本发明属于医学检验领域,具体涉及一种辣根过氧化酶包合物及其制备方法与应用。
背景技术:
1、免疫层析技术因其简单易行、低成本、低样品量、无需其它昂贵的分析仪器或经过培训的操作人员、可实现床边快速检测等特点而迅速发展。免疫层析法所采用的标记材料对免疫传感器的性能起决定性的作用。
2、辣根过氧化物酶(hrp)是酶联免疫层析法中使用最广泛的一种标记酶,但是天然酶hrp容易失活且灵敏度较低,目前主要采用基因工程或双层有机骨架固定hrp等复杂的技术和方法对其进行改进或固定,以便增强其活性,但存在程序复杂、耗时长、效率低等缺点。
技术实现思路
1、基于上述技术背景,本发明的主要目的在于提供一种辣根过氧化酶包合物及其制备方法与应用,以克服现有技术中的不足。
2、为实现前述发明目的,本发明采用的技术方案包括:
3、本发明第一方面在于提供一种辣根过氧化酶包合物,所述辣根过氧化酶包合物由辣根过氧化酶和葫芦脲制得,所述辣根过氧化酶和葫芦脲的物质的量之比为1:(1~5)。
4、优选地,所述辣根过氧化酶和葫芦脲的物质的量之比为1:1。
5、本发明第二方面在于提供一种制备本发明第一方面所述辣根过氧化酶包合物的方法,所述方法包括以下步骤:
6、将辣根过氧化酶和葫芦脲混合、震荡,随后进行离心,然后加入溶剂,得到辣根过氧化酶包合物溶液。
7、优选地,于室温条件下,将含有辣根过氧化酶(hrp)的醋酸钠溶液加入葫芦脲(cb)溶液中,于室温下震荡20~45min,随后于8000~12000r/min离心5~20min,然后加入醋酸钠溶液溶解,得到辣根过氧化酶包合物(hrp-cb)溶液。
8、更优选地,于室温条件下,将含有辣根过氧化酶的醋酸钠溶液加入葫芦脲溶液中,于室温下震荡30min,随后于10000r/min离心10min,然后加入醋酸钠溶液溶解,得到辣根过氧化酶包合物溶液。
9、更优选地,含有80~120μm辣根过氧化酶的醋酸钠溶液和3~8μm葫芦脲溶液的体积比为2~3:200。
10、更优选地,所述醋酸钠溶液和葫芦脲溶液的体积比为(0.5~2):1。
11、本发明第三方面在于提供一种本发明第一方面所述辣根过氧化酶包合物在肿瘤标志物检测技术领域的应用。
12、本发明所具有的有益效果:
13、(1)本发明通过向辣根过氧化酶中加入葫芦脲,使辣根过氧化酶与葫芦脲发生超分子作用得到辣根过氧化酶包合物,可有效提高辣根过氧化酶的酶活性和稳定性,同时,该辣根过氧化酶包合物具有可逆性,使辣根过氧化酶可循环使用,具有成本低、实用性高、绿色环保的优点。
14、(2)本发明所述辣根过氧化酶包合物的制备方法简单,即改性辣根过氧化酶的方法简单、效率高、耗时短、成本低、实用性高。
15、(3)试验发现,在tmb(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物和h2o2存在的情况下,本发明所述辣根过氧化酶包合物在370nm处的紫外吸收光谱信号和抗原(肿瘤标志物,癌胚抗原)浓度呈负相关,且具有线性关系,可用于肿瘤标志物的检测,且该检测方法具有简单、方便、灵敏的优点。
1.一种辣根过氧化酶包合物,其特征在于,所述辣根过氧化酶包合物由辣根过氧化酶和葫芦脲制得,所述辣根过氧化酶和葫芦脲的物质的量之比为1:(1~5)。
2.根据权利要求1所述的辣根过氧化酶包合物,其特征在于,
3.一种制备权利要求1或2所述的辣根过氧化酶包合物的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,
8.一种权利要求1或2所述的辣根过氧化酶包合物在肿瘤标志物检测技术领域的应用。