本发明涉及生物与医药，具体为靶向肝巨噬细胞内的lxrα的激动剂在脂代谢异常、肝纤维化、肝肿瘤干性等方面的应用。
背景技术：
1、乙型肝炎病毒(hbv)感染的危害在于其持续感染可启动肝纤维化、肝硬化、肝癌的动态进展。目前全球约有3.5-4亿慢性乙肝病毒携带者，每年有50-100万患者死于慢乙肝相关的肝硬化、肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,hcc)及肝功能衰竭1,2。目前我国慢性乙肝感染患者高达9300万，预测至2050年，即使在理想模型下，我国的慢乙肝患者人数依然会超过2700万。目前针对乙肝病毒使用的拉米夫定(lamivudine)和阿德福韦(adefovir)等主要基于核苷类似物进行设计，抑制机体内病毒基因组的复制，旨在将血液内病毒含量降低至检测限以下，然而该疗法疗效有限，副作用大，并不能完全消除肝脏中的共价闭合环状dna(covalently closed circular dna,cccdna)。此外，未见针对乙肝病毒的特效药物，因此除了乙肝病毒本身作为靶标之外，迫切需要寻找潜在的宿主靶标，调动机体免疫反应，为辅助实现hbv的功能性治愈提供新的治疗策略。
2、临床上超过一半的hcc源于慢性hbv感染。而有研究表明，肝癌的起始过程由一小群干细胞样肝癌细胞介导3，肿瘤细胞中存在部分具有自我更新、增值和多向分化潜能的细胞与肝癌的起始、转移和复发相关。yamanaka因子是一群能够诱导多能干细胞生成的转录因子，同时在促肿瘤干细胞形成的过程中也具有重要作用4。肿瘤细胞成球实验(肿瘤球大小及数目)是肿瘤干细胞体外鉴定的重要方法，亦是衡量肿瘤细胞干性的金标准。若能靶向消除干细胞样癌细胞群，那么该方案则有望成为治疗肝恶性肿瘤的可靠策略之一。
3、研究表明，hbv调节宿主免疫逃逸，避免病毒被清除。hbv抑制肝巨噬细胞抗病毒细胞因子的产生，从而建立hbv的持续性感染5。此外，hbv重编程巨噬细胞的代谢水平，增强氧化磷酸化，抑制m1样巨噬细胞的抗病毒应答6。研究表明，hbv蛋白抑制单核细胞的迁移和中性粒细胞的呼吸爆发，从而抑制固有免疫应答7。因此，宿主肝脏中的代谢和免疫稳态紊乱是hbv感染后的重要表现。脂代谢在塑造kupffer细胞功能中被赋予了关键作用8–11。曾有研究报道，瘢痕相关的trem+cd9+肝脏巨噬细胞群具有促纤维化作用。hbeag作为toll样受体-2(tlr2)的配体，通过促进巨噬细胞和肝星状细胞的旁分泌效应，激活巨噬细胞，加剧肝脏纤维化12。此外，丙肝病毒诱发巨噬细胞胆固醇代谢异常，推动脂肪性肝炎和肝纤维化13。以上研究均表明病理状态下的肝脏巨噬细胞能够推动疾病进展。因此，肝脏巨噬细胞很可能具有参与乙肝慢性化和恶性化的潜在作用。然而，尚未有研究报道肝内巨噬细胞脂代谢异常是否推动慢乙肝疾病进展，且以调控巨噬细胞脂代谢为基础的慢乙肝疗法也亟需研究。
4、肝x受体(lxr)是人体中最重要的核受体之一，分为两种亚型——lxrα和lxrβ，其中lxrα主要在肝实质细胞、巨噬细胞和脂肪细胞等脂代谢旺盛的组织中表达，被胆固醇及其衍生物作为配体所激活14。lxrα与配体结合激活后，与下游基因(如abca1、abcg1、apoe、cyp7a1等)相应的顺式作用元件结合，上调基因的转录表达，在胆固醇代谢及脂肪酸合成方面发挥重要作用。目前lxrα激动剂主要应用在临床多种糖脂代谢相关性疾病的治疗中。目前，lxrα激动剂还未被应用于慢乙肝的治疗。lxrα是否参与调控慢乙肝进展，以及其细胞和生物学机制还需进一步研究。
5、aav-hbv病毒载体构建的慢乙肝小鼠模型，能够持续产生hbv病毒颗粒和hbv抗原，诱发长期hbv病毒血症和抗原血症，引发肝纤维化和肝癌，使其得以成为用于慢乙肝免疫机制研究和疗效评估的主要模型。本研究结合单细胞转录组研究对hbv相关肝癌肝内微环境的研究证实肝内炎症、特别是炎性细胞在推动疾病进展中发挥关键作用。因此确定关键效应细胞及炎性靶标是慢乙肝治疗中“靶向炎症”策略实现的基础。
6、综上，寻找新的脂代谢异常、慢乙肝、肝纤维化和肝癌的有效治疗靶点是非常必要和重要的。
7、参考文献
8、1.seto,w.-k.,lo,y.-r.,pawlotsky,j.-m.,and yuen,m.-f.(2018).chronichepatitis b virus infection.the lancet 392,2313–2324.https://doi.org/10.1016/s0140-6736(18)31865-8.
