本发明属于生物医药，具体涉及一种对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽及其用途。
背景技术：
1、磷脂酰肌醇蛋白聚糖是硫酸乙酰肝素(hs)糖蛋白中的一个家族，参与调控个体发育、细胞增殖和分化等过程。其中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)是硫酸乙酰肝素(hs)蛋白聚糖glypican家族的一员，可通过糖基磷脂酰肌醇(gpi)锚，附着在细胞表面。gpc3在细胞生长、分化和迁移过程中发挥重要的作用。研究发现，gpc3在许多人类恶性肿瘤细胞和血清中表达，尤其在肝细胞癌上，gpc3特异性高表达于80％以上的人肝细胞癌细胞膜上，而在成人的正常组织中不表达。大量的研究证实gpc3可以成为肝细胞癌的治疗靶点，目前关于gpc3受体的抗体及小分子已成功合成，并已进入临床前期实验研究阶段。如专利cn200880103166.9公开了一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的单克隆抗体，其是以磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的胞外域制备的单克隆抗体，用于肿瘤诊断药物；专利cn201210152819.0则公开了一种以磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3全长片段制备的单克隆抗体，用于肿瘤诊断药物等。
2、目前早期肝细胞有较多的治疗手段，如手术、射频消融、化疗及生物免疫治疗，而晚期肝癌尚无有效的治疗方法。靶向特定靶点的靶向治疗是未来治疗晚期肝细胞癌的重要发展方向。靶向gpc3受体的靶向治疗有望改变目前晚期肝细胞癌治疗十分被动的局面。且随着对gpc-3与恶性肿瘤形成机制研究的深入，研究人员还发现其在多种恶性肿瘤，如肺鳞癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌、神经母细胞瘤、wilm肉瘤、脂肪肉瘤、睾丸非精原细胞瘤、卵巢癌、黑素瘤等肿瘤中过表达。因此，开发靶向gpc3的多肽用于治疗/诊断gpc3特异性高表达的恶性肿瘤具有极高的应用价值。
3、参考文献：
4、bhave,v.s.,et al.,regulation of liver growth by glypican3,cd81,hedgehog,and hhex.am j pathol,2013.183(1):p.153-9.
5、capurro,m.i.,et al.,glypican-3inhibits hedgehog signaling duringdevelopment by competingwithpatched for hedgehog binding.dev cell,2008.14(5):p.700-11.
技术实现思路
1、本发明目的是提供一种对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽及其应用，该多肽靶向结合于肿瘤细胞中过表达的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)，在肿瘤分子诊断和靶向治疗中具有重要应用价值。
2、为实现上述目的，本发明一方面提供一种对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽或其药学上可接受的盐，所述多肽含有seq id no.1或seq id no.2所示的氨基酸序列中连续8个以上的氨基酸残基，并且，所述多肽包含25个以下的氨基酸残基，
3、gcpghckifwqriecmtfcg(seq id no.1)；
4、gnwcninvawihwcedghg(seq id no.2)。
5、在一些实施方式中，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
6、在一些实施方式中，本发明提供的对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽或其药学上可接受的盐的氨基酸序列与seq id no.1或seq id no.2的氨基酸序列具有至少70％或75％或80％或85％或90％或95％的序列同一性；优选的，具有95％的序列同一性。
7、第二方面，本发明提供了一种多肽衍生物，所述的多肽衍生物为第一方面中所述的多肽的修饰产物或经一个或多个氨基酸添加和/或替换后获得的变体。
8、优选地，所述多肽衍生物为seq id no.1或seq id no.2所示的多肽或其药学上可接受的盐经一个、两个或三个氨基酸添加和/或替换后获得的变体。
9、进一步优选地，所述多肽衍生物为seq id no.1或seq id no.2所示的多肽或其药学上可接受的盐经一个氨基酸添加和/或替换后获得的变体。
10、优选地，所述多肽衍生物为seq id no.1或seq id no.2所示的多肽或其药学上可接受的盐的n端或c端修饰产物，所述修饰基团选自乙酰基、氨基、烷基、芳香基、脂肪酸基、糖基、磷酸基、硫酸基、聚乙二醇(peg)基团或肽类链接基团中的一种或多种。
11、进一步优选地，所述修饰选自：c端酰胺化封闭和/或n端修饰乙酰基。
12、本发明另一方面提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码上述的任一对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽或多肽衍生物。
13、本发明另一方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的上述的对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽或其药学上可接受的盐或多肽衍生物或多核苷酸及药物载体。
14、本发明另一方面提供权利上述的对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽或其药学上可接受的盐、多肽衍生物、多核苷酸或药物制剂在制备用于预防、诊断和/或治疗与gpc3异常活化相关的癌症的药物中的用途。
