本发明涉及畜牧领域。更具体地，涉及mg53在山羊精液冷冻保存中的应用及含有其的精子冷冻稀释液。
背景技术：
1、精液的冷冻保存技术是一种超低温保存法，在需要时进行升温处理，使精子恢复活力和受精能力的技术。精液冷冻保存是对采集的新鲜精液经过处理后，在液态氮(-196℃)的条件下进行冷冻保存的技术，这些处理通常包括精液的稀释、加入冷冻保护剂、抗氧化剂以及逐步降温等步骤。精液冷冻保存技术的出现，大大改变了传统精液保存和使用的局限性，使得精子的保存时间得以延长，从而打破了精液使用的时空限制。通过冷冻保存，大大延长了优质公畜禽精液的保存时间，在需要时解冻进行人工授精，从而扩大了优质公畜禽的使用范围并延长了其使用年限。
2、目前，在奶牛的繁殖方面，90％以上是使用冷冻精液通过人工输精来实现。然而在山羊方面冷冻精液人工输精繁殖技术的应用还未得到大范围的推广应用，究其原因主要是因为山羊的精子在经过超低温保存的操作环节容易发生精子膜及顶体等方面的损伤，导致冷冻精液人工输精的妊娠效率低下。因此，冷配技术(冷冻精液人工输精配种技术)在山羊上的应用规模较小，且多通过腹腔镜子宫深部输精来达到提升妊娠效率的目的，而普通的养殖场缺乏相关设备设施及熟练的技术人员使得该项技术推广受到限制。通过提升山羊冷冻精液质量，采用常规人工输精获得理想的妊娠效率是在山羊养殖行业大范围推广冷配技术的前提条件。
3、因此，需要提供一种可以提升山羊冷冻精液质量的冷冻保存用产品以解决上述技术问题。
技术实现思路
1、本发明的一个目的在于提供mg53作为添加剂在山羊精液冷冻保存中的新应用，从而解决山羊精液在冷冻保存过程中，精子的质膜和顶体受到损伤，导致精子活力和受精能力大大降低的问题。
2、本发明的第二个目的在于提供一种提升山羊冷冻精液质量的精子冷冻稀释液。
3、本发明的第三个目的在于提供一种山羊精液的冷冻保存方法。
4、为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：
5、mitsugumin53(mg53)是trim蛋白家族一种新的肌肉特异性成员，是一种膜修复蛋白，mg53通过促进细胞膜修复从而维持心肌和骨骼肌细胞的完整性。mg53通过活化pi3k-akt-gsk3β和erk1/2细胞生存信号通路，参与心肌缺血预适应和后适应保护作用。而且外源性给予mg53重组蛋白，能够保护包括心脏、骨骼肌、肺脏、肾脏和皮肤在内的多种器官的缺血/再灌注和机械损伤。
6、第一方面，本发明首次提出mg53作为添加剂在山羊精液冷冻保存中的新应用。发明人发现将mg53添加到精子冷冻稀释液中稀释山羊精液后进行精液冷冻保存，能有效提升山羊精子冷冻保存再解冻后的质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性和/或dna完整率。在本发明中，并不需要对精子冷冻稀释液的组成进行限制，可以为现有技术中的任一能用于山羊精子冷冻保存时精液稀释的精子冷冻稀释液，可以通过市售购买也可以按照文献报道的方法配制，mg53提升山羊冷冻精液质量的性能不受精子冷冻稀释液配方的影响。
7、根据本发明的具体实施方式，所述mg53的添加浓度为0.4％-1.2％，具体可以为0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.2％等；
8、优选的，所述mg53的添加浓度为0.8％。
9、第二方面，本发明提供了一种提升山羊冷冻精液质量的精子冷冻稀释液，所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
10、a液包括如下含量的组分：tris 25-38g/l、柠檬酸12-22g/l、青霉素-链霉素双抗1200-1800iu/l、葡萄糖6-15g/l、卵黄20％-23％、mg53 0.4％-1.2％；
11、b液包括如下含量的组分：tris 25-38g/l、柠檬酸12-22g/l、青霉素-链霉素双抗5iu/l、葡萄糖6-15g/l、卵黄20％-23％、mg53 0.4％-1.2％、甘油8％-10％。
12、示例性的，所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
13、a液包括如下含量的组分：tris 38g/l、柠檬酸22g/l、青霉素-链霉素双抗1500iu/l、葡萄糖6g/l、卵黄20％，mg53 0.8％；
14、b液包括如下含量的组分：tris 38g/l、柠檬酸22g/l、青霉素-链霉素双抗5iu/l、葡萄糖6g/l、卵黄20％，mg53 0.8％，甘油8％。
15、第三方面，本发明还提供了一种山羊精液的冷冻保存方法，所述方法包括如下步骤：
16、将采集到的山羊精液用精子冷冻稀释液的a液稀释到所需浓度，混匀后置于4℃环境中平衡2-4h，得到含精液的a液，之后至少分两次加入精子冷冻稀释液的b液，所述b液的总体积与含精液的a液体积相等，然后进行冷冻保存；
17、所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
18、a液包括如下含量的组分：tris 25-38g/l、柠檬酸12-22g/l、青霉素-链霉素双抗1200-1800iu/l、葡萄糖6-15g/l、卵黄20％-23％、mg53 0.4％-1.2％；
19、b液包括如下含量的组分：tris 25-38g/l、柠檬酸12-22g/l、青霉素-链霉素双抗5iu/l、葡萄糖6-15g/l、卵黄20％-23％、mg53 0.4％-1.2％、甘油8-10％。
20、进一步，所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
21、a液包括如下含量的组分：tris 38g/l、柠檬酸22g/l、青霉素-链霉素双抗1500iu/l、葡萄糖6g/l、卵黄20％，mg53 0.8％；
22、b液包括如下含量的组分：tris 38g/l、柠檬酸22g/l、青霉素-链霉素双抗5iu/l、葡萄糖6g/l、卵黄20％，mg53 0.8％，甘油8％。
23、进一步，分次加入b液时，每次间隔至少15min。
24、本发明的有益效果如下：
25、本发明首次将mg53作为一种添加剂应用于山羊精液冷冻保存技术。通过在精子冷冻稀释液中添加mg53，从而有效提升冷冻解冻后精子质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、dna完整率等质量指标，冷冻精子质量的提升会促进人工输精受胎率的提高。
1.mg53在山羊精液冷冻保存中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将mg53添加到精子冷冻稀释液中用于山羊精液冷冻保存前的精液稀释。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述mg53的添加浓度为0.4％-1.2％。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述mg53的添加浓度为0.8％。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述mg53能提升山羊精子冷冻解冻后的质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性和/或dna完整率。
6.一种提升山羊冷冻精液质量的精子冷冻稀释液，其特征在于，所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
7.根据权利要求6所述的精子冷冻稀释液，其特征在于，所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
8.一种山羊精液的冷冻保存方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的冷冻保存方法，其特征在于，所述精子冷冻稀释液包括a液和b液，其中，
10.根据权利要求8所述的冷冻保存方法，其特征在于，分次加入b液时，每次间隔至少15min。
