本发明涉及hpv感染检测,具体而言,涉及一种用于hpv检测的样本采集方法、hpv检测方法及系统。
背景技术:
1、目前,头颈肿瘤的hpv检测主要包括[1],包括:1)p16免疫组织化学检测法[2-4],是临床上最常用的hpv检测方法,将p16蛋白过度表达作为hpv感染的替代指标,操作简便、成本较低,但判读较为困难且受人为因素影响较大,易出现假阳性结果,导致该检测特异度较低;2)hpv dna核酸检测法[5],使用通用引物靶向扩增hpv dna序列,通过凝胶电泳、限制性片段长度多态性或直接测序鉴定hpv基因型,检测特异度及敏感度较好;3)hpv dna原位杂交(ish)检测法[6],将特定标记探针与组织切片中的dna杂交,直接观察组织切片中细胞内的靶向dna,但在头颈部鳞癌中由于背景信号阻碍dna标记信号识别,易导致假阴性结果的产生;4)hpv e6/e7 mrnart-qpcr/ish检测法[7,8],该方法具有高灵敏度和特异度,被认为是hpv检测的金标准,但因其复杂检测技术及高成本,不适用于常规临床实践;5)基于外周血样本的液体活检法[9,10],该方法可通过检测患者外周血中的循环肿瘤hpv dna或hpve6/l1抗体以评估hpv感染状态,现有研究表现出较好的灵敏度和特异度,但由于缺乏足够的临床数据,尚未应用于常规临床检测。
2、然而,上述头颈部肿瘤的hpv检测方法均依赖于手术切除的组织样本或者血液样本,具有侵入性操作、高成本、耗时长等局限,不便于在门诊进行取检并开展常规hpv感染检测,且诊断性能不稳定,易因样本交叉污染、背景信号干扰等技术原因出现假阳性/假阴性结果,从而影响临床诊断及治疗。
3、鉴于此,特提出本发明。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种用于hpv检测的样本采集方法、hpv检测方法及系统以无创、快捷地实现样本的采集,并保持检测结果的准确性。
2、本发明是这样实现的:
3、第一方面,本发明提供了一种用于hpv检测的样本采集方法,其包括:将采样单元与待采样的采样部位接触;然后将采样单元采集的样本进行保存;待采样的采样部位选自口腔、咽腔、喉腔和鼻腔中的至少一种,采样单元为拭子或细胞刷。
4、在本发明应用较佳的实施方式中,hpv检测为hpv核酸检测。
5、在本发明应用较佳的实施方式中,将采样单元采集的样本置于细胞保存液或样本保存液中进行保存。
6、第二方面,本发明提供了一种hpv检测方法,hpv检测方法不以疾病的诊断为目的,检测方法包括:将上述的用于hpv检测的样本采集方法获得的样本进行dna提取,然后进行pcr扩增和pcr产物的检测。
7、在本发明应用较佳的实施方式中,pcr扩增的程序包括:42℃5分钟;94℃,8分钟;94℃,30秒,60℃,30秒,70℃,1分钟,共35个循环;70~72℃,1~10分钟。
8、在本发明应用较佳的实施方式中,pcr产物的检测包括:采用毛细管电泳仪分析pcr产物。
9、第三方面,本发明提供了一种hpv感染检测系统,其包括:采样单元、核酸提取单元、核酸扩增单元和产物检测单元;
10、其中,采样单元包括:拭子或细胞刷、以及细胞保存液,核酸提取单元包括核酸提取仪、核酸提取试剂和核酸纯化试剂,
11、核酸扩增单元包括核酸检测试剂盒和pcr仪,产物检测单元包括电泳仪。
12、第四方面,本发明提供了一种hpv分型系统,其包括:采样单元、核酸提取单元、核酸扩增单元和分型鉴定单元;
13、其中,采样单元包括:拭子或细胞刷、以及样本保存容器,核酸提取单元包括核酸提取仪、核酸提取试剂和核酸纯化试剂,样本保存容器内可以盛放细胞保存液。
14、核酸扩增单元包括核酸检测试剂盒和pcr仪,产物检测单元包括用于hpv分型鉴定的电泳仪。
15、在本发明应用较佳的实施方式中,用于hpv分型鉴定的电泳仪为毛细管电泳仪。
16、在本发明应用较佳的实施方式中,毛细管电泳仪的分型标准如下:若测得hpv型的峰高≥300rfu,判定为该hpv亚型阳性。
17、本发明具有以下有益效果:
18、与现有的用于头颈肿瘤患者hpv检测的有创侵入性操作方法不同,本发明提供的用于hpv检测的样本采集方法采用拭子或细胞刷进行采样,利用拭子刮取细胞或细胞刷取细胞实现人群头颈部hpv的样本采集,具有无创、快捷、取样成本较低,便于在门诊及病房等环境中开展常规hpv采样工作。
19、本发明发现,利用拭子刮取细胞或细胞刷取细胞的方法采用获得的样本,经过核酸提取和核酸检测,能够准确高效地检测hpv感染状态及亚型鉴定,具有检测准确度高,特异性强的优势。该样本采集方法和检测方法还具有显著的临床诊断应用价值,这对针对临床hpv感染高风险重点人群开展筛查检测工作具有重要意义,对于在疾病基础研究中开展hpv病毒感染检测及精准分型也具有重要的意义。
20、此外,本发明还提供了一种hpv感染检测系统和hpv分型系统,该系统能够快速、准确地实现hpv感染检测和的hpv分型。
1.一种用于hpv检测的样本采集方法,其特征在于,其包括:将采样单元与待采样的采样部位接触;然后将所述采样单元采集的样本进行保存;所述待采样的采样部位选自口腔、咽腔、喉腔和鼻腔中的至少一种,所述采样单元为拭子或细胞刷。
2.根据权利要求1所述的用于hpv检测的样本采集方法,其特征在于,所述hpv检测为hpv核酸检测。
3.根据权利要求1所述的用于hpv检测的样本采集方法,其特征在于,将所述采样单元采集的样本置于细胞保存液或样本保存液中进行保存。
4.一种hpv检测方法,其特征在于,所述hpv检测方法不以疾病的诊断为目的,所述检测方法包括:将权利要求1-3任一项所述的用于hpv检测的样本采集方法获得的样本进行dna提取,然后进行pcr扩增和pcr产物的检测。
5.根据权利要求4所述的hpv检测方法,其特征在于,所述pcr扩增的程序包括:42℃5分钟;94℃,8分钟;94℃,30秒,60℃,30秒,70℃,1分钟,共35个循环;70~72℃,1~10分钟。
6.根据权利要求4所述的hpv检测方法,其特征在于,所述pcr产物的检测包括:采用毛细管电泳仪分析pcr产物。
7.一种hpv感染检测系统,其特征在于,其包括:采样单元、核酸提取单元、核酸扩增单元和产物检测单元;
8.一种hpv分型系统,其特征在于,其包括:采样单元、核酸提取单元、核酸扩增单元和分型鉴定单元;
9.如权利要求8所述的hpv分型系统,其特征在于,所述用于hpv分型鉴定的电泳仪为毛细管电泳仪。
10.如权利要求9所述的hpv分型系统,其特征在于,所述毛细管电泳仪的分型标准如下:若测得hpv型的峰高≥300rfu,判定为hpv阳性。