本发明涉及基因工程，具体涉及一种活性及耐盐性改良的β-葡萄糖苷酶突变体及其制备方法和用途。
背景技术：
1、纤维素是植物细胞壁的主要成分，是自然界中丰富的可再生资源，对其利用有着重要的意义。纤维素在一定条件下被纤维素酶水解成单糖和寡糖，单糖可以通过微生物发酵生产各种产品，如饲料、燃料、化工原料、食品、药品等。纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶(β-d-glucosidase，ec3.2.1.21)等组成。β-葡萄糖苷酶是纤维素水解单糖的关键成员，能够水解结合于末端非还原性的β-d-糖苷键，释放葡萄糖。
2、在纤维素酶组分中β-葡萄糖苷酶含量少、活力低，成为纤维素酶解的瓶颈，目前β-葡萄糖苷酶已经得到很大程度的开发与利用，但还是缺少一些优质高效的β-葡萄糖苷酶，或者降低酶的生产成本。因此，通过基因重组技术构建工程菌,分泌表达高活性的β-葡萄糖苷酶对纤维素有效降解具有重要意义。
3、高活性的酶具有更快的催化速率。盐广泛存在于大自然和各种生产实践中，包括食品腌制、制革等，在食品及海产品加工过程中，利用耐盐酶可以改善加工产品品质；氯化钠具有很好的防腐作用，可在生产过程中抑制杂菌微生物的生长，防治产品污染，但盐存在的环境会抑制酶的活性及转化效率等，如含盐环境的食品加工及防腐、污水处理、饲料及医药等领域中，因此高活性的耐盐酶可以更好的应用于高盐环境领域，能大大节约成本，提高生产效率。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种活性及耐盐性改良的β-葡萄糖苷酶突变体d126t，改善了现有β-葡萄糖苷酶的理化性质，丰富了β-葡萄糖苷酶资源库，在β-葡萄糖苷酶的实际使用中具有应用价值。
2、为了达到上述目的，本发明提供了一种β-葡萄糖苷酶突变体d126t，该突变体d126t具有如seq id no.1所示的氨基酸序列。
3、本发明还提供了一种β-葡萄糖苷酶突变体d126t的编码基因，该编码基因d126t具有如seq id no.2所示的核苷酸序列。
4、本发明还提供了一种包含上述编码基因d126t的重组表达载体，该重组表达载体选自原核表达载体。优选pet-28a(+)。
5、本发明还提供了一种包含所述的编码基因d126t的重组表达菌，该重组表达菌选自大肠杆菌，优选bl21(de3)。
6、本发明的另一目的是提供一种所述的活性及耐盐性改良的β-葡萄糖苷酶突变体d126t在食品、饲料、污水处理、制革及医药等领域中的应用。
7、本发明提供的活性及耐盐性改良的β-葡萄糖苷酶突变体d126t，解决了野生酶比活低、耐盐性差特性等问题，具有以下优点：
8、本发明提供了一种活性及耐盐性改良的β-葡萄糖苷酶突变体，与野生酶相比，本发明的突变体d126t的活性及耐盐性得到改良。纯化的野生酶bglpcc1、突变酶d126t的最适ph分别为4.5、5.0，最适温度分别为45℃、37℃。在正常不加盐反应体系中突变体d126t的酶比活力比野生酶bglpcc1提高8u/mg，是野生酶bglpcc1的1.8倍；在10.0mm和50.0mm的mncl2、mgcl2、licl、cacl2、bacl2、zncl2、mgso4、coso4、niso4金属盐中，突变体d126t的酶比活力比野生酶bglpcc1的酶比活力分别高0.6～36u/mg和0.8～42u/mg；在0.5m最适nacl中，突变体d126t酶比活力达93.5u/mg，比野生酶提高约70u/mg，是野生酶bglpcc1的3.7倍；在0.7m～3m的中高浓度nacl中，突变体d126t酶比活力比野生酶bglpcc1提高21～61u/mg；在0.5m最适kcl中，突变体d126t酶比活力达81.5u/mg，比野生酶提高约51u/mg，是野生酶bglpcc1的2.6倍；在0.7m～3m的中高浓度kcl中，突变体d126t酶比活力比野生酶bglpcc1提高14～48u/mg。本发明的突变β-葡萄糖苷酶d126t可应用于含盐环境下的食品加工和饲料添加剂、污水处理、制革及药品制作等生物技术领域，可以一定程度上减少污染，降低成本，提高生产效率。
1.一种活性及耐盐性改良的β-葡萄糖苷酶突变体d126t，其特征在于，该突变体d126t的氨基酸序列由重组野生β-葡萄糖苷酶bglpcc1第126位的天冬氨酸突变为苏氨酸获得，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体d126t的编码基因d126t，其特征在于，所述d126t编码基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.包含如权利要求2所述编码基因d126t的重组表达载体。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体采用pet-28a(+)。
5.包含如权利要求2所述编码基因d126t的重组表达菌。
6.根据权利要求5所述的重组表达菌，其特征在于，所述重组表达菌选自bl21(de3)。
7.如权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶突变体d126t在食品加工及防腐、污水处理、制革、饲料及医药领域中的应用。
