本发明涉及免疫检测试剂，尤其涉及磁流体分层微控免疫分析试剂和检测试剂盒及其应用。
背景技术：
1、目前临床使用的免疫学分析技术和方法包含酶免疫分析技术、化学发光免疫分析技术、免疫层析分析技术和荧光免疫分析技术，这些技术各有其优缺点，其中化学发光免疫分析技术，免疫层析分析技术在临床免疫学诊断中应用最广。
2、化学发光免疫分析技术是将抗原抗体反应在水溶液中进行的液相反应和检测的技术，具有灵敏度高，重复性好，检测结果稳定，自动化程度高等优点，基本原理方法是：用磁微球固定已知的抗原抗体，在水溶液的缓冲体系中加入被测抗原抗体，然后再加与被测物对应的标记有发光物质的抗原抗体标记物，反应一定时间后，通过仪器将未参与反应或者多余的反应物进行反复洗涤清除干净，然后加入激发液使其发光并对发光值进行检测，从而计算出被测物质的含量，该技术存在需要高度自动化的检测仪器配套完成全部的加样、洗涤等过程，仪器成本高，体积大，不方便携带使用，更是无法家庭化和野战急救检测，对使用者有较高的专业技术要求的缺点。
3、免疫层析分析技术，是在纤维素膜上抗原抗体反应结果通过层析的自由运动而形成的检测技术，基本原理是：将已知的抗原抗体标记到胶体金，荧光物等标识物上，然后将其固定到硝酸纤维素膜上，加入被测物使其抗原抗体在膜上进行反应，然后通过自由层析到另一已知抗原抗体的固定线上形成反应物的堆积，通过检测荧光或者胶体金标识物来确认被测物的含量，具有简便快速，配套检测仪器体积小成本低，可随身携带，对操作人员没有什么技术要求，也可以家庭化使用的优点，但该方法也存在灵敏度较低，重复性较差，临床检测结果不稳定等缺点。
4、因此，开发一种灵敏度高、重复性好、检测结果稳定、配套仪器简单的免疫分析技术具有重要意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的是提供磁流体分层微控免疫分析试剂和检测试剂盒及其应用，以至少解决现有化学发光免疫分析技术存在的仪器成本较高、体积较大，不方便携带使用等问题。
2、本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：
3、第一方面，本发明提供了一种磁流体分层微控免疫分析试剂，包括：
4、r1试剂，包括稀释液一和分布在所述稀释液一中的由免疫磁珠形成的磁流体，所述免疫磁珠为用已知的抗原或抗体包被磁微粒构成；
5、r2试剂，包括稀释液二和分布在稀释液二中的标记结合物，所述标记结合物为不同荧光物质标记的被测物所对应的抗原或抗体；
6、r3试剂，为与水不相容的强疏水液体试剂。
7、结合第一方面，在一些实施方式中，所述强疏水液体试剂为四氯化碳、氯仿，液体石蜡、汽油、食用油、甲基硅油、全氟碳、氯苯、石油苯、石油醚、环己烷中的至少一种。
8、结合第一方面，在一些实施方式中，每毫升所述r1试剂中含有0.1～5mg免疫磁珠，每毫克磁微粒上包被有0.1～10微克抗原或抗体；所述磁微粒的粒径在0.1～10μm。
9、结合第一方面，在一些实施方式中，所述稀释液一为单位体积的缓冲液一中含有0.5～5.0w‰防腐剂、0.1～2.0w％血清蛋白、0.05～2w％氨基酸、0.01～0.1％表面活性剂；所述缓冲液一为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液中的至少一种，所述缓冲液一的ph为5.0～9.0。
10、结合第一方面，在一些实施方式中，所述氨基酸为精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、甘氨酸中的至少一种。
11、结合第一方面，在一些实施方式中，所述稀释液二为单位体积的缓冲液二中含有0.5～5.0w％蛋白稳定剂、0.5～5.0w‰防腐剂、0.1～2.0w％牛血清白蛋白、0.01～0.1％表面活性剂；所述缓冲液二为三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液中的至少一种，所述缓冲液二的ph为6.5～9.5。
12、结合第一方面，在一些实施方式中，所述蛋白稳定剂为山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、羧甲基纤维素、环糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和牛血清白蛋白中的至少一种。
13、结合第一方面，在一些实施方式中，所述防腐剂为叠氮化钠、硫柳汞、苯酚和procline300中的至少一种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通100、sds中的至少一种。
14、第二方面，本发明还提供了一种检测试剂盒，所述检测试剂盒包含上述第一方面所述的磁流体分层微控免疫分析试剂。
