步骤s1中，称取氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑七种农药标准品适量，通过乙腈稀释定容成为1μg/ml的混合标准溶液，再用空白基质溶液稀释成浓度分别为0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的基质匹配系列标准工作溶液。
19、在根据本发明所公开的方法中，在所述步骤s2中，包括：
20、步骤s21，取待测饲料试样1-5g，置于50ml离心管中，加入乙腈5-15ml，超声提取15min，于4000r/min离心3-5min，取上清液于另一离心管中；
21、步骤s22，下层残留物再次用乙腈5-15ml重复提取，取上清液；
22、步骤s23，将步骤s21和步骤s22中所得上清液合并，涡旋后加入无水硫酸镁和无水乙酸钠进行涡旋、振荡，以获得最终的上清液；
23、步骤s24，将最终所得上清液于40℃水浴氮气吹至约2-5ml，加水定容至5ml，混匀，得到待净化溶液。
24、其中，优选地，在步骤s21中，取待测饲料试样5g，置于50ml离心管中，加入乙腈10ml，超声提取15min，于4000r/min离心5min，取上清液于另一离心管中；在步骤s22中，下层残留物再次用乙腈10ml重复提取，取上清液；然后再步骤s24中，将最终所得上清液于40℃水浴氮气吹至约4ml，加水定容至5ml，混匀，得到待净化溶液。
25、由于借助于乙腈、无水硫酸镁和无水乙酸钠对待测样品进行预处理，这样最终所得上清液中的脂肪、蛋白质、色素等干扰物质被大大去除，使得氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑七种药物的残留最大程度上被释放出来。而且，紧接着使用了captiva emr-lipid固相萃取柱，从而使得其中脂类杂质进一步被高选择性和高效的去除，同时，如上面已经提到的，在此过程中，分析物却没有被减少。即，通过本发明中乙腈、无水硫酸镁和无水乙酸钠对待测样品进行预处理以及借助于capt iva emr-lipid固相萃取柱的方案，在最大程度去除杂质的情况下，能够最大程度的减少分析物的流失。
26、在根据本发明所公开的方法中，在所述步骤s4中，液相色谱的条件包括：色谱柱的柱温箱温度为40℃，进样量为5μl。
27、有益效果：在本发明的方法中，采用乙腈定容提取加借助于通过式固相萃取柱captiva emr-lipid小柱进行净化的方案，并且采用液相色谱-串联质谱检测手段进行上机测定，建立了一种准确、快速、简便的饲料中七种三唑类农药残留的同步测定方法。本发明所提供方法的提取和净化效果好，灵敏度搞，能以较高的提取效率、较低的时间成本和经济成本实现饲料样品中氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑残留的准确定性和定量，该方法可以为饲料质量安全检测提供技术支撑。
28、下面结合附图中所示的实施例以及附图标记详细公开本发明的饲料中三唑类农药的同步测定方法。
1.一种饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，所述三唑类农药为氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑；所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，在所述步骤s4中，所述高效液相色谱-串联质谱中高效液相色谱的色谱柱为c18柱，流动相体系为流动相a和流动相b，其中，流动相a为水，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱。
3.根据权利要求2所述的饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，其中在高效液相色谱中，流动相体系的流速为0.1-0.5ml/min,流动相体系的梯度洗脱程序为：
4.根据权利要求3所述的饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱-串联质谱中质谱的测定条件为：离子源为电喷雾离子源，监测方式为多反应监测，扫描方式为正离子扫描，电喷雾电压5.5kv，去溶剂温度550℃，气帘气35ps i，喷雾气50psi，碰撞气9psi。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，在所述步骤s1中，称取氯唑磷、戊唑醇、抑芽唑、烯唑醇、亚胺唑、氟硅唑和氟醚唑七种农药标准品适量，通过乙腈稀释定容成为1μg/ml的混合标准溶液，再用空白基质溶液稀释成浓度分别为0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的基质匹配系列标准工作溶液。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，在所述步骤s2中，包括：
7.根据权利要求1-4中任一项所述的饲料中三唑类农药的同步测定方法，其特征在于，在所述步骤s4中，液相色谱的还条件包括：色谱柱的柱温箱温度为40℃，进样量为5μl。