9、2.hsu,y.-c.,huang,d.q.,and nguyen,m.h.(2023).global burden ofhepatitis b virus:current status,missed opportunities and a call for action.nat.rev.gastroenterol.hepatol.20,524–537.https://doi.org/10.1038/s41575-023-00760-9.
10、3.wang,n.,wang,s.,li,m.-y.,hu,b.,liu,l.,yang,s.,yang,s.,gong,z.,lai,p.b.s.,and chen,g.g.(2018).cancer stem cells in hepatocellular carcinoma:anoverview and promising therapeutic strategies.ther.adv.med.oncol.10,1758835918816287.https://doi.org/10.1177/1758835918816287.
11、4.yamashita,t.,and wang,x.w.(2013).cancer stem cells in thedevelopment of liver cancer.j.clin.invest.123,1911–1918.https://doi.org/10.1172/jci66024.
12、5.faure-dupuy,s.,delphin,m.,aillot,l.,dimier,l.,lebossé,f.,fresquet,j.,parent,r.,matter,m.s.,rivoire,m.,bendriss-vermare,n.,et al.(2019).hepatitis b virus-induced modulation of liver macrophage function promoteshepatocyte infection.j.hepatol.71,1086–1098.https://doi.org/10.1016/j.jhep.2019.06.032.
13、6.li,y.,zhu,y.,feng,s.,ishida,y.,chiu,t.-p.,saito,t.,wang,s.,ann,d.k.,and ou,j.-h.j.(2022).macrophages activated by hepatitis b virus havedistinct metabolic profiles and suppress the virus via il-1βto downregulatepparαand foxo3.cell rep.38,110284.https://doi.org/10.1016/j.celrep.2021.110284.
14、7.mantovani,a.,cassatella,m.a.,costantini,c.,and jaillon,s.(2011).neutrophils in the activation and regulation of innate and adaptiveimmunity.nat.rev.immunol.11,519–531.https://doi.org/10.1038/nri3024.
15、8.scott,c.l.,zheng,f.,de baetselier,p.,martens,l.,saeys,y.,de prijck,s.,lippens,s.,abels,c.,schoonooghe,s.,raes,g.,et al.(2016).bone marrow-derived monocytes give rise to self-renewing and fully differentiated kupffercells.nat.commun.7,10321.https://doi.org/10.1038/ncomms10321.
16、9.scott,c.l.,and guilliams,m.(2018).the role of kupffer cells inhepatic iron and lipid metabolism.j.hepatol.69,1197–1199.https://doi.org/10.1016/j.jhep.2018.02.013.
17、10.lee,m.-s.,and bensinger,s.j.(2022).reprogramming cholesterolmetabolismin macrophages and its role in host defense against cholesterol-dependent cytolysins.cell.mol.immunol.19,327–336.https://doi.org/10.1038/s41423-021-00827-0.
18、11.yan,j.,and horng,t.(2020).lipid metabolismin regulation ofmacrophage functions.trends cell biol.30,979–989.https://doi.org/10.1016/j.tcb.2020.09.006.
19、12.xie,x.,lv,h.,liu,c.,su,x.,yu,z.,song,s.,bian,h.,tian,m.,qin,c.,qi,j.,et al.(2021).hbeag mediates inflammatory functions of macrophages by tlr2contributing to hepatic fibrosis.bmc med.19,247.https://doi.org/10.1186/s12916-021-02085-3.
20、13.jennelle,l.t.,magoro,t.,angelucci,a.r.,dandekar,a.,and hahn,y.s.(2022).hepatitis c virus alters macrophage cholesterol metabolism throughinteraction with scavenger receptors.viral immunol.35,223–235.https://doi.org/10.1089/vim.2021.0101.
21、14.zelcer,n.,and tontonoz,p.(2006).liver x receptors as integratorsof metabolic and inflammatory signaling.j.clin.invest.116,607–614.https://doi.org/10.1172/jci27883.