15、第三方面，本发明还提供了上述第二方面的检测试剂盒的应用，所述应用为在免疫反应检测中的应用，所述应用步骤为：在含有20～500微升r1试剂和10～500微升r2试剂的混合试剂中，加入被测样本10～150微升；再加入r3试剂100～1000微升，反应时间5～60分钟，利用磁体将参与反应的磁微粒及吸附在磁微粒上的被测物和标记结合物迁移到分层r3试剂中固定，置于荧光检测仪器中，检测荧光强度，荧光强度与被测物质的含量成比例，计算得到被测物的含量。
16、本发明的磁流体分层微控免疫分析试剂用于检测分析的原理如下：用磁微球固定已知的不同抗原或抗体，在水溶液的缓冲体系中加入被测抗原或抗体，然后再加与被测物对应的标记有不同荧光物质的抗原或抗体标记物，反应一定时间后，用专用磁体形成的磁力将参与反应的磁微粒及吸附在磁微粒上的被测物和荧光标识物从水溶液液体迁入到与水不相容的强疏水液体试剂中固定位置，然后通过检测强疏水液体试剂中荧光值来计算确认被测物的含量。
17、本发明选用了一种强疏水液体试剂与进行免疫反应的含磁流体的r1试剂和r2试剂的混合试剂分层，让抗原或抗体反应能够在r1试剂和r2试剂的混合试剂中像化学发光一样顺利进行免疫学液相反应，以保证其高度的灵敏度。同时，在混合试剂的上层或者下层分层有高度稳定、无毒无害、不干扰免疫反应，透明容易透光，以保证检测结果稳定的强疏水液体试剂层，然后通过专用磁体形成强大磁场，将磁流体中进行了免疫学反应且连接到磁微粒上的荧光标记物和被测物随磁微粒，一并在恒定磁力的牵引下从混合试剂运动固定到强疏水液体试剂层规定位置，并形成容易检测的形状，通过分层的混合试剂与强疏水液体试剂层的位置交换或者变换，达到只有参与了免疫反应并连接到磁微粒上的物质才能够处于固定检测位置，以避免未连接到磁微粒上的其它物质的干扰目的，由于该运动是在固定磁场力的作用下进行，保证了每次分离的磁微粒含量的一致性，解决了免疫层析自由运动的不均一性问题，从而保证了检测结果的重复性。然后通过荧光探测器检测轻相磁微粒位置的吸附荧光量，该荧光量的大小与被测样本中的成分成比例，从而实现检测被测物的含量，该检测结果的灵敏度，重复性和化学发光法基本接近，而荧光探测器小巧，易于携带，成本低廉，实现了免疫层析的方便性。
1.磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，所述强疏水液体试剂为四氯化碳、氯仿，液体石蜡、汽油、食用油、甲基硅油、全氟碳、氯苯、石油苯、石油醚、环己烷中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，每毫升所述r1试剂中含有0.1～5mg免疫磁珠，每毫克磁微粒上包被有0.1～10微克抗原或抗体；所述磁微粒的粒径在0.1～10μm。
4.根据权利要求1所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，所述稀释液一为单位体积的缓冲液一中含有0.5～5.0w‰防腐剂、0.1～2.0w％血清蛋白、0.05～2w％氨基酸、0.01～0.1％表面活性剂；
5.根据权利要求4所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，所述氨基酸为精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、甘氨酸中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，所述稀释液二为单位体积的缓冲液二中含有0.5～5.0w％蛋白稳定剂、0.5～5.0w‰防腐剂、0.1～2.0w％牛血清白蛋白、0.01～0.1％表面活性剂；
7.根据权利要求6所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，所述蛋白稳定剂为山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、羧甲基纤维素、环糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和牛血清白蛋白中的至少一种。
8.根据权利要求4或6所述的磁流体分层微控免疫分析试剂，其特征在于，所述防腐剂为叠氮化钠、硫柳汞、苯酚和procline300中的至少一种；
9.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含如权利要求1-8任一项所述的磁流体分层微控免疫分析试剂。
10.根据权利要求9所述的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述应用为在免疫反应检测中的应用，所述应用步骤为：在含有20～500微升r1试剂和10～500微升r2试剂的混合试剂中，加入被测样本10～150微升；再加入r3试剂100～1000微升，反应时间5～60分钟，利用磁体将参与反应的磁微粒及吸附在磁微粒上的被测物和标记结合物迁移到分层r3试剂中固定，置于荧光检测仪器中，检测荧光强度，计算得到被测物的含量。
