本发明提供一种瑞士乳杆菌afy07在制备肠道保护药物、食品或保健品中的应用,属于微生物。
背景技术:
1、食物过敏会导致较为严重的肠道损伤。研究发现当过敏反应发生时,机体会出现嗜酸性粒细胞增多,肠道屏障损伤,粘膜结构紊乱,绒毛排列失序和肠道通透性增加等变化。同时食物过敏患者肠道上皮细胞的紧密连接蛋白表达减少,间隙显著增宽,致使肠道粘膜通透性增强,其机制与肥大细胞的增殖活化密切相关。因此一种有效的肠道保护方法,是克服食物过敏的关键。
技术实现思路
1、有鉴于此,本发明的目的在于:提供一种瑞士乳杆菌afy07在制备肠道保护药物、食品或保健品中的应用。
2、本发明所述瑞士乳杆菌afy07保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为cgmcc no.30983,微生物分类命名瑞士乳杆菌lactobacillushelveticus,保藏日期2024年6月11日。
3、本发明所述瑞士乳杆菌afy07的获取方法如下:
4、1、分别取1ml自然发酵酸奶样品,用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6,然后取10-4、10-5、10-63个梯度的菌液100μl进行平板涂布,37℃培养24-48h,观察并记录菌落形态。挑取平板上不同形态的菌落进行划线分离,经37℃培养48h后,再次挑取平板上不同形态的单菌落进行划线分离,如此重复2至3次,直至得到形态一致的纯的单菌落。
5、2、将已纯的疑似目标菌株接种于mrs肉汤中,37℃培养18-24h后,采用细菌基因组dna提取试剂盒进行dna提取。将提取完成的dna做好编号,放于-20℃冰柜保藏备用。
6、3、提取完的dna进行pcr扩增,其中上游引物27f(5'-aga gtt tga tcc tggctcag-3')1μl、下游引物1495r(5'-cta cgg ctaccttgt tac ga-3')1μl,2×taqplusbuffer 12.5μl、模板dna 1μl,用无菌dd h2o将体系补足至25μl。并以无菌超纯水替代模板dna作为阴性对照。扩增条件为:94℃5min;94℃30s,55℃30s,72℃1min,共29个循环,最后72℃延伸5min。
7、然后取5μl扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,琼脂糖浓度为1.5%,电泳条件为110v,45min。将检测成功的pcr产物送往北京擎科生物技术有限公司进行测序,测序成功的序列使用ncbi中的blast(basic local alignment search tool)程序进行比对分析。
8、本发明灌胃瑞士乳杆菌afy07后,食物过敏小鼠的空肠组织的肠黏膜和绒毛结构较为完整,炎症细胞浸润明显减少,整体趋近于正常形态,说明瑞士乳杆菌afy07可能具有保护肠组织形态完整的作用。灌胃瑞士乳杆菌afy07后的过敏小鼠空肠中occludin、tjpl和jam1表达水平有所增高,说明瑞士乳杆菌可能会通过促进空肠中紧密连接蛋白基因的表达,增强肠道的屏障功能。本发明研究表明瑞士乳杆菌afy07能够增强肠道作用,使得肠道结构恢复正常,保护肠结构,减少肠道通透性。
1.一种瑞士乳杆菌afy07在制备肠道保护药物、食品或保健品中的应用,其特征在于,所述瑞士乳杆菌afy07保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为cgmcc no.30983。
