本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种盐酸伊立替康脂质体注射液有关物质的测定方法。
背景技术：
1、盐酸伊立替康的化学式为c33h38n4o6·hcl·3h2o，结构式如下：
2、
3、为类白色或淡黄色粉末，伊立替康是一种经过化学结构修饰的天然喜树碱的衍生物。可用于制备针剂主要用于治疗消化系统肿瘤如胃癌、结肠癌、直肠癌、肺癌等，也用于治疗白血病、葡萄胎和绒毛膜上皮癌。。
4、盐酸伊立替康脂质体注射液，一种高端脂质体制剂，每10毫升伊立替康43毫克。伊立替康对肺癌(小细胞肺癌，非小细胞肺癌)、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、淋巴癌、乳腺癌、白血病等均有不同程度的效果，尤其对小细胞肺癌和结肠癌疗效突出，超过现在的抗癌药物活性。
5、伊立替康主要杂质为喜树碱、杂质a、b、e,
6、其中，杂质e结构如下：
7、
8、由于伊立替康和杂质e结构最为相似，最难分离。
9、以下中国专利中，均不同程度的公开了盐酸伊立替康脂质体注射液异构体杂质的测定方法。
10、
11、但现有技术没有盐酸伊立替康脂质体注射液有关物质测定方法的报道。
12、本发明针对现有技术的不足，筛选得到一种高效液相色谱法，用于测定盐酸伊立替康脂质体注射液高端制剂的有关物质，意外发现，本发明的方法在各项技术指标上均优于现有技术。
技术实现思路
1、本发明提供盐酸伊立替康脂质体注射液有关物质的测定方法，所述方法，步骤如下：
2、步骤1，系统适用性溶液配制：取盐酸伊立替康对照品和杂质e对照品，加甲醇分别配制成每1ml中含盐酸伊立替康100-300μg和杂质e为0.1-0.5μg的溶液；
3、步骤2，灵敏度溶液配制：取系统适用性溶液适量，置合适量瓶中，用甲醇稀释100-200倍，摇匀，得灵敏度溶液。
4、步骤3，供试品溶液配制：取伊立替康脂质体注射液1ml，用甲醇稀释20-100倍，超声，放冷，摇匀，离心，取上清液；
5、步骤4，测定：取取系统适用性溶液、灵敏度溶液、供试品溶液5-50μl，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图峰面积，用面积归一化法计算供试品溶液中各杂质的含量。
6、其中色谱条件如下：
7、高效液相色谱仪：vwd或dad
8、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：流动相a己烷磺酸钠溶液(取1-己烷磺酸钠2g，用水溶解并稀释至1000ml)：流动相b乙腈流速：1.0ml/min；检测波长：254nm，进样体积5-50μl；柱温30℃；
9、梯度洗脱
10、
11、
12、本发明所述的方法，最优选的，步骤如下：
13、步骤1，系统适用性溶液配制：
14、取盐酸伊立替康对照品和杂质e对照品，称定，加甲醇使溶解并稀释成每1ml中含盐酸伊立替康200μg和杂质e 0.4μg的溶液。
15、步骤2，灵敏度溶液配制：
16、取系统适用性溶液适量，置合适量瓶中，用甲醇稀释100倍，摇匀，得灵敏度溶液。
17、步骤3，供试品溶液配制：
18、取伊立替康脂质体注射液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇超声5分钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，以每分钟10000转离心10分钟，上清液即为供试品溶液。
19、其中步骤4，测定：
20、取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图峰面积，按照面积归一化法计算供试品溶液中各杂质的含量。
21、检测过程总要求：空白溶液(甲醇)无干扰；系统适用性溶液色谱图中伊立替康与杂质e的分离度不小于4.0；灵敏度溶液色谱图中，伊立替康峰的信噪比应大于10。
22、本发明色谱条件和现有技术的差异：
23、现有技术一般采用hplc等度洗脱法和紫外-可见分光光度法。本发明色谱条件和现有技术差异性如下：
24、本发明色谱条件采用hplc梯度洗脱法，应用梯度洗脱法可以改善色谱峰峰形，同时检测多个杂质，提高分离能力，提高灵敏度，提高检测的准确性和可靠性。
25、现有技术采用hplc等度洗脱色谱条件，一次仅能检测出一种成分等缺点。
26、本发明检测方法和现有技术相比，在以下技术指标上的优点及其检测数据：
27、(1)本发明采用hplc-梯度洗脱的面积归一化法检测盐酸伊立替康脂质体注射液中的有关物质，优点如下：
28、①一个检测方法同时检测多个杂质(喜树碱、杂质a、杂质b和杂质e)，检测效率高。
29、②采用hplc-梯度洗脱法具有良好的专属性(峰纯度达999)，即空白、辅料空白、伊立替康均无干扰，杂质间分离度好。
30、③采用hplc-梯度洗脱法，方法灵敏度高，各杂质峰响应强、峰型良好。
31、④样品前处理简单。
32、⑤稀释溶剂为甲醇，价格廉价，易得。
33、⑥安捷伦常规色谱柱容易获得且价格低。
34、(2)本发明检测方法检测数据如下：
35、扣除空白峰，如显杂质峰，按面积归一化法计算杂质含量。
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38、注：a为各杂质的峰面积，a总峰为供试品溶液中各杂质校正后总峰面积，f为各杂质的相对响应因子，未知杂质f默认为1，小于0.05％的杂质忽略不计，但计入总杂。
1.一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液有关物质的方法，所述方法，步骤如下：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中步骤1，系统适用性溶液配制：方法如下：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中步骤2，灵敏度溶液配制：方法如下：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中步骤3，供试品溶液配制：方法如下：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中步骤4，测定，方法如下：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤如下：