技术实现思路
1、针对现有慢乙肝、肝肿瘤治疗技术存在的缺陷，本发明研究了肝巨噬细胞内lxrα与脂代谢异常、慢乙肝、肝纤维化和肝肿瘤的关系，确认了肝巨噬细胞内lxrα激动剂可作为慢乙肝、肝纤维化和肝肿瘤新治疗药物的可能性。
2、为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：
3、第一方面，研究了肝内巨噬细胞代谢与慢乙肝进展的关系
4、构建了小鼠慢乙肝模型，慢乙肝模型组小鼠kupffer细胞中含有大量中性脂质，其含量显著高于对照组小鼠，hbv感染慢乙肝会引起肝内巨噬细胞脂代谢异常。
5、第二方面，研究lxrα表达与kupffer细胞的脂代谢异常关系。
6、增强lxrα表达可抑制kupffer细胞的脂代谢异常。
7、第三方面，研究lxrα与肝纤维化、肝肿瘤关系
8、gw3965、t0901317、az876，乙酰基罗汉酸酐和22(r)-羟基胆固醇通过下调lxrα介导的肝内巨噬细胞脂代谢异常来抑制肝纤维化和肿瘤的形成，从而控制慢乙肝进展。
9、与现有技术相比，本技术的有益效果在于：
10、1、确定了慢乙肝进展(依次为急性炎症、慢性炎症、肝纤维化和肝癌)的效应细胞为肝巨噬细胞(kupffer细胞)；
11、2、增强lxrα表达可抑制kupffer细胞的脂代谢异常；
12、3、明确了肝巨噬细胞内lxrα为控制慢乙肝进展的炎性靶标，这为慢乙肝治疗中“靶向炎症”策略的实现奠定了基础；
13、4、确定了激动巨噬细胞内lxrα的表达通过逆转kupffer细胞的脂代谢异常来逆转肝纤维化及肿瘤形成。
1.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂3-[3-[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基氨基]丙氧基]苯乙酸盐酸盐即gw3965在制备治疗肝巨噬细胞脂代谢异常药物中的应用。
2.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂n-(2,2,2-三氟乙基)-n-[4-[2,2,2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基)乙基]苯基]苯磺酰胺即t0901317在制备治疗肝巨噬细胞脂代谢异常药物中的应用。
3.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂3-[3-[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基氨基]丙氧基]苯乙酸盐酸盐即gw3965在制备控制慢性乙型肝炎进展药物中的应用，其特征在于，所述药物通过抑制肝巨噬细胞的脂代谢异常，从而降低肝纤维化及抑制肝肿瘤形成实现的。
4.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂n-(2,2,2-三氟乙基)-n-[4-[2,2,2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基)乙基]苯基]苯磺酰胺即t0901317在制备控制慢乙肝进展药物中的应用，其特征在于，所述药物通过抑制肝巨噬细胞的脂代谢异常，从而降低肝纤维化及抑制肝肿瘤形成实现的。
5.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂3-[3-[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基氨基]丙氧基]苯乙酸盐酸盐即gw3965在制备降低肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
6.肝巨噬细胞lxrα的激动剂n-(2,2,2-三氟乙基)-n-[4-[2,2,2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基)乙基]苯基]苯磺酰胺即t0901317在制备降低肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
7.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂3-[3-[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基氨基]丙氧基]苯乙酸盐酸盐即gw3965在制备抑制肝肿瘤形成的药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
8.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂n-(2,2,2-三氟乙基)-n-[4-[2,2,2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基)乙基]苯基]苯磺酰胺即t0901317在制备抑制肝肿瘤形成的药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
9.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂2-叔丁基-5-苯基-4-[[4-(1-哌啶基)苯基]氨基]-3(2h)-异噻唑啉酮1,1-二氧化物即az876在制备降低肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
10.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂乙酰基罗汉酸酐在制备降低肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
11.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂22(r)-羟基胆固醇在制备降低肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
12.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂2-叔丁基-5-苯基-4-[[4-(1-哌啶基)苯基]氨基]-3(2h)-异噻唑啉酮1,1-二氧化物即az876在制备抑制肝肿瘤形成的药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
13.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂乙酰基罗汉酸酐在制备抑制肝肿瘤形成的药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
14.肝巨噬细胞内lxrα的激动剂22(r)-羟基胆固醇在制备抑制肝肿瘤形成的药物中的应用，其特征在于，所述药物通过治疗肝巨噬细胞脂代谢异常起作用的。
