本发明属于蛋白质，尤其涉及一种增强肠道屏障功能活性肽及其制备方法和应用。
背景技术：
1、肠道疾病在全球范围内是一个重要的公共健康问题，其患病率和影响都在逐年增加，严重影响患者的生活质量和社会经济发展。肠道屏障是肠道内壁的一层保护层，其主要功能是防止有害物质(如病原体、毒素)进入血液和身体其他部位。肠道屏障功能受损会导致肠道通透性增加，有害物质进入血液会引发全身健康问题。
2、目前治疗肠道屏障受损的治疗方法采用药物治疗和改变生活方式相结合。其中药物治疗主要选择服用硫唑嘌呤、环孢素等通过抑制免疫系统的过度反应来保护肠道屏障。但长期服用会伴随潜在副作用，如恶心、呕吐、肝肾功能异常等，所以找到新的安全替代物是改善肠道屏障受损的有效手段。
3、大豆肽是大豆分离蛋白的酶解产物，分子量较低，通常含有3～20个氨基酸，既保留了蛋白营养丰富、氨基酸平衡等优点，同时易溶解、易被吸收利用。大豆肽已被国内外学者证明可以调节肠道屏障功能。因此，利用大豆肽原料进行分离，探索关键有效成分增强肠道屏障功能，具有较大的实际应用价值。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有增强肠道屏障功能的活性肽，以及其制备方法和应用，通过筛选并制备具有增强肠道屏障功能的活性肽，提升肠道保护能力，减少外界毒素破坏肠屏障并减少毒素通过肠道入侵人体，并避免服用硫唑嘌呤、环孢素等药物带来的副作用，切实帮助肠屏障受损的患者。
2、本发明的目的及其技术问题的解决，可以通过以下技术方案来实现。
3、一方面，本发明提供了一种增强肠道屏障功能的活性肽，该肽的氨基酸序列为leu-ile-pro-arg，或者以lipr来表示，分子量为497.63da。该肽疏水且稳定，含有亮氨酸、异亮氨酸和精氨酸。
4、另一方面，本发明提供了制备上述活性肽的方法，包括以下步骤：
5、1)利用菠萝蛋白酶和风味蛋白酶，对大豆分离蛋白进行酶解，得到大豆肽；
6、2)利用胃蛋白酶和胰酶，对大豆肽进行体外模拟消化，得到大豆肽消化产物；
7、3)对所述大豆肽消化产物进行体外模拟吸收，利用caco-2单层细胞模型分离，得到吸收大豆肽；以及
8、4)对所述吸收大豆肽进行鉴定，得到所述活性肽lipr。
9、在第三方面，本发明提供了增强肠道屏障功能的组合物，该组合物包含本发明的活性肽。
10、在第四方面，本发明提供了本发明的活性肽在制备增强肠道屏障功能的药物中的用途。
11、本发明的活性肽能够通过增加caco-2细胞单层中密封蛋白、闭合蛋白和紧密连接蛋白-1(zo-1蛋白)的表达，增加跨上皮细胞电阻值，增强肠道屏障功能，从而减少毒素入侵，维持肠道健康。此外，本发明的活性肽通过将大豆分离蛋白进行酶解、分离和鉴定等过程后制备得到，因此原料来源广泛，制备过程易于操作、实现。
1.增强肠道屏障功能活性肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列为lipr，分子量为497.63da。
2.制备权利要求1所述活性肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中，所述菠萝蛋白酶的添加量以质量分数计为所述大豆分离蛋白的1.2-1.4％，所述风味蛋白酶的添加量以质量分数计为所述大豆分离蛋白的9.0-11.0％。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中所述菠萝蛋白酶酶解时间为2.5-3.5h，酶解温度为45-55℃，ph 7.0-7.5；所述风味蛋白酶酶解时间为2.5-3.5h，酶解温度为50-60℃，ph 7.0-7.5，所述酶解结束后，在95℃水浴10min使酶灭活。
5.根据权利要求2所述的制备方法，步骤2)具体包括以下步骤：
6.根据权利要求2所述活性肽的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，所述胃蛋白酶的添加量以质量分数计为所述大豆肽的0.2～0.4％，所述胰酶的添加量以质量分数计为所述大豆肽的0.02～0.04％。
7.根据权利要求2所述活性肽的制备方法，其特征在于，
8.根据权利要求2所述活性肽的制备方法，其特征在于，在步骤3)中，将所述大豆肽消化产物溶于hbss缓冲液，并接种caco-2单层细胞，其中，所述大豆肽消化产物在hbss缓冲液的浓度为4mg/ml。
9.增强肠道屏障功能的组合物，包含权利要求1所述的活性肽。
10.权利要求1所述的活性肽在制备增强肠道屏障功能的药物中的应用。
