本发明涉及生物医学工程，尤其涉及一种携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物及其制备方法和应用。
背景技术：
1、口腔鳞状细胞癌(hnscc)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其恶性程度高，预后较差，5年生存率只有50％～60％。目前，口腔鳞状细胞癌的传统治疗方法包括手术、抗癌药物治疗和放射治疗。其中化疗是将化学药物通过口服或静脉注射进入体内，选择性地杀死快速增殖的肿瘤细胞，通常作为辅助治疗手段，在手术前后使用；放疗是通过放射线对目标区域进行高剂量照射，它能杀灭肿瘤细胞并缓解症状，对于局部晚期的鳞状细胞癌尤为适用。
2、分子靶向治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，它以肿瘤相关的特异分子为靶点，利用靶分子特异制剂或药物进行精准治疗。随着治疗技术的迅速发展，分子靶向治疗越来越得到临床医生的认可和重视。分子靶向技术分为主动靶向和被动靶向，其中主动靶向技术是指在含有抗癌药物的载体上结合一些针对某些肿瘤过表达受体的靶向分子，使得纳米药物载体能够通过受-配体之间的特异性识别效应靶向肿瘤细胞，纳米药物大量聚集于靶细胞表面进而实现细胞内在化。与小分子药物自由扩散进入细胞的模式不同，主动靶向技术可使得更多的抗癌药物进入细胞内，更好的发挥抗癌作用。
3、多肽类化合物是一类重要的生物活性分子，具有易于设计合成，在人体内易于代谢、毒副作用小等优点。但是，由于其在水溶液中并不能保证稳定的结构形式，半衰期短，生物利用度低，限制了其在药物载体方面的应用，尤其是利用多肽载体将分子靶向药物与传统的抗癌药物结合的相关报道非常少。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明提供了一种携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物及其制备方法和应用。本发明以多肽为载体，通过酶促共组装实现单抗和化疗药物的有效共载，所得纳米药物稳定性好，生物利用度高，具有靶向性，药物疗效好，毒副所用小，能够发挥出更好的抗癌效果。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、一种携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物，由化疗药物-多肽复合物和单抗通过酶促共组装形成；所述单抗为西妥昔单抗；所述化疗药物-多肽复合物的结构如式i所示：
4、
5、本发明还提供了上述方案所述携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物的制备方法，包括以下步骤：
6、将所述化疗药物-多肽复合物、单抗、酶和溶剂混合进行共组装，得到所述携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物。
7、优选的，所述化疗药物-多肽复合物的制备方法包括：将10-羟基喜树碱、戊二酸酐和有机溶剂混合进行酯化反应，得到10-羟基喜树碱-戊二酸衍生物，所述10-羟基喜树碱-戊二酸衍生物的结构式如式ii所示；
8、
9、采用固相多肽合成法，在树脂上依次连接氨基酸合成肽链，并采用所述10-羟基喜树碱-戊二酸衍生物对肽链的n端进行封端，之后将肽链从树脂上切割下来，得到所述化疗药物-多肽复合物。
10、优选的，所述10-羟基喜树碱和戊二酸酐的摩尔比为1:(3～5)；所述酯化反应的时间为48～72h。
11、优选的，所述封端包括：将所述式ii所示结构的化合物、缩合剂、活化剂和溶剂混合，将所得混合液加入固相多肽合成法所用固相管中进行封端。
12、优选的，所述酶为碱性磷酸酶。
13、优选的，所述化疗药物-多肽复合物、单抗和酶的用量比为1mg:1～5μg:8～10u。
14、优选的，所述共组装的温度为3～5℃，时间为24～72h，ph值为6～7。
15、本发明还提供了上述方案所述的携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物或上述方案所述制备方法制备的携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
16、优选的，所述肿瘤为口腔鳞状细胞癌。
17、本发明提供了一种携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物(记为hp@antibody)，由化疗药物-多肽复合物以及单抗通过酶促共组装形成；所述单抗为西妥昔单抗；所述化疗药物-多肽复合物的结构如式i所示(见上文)。本发明利用亲水性短肽作为载体，以西妥昔单抗作为肿瘤靶向因子，通过酯键将10-羟基喜树碱(hcpt)连接到多肽中，实现了分子靶向药物(西妥昔单抗)和传统化疗药物(10-羟基喜树碱)的有效共载，能够实现抗肿瘤协同增效作用，显著提高抗肿瘤疗效，且靶向性好，毒副作用小；并且，表皮生长因子受体(egfr)是一种细胞膜受体，具有酪氨酸蛋白激酶活性，与细胞恶变程度有关，口腔鳞状细胞癌可高表达egfr，本发明的纳米药物可靶向于口腔鳞癌细胞表面的egfr受体，纳米药物可通过主动靶向作用高效递送药物至肿瘤细胞内，进入细胞后，细胞内的溶酶体中的酯酶可以水解纳米药物体系中连接药物的酯键，实现化疗药物在肿瘤部位的释放，从而发挥抗癌作用。综上所述，本发明提供的纳米药物稳定性好，生物利用度高，具有靶向性，药物疗效好，毒副所用小，抗癌效果好。
18、本发明还提供了上述方案所述携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物的制备方法，本发明利用戊二酸酐将10-羟基喜树碱和多肽连接，得到化疗药物-多肽复合物，再采用酶催化的方式将化疗药物-多肽复合物和单抗进行共组装，得到所述携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物。本发明通过酶促的方法进行共组装，能够对多肽分子的组装路径进行优化，通过对多肽的可控折叠大大提高其生物活性，从而发挥出更佳的功能效果；能够提高纳米药物体系的稳定性，增加药物疗效，降低药物毒副作用，使抗癌药物发挥出更好的抗癌效果。此外，本发明提供的制备方法工艺简单、成本低、产率高。
19、本发明还提供了上述方案所述的携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物或上述方案所述制备方法制备的携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供的共组装纳米药物化学结构明确、稳定性强、生物相容性好，易保存，可有效抑制口腔鳞癌细胞的生长，并且实现了抗癌药物由细胞膜到细胞核的逐级递送，具有良好的抗肿瘤效果，在癌症治疗等方面具有广阔的应用前景。
1.一种携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物，其特征在于，由化疗药物-多肽复合物和单抗通过酶促共组装形成；所述单抗为西妥昔单抗；所述化疗药物-多肽复合物的结构如式i所示：
2.权利要求1所述携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化疗药物-多肽复合物的制备方法包括：将10-羟基喜树碱、戊二酸酐和有机溶剂混合进行酯化反应，得到10-羟基喜树碱-戊二酸衍生物，所述10-羟基喜树碱-戊二酸衍生物的结构式如式ii所示；
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述10-羟基喜树碱和戊二酸酐的摩尔比为1:(3～5)；所述酯化反应的时间为48～72h。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述封端包括：将所述式ii所示结构的化合物、缩合剂、活化剂和溶剂混合，将所得混合液加入固相多肽合成法所用固相管中进行封端。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化疗药物-多肽复合物、单抗和酶的用量比为1mg:1～5μg:8～10u。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述共组装的温度为3～5℃，时间为24～72h，ph值为6～7。
9.权利要求1所述的携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物或权利要求2～8任意一项所述制备方法制备的携带单抗及化疗药物的共组装纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为口腔鳞状细胞癌。