15、优选地，所述癌症选自由以下组成的组：肝癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、肉瘤、结直肠癌、胆管细胞癌、脊索瘤、小肠癌、嗜铬细胞瘤、胃癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、食道癌、头颈癌、胸腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、神经内分泌肿瘤、甲状腺癌、肠癌和骨转移等实体瘤。进一步地，所述癌症为肝癌。
16、有益效果：
17、1、本发明开发了一种新的对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽，亲和力高，可用于靶向gpc3。利用gpc3在恶性肿瘤中高表达，可用于gpc3高表达的恶性肿瘤的预防、诊断和/或治疗。
18、2、这些多肽均为低分子量多肽，合成成本低廉，且这些多肽在gpc3细胞中内吞明显。
19、如本文所用，“氨基酸”是指天然和非天然氨基酸。通过含前缀“l-”或“d-”(非手性的甘氨酸除外)的三字母代码来指明氨基酸的立体构型，例如，l型的氨基酸有：丙氨酸(“l-ala”或“a”)、精氨酸(“l-arg”或“r”)、天冬酰胺(“l-asn”或“n”)、天冬氨酸(“l-asp”或“d”)、半胱氨酸(“l-cys”或“c”)、谷氨酰胺(“l-gln”或“q”)、谷氨酸(“l-glu”或“e”)、甘氨酸(“gly”或“g”)、组氨酸(“l-his”或“h”)、异亮氨酸(“l-ile”或“i”)、亮氨酸(“l-leu”或“l”)、赖氨酸(“l-lys”或“k”)、甲硫氨酸(“l-met”或“m”)、苯丙氨酸(“l-phe”或“f”)、脯氨酸(“l-pro”或“p”)、丝氨酸(“l-ser”或“s”)、苏氨酸(“l-thr”或“t”)、色氨酸(“l-trp”或“w”)、酪氨酸(“l-tyr”或“y”)和缬氨酸(“l-val”或“v”)。l-正亮氨酸和l-正缬氨酸可分别表示为(nleu)和(nval)。十九种天然存在的手性氨基酸具有相应的d-异构体，其通过含前缀“d-”的三字母代码来指明：丙氨酸(“d-ala”或“a”)、精氨酸(“d-arg”或“r”)、天冬酰胺(“d-asn”或“a”)、天冬氨酸(“d-asp”或“d”)、半胱氨酸(“d-cys”或“c”)、谷氨酰胺(“d-gln”或“q”)、谷氨酸(“d-glu”或“e”)、组氨酸(“d-his”或“h”)、异亮氨酸(“d-ile”或“i”)、亮氨酸(“d-leu”或“l”)、赖氨酸(“d-lys”或“k”)、甲硫氨酸(“d-met”或“m”)、苯丙氨酸(“d-phe”或“f”)、脯氨酸(“d-pro”或“p”)、丝氨酸(“d-ser”或“s”)、苏氨酸(“d-thr”或“t”)、色氨酸(“d-trp”或“w”)、酪氨酸(“d-tyr”或“y”)和缬氨酸(“d-val”或“v”)。
20、如本文所用，“肽”或“多肽”的含义是被本专业领域的技术人员所熟知的。通常情况下，肽或多肽是两个或多个氨基酸由酰胺键链接，酰胺键则由一个氨基酸的氨基与相邻氨基酸的羧基构成。本文所述的多肽可包含天然存在的氨基酸或者非天然存在的氨基酸。可被修饰成其类似物，衍生物，功能模拟物，伪肽等诸如此类包含至少两个氨基酸的化合物。
21、如本文所用，“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本发明本发明中所述的化合物的盐，或药物偶联物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，药学上可接受的盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
1.一种对磷脂酰基醇蛋白聚糖3特异的多肽或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述多肽含有seq id no.1或seq id no.2所示的氨基酸序列中连续8个以上的氨基酸残基，并且，所述多肽包含25个以下的氨基酸残基，
2.根据权利要求1所述的多肽或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
3.一种多肽衍生物，其特征在于，所述的多肽衍生物为权利要求1或2所述的多肽或其药学上可接受的盐的修饰产物或权利要求1或2所述的多肽或其药学上可接受的盐经一个或多个氨基酸添加和/或替换后获得的变体。
4.根据权利要求3所述的多肽衍生物，其特征在于，所述多肽衍生物为seq id no.1或seq idno.2所述多肽的n端或c端修饰产物，所述修饰基团选自乙酰基、氨基、烷基、芳香基、脂肪酸基、糖基、磷酸基、硫酸基、peg基团或肽类链接基团中的一种或多种；优选地，所述修饰选自：c端酰胺化封闭和/或n端修饰乙酰基。
5.根据权利要求3所述的多肽衍生物，其特征在于，所述的多肽衍生物为seq id no.1或seq id no.2所述的多肽经一个、两个或三个氨基酸添加和/或替换后获得的变体。
6.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1或2所述的多肽或其药学上可接受的盐或权利要求3-5任一项所述的多肽衍生物。
7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含作为活性成分的权利要求1或2中所述的多肽或其药学上可接受的盐或权利要求3-5任一项所述的多肽衍生物或权利要求6所述的多核苷酸。
8.权利要求1或2所述的多肽或其药学上可接受的盐、权利要求3-5任一项所述的多肽衍生物或权利要求6所述的多核苷酸或权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防、诊断和/或治疗与gpc3异常活化相关的癌症的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，所述癌症选自由以下组成的组：肝癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、肉瘤、结直肠癌、胆管细胞癌、脊索瘤、小肠癌、嗜铬细胞瘤、胃癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、食道癌、头颈癌、胸腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、神经内分泌肿瘤、甲状腺癌、肠癌和骨转移等实体瘤。
