本发明涉及一种双残基延长肽及其制备方法。
背景技术：
1、在药品、食品、化妆品等的用途中，肽的需求在增高。然而，在现有的肽合成法中，需要过量的高价反应剂，会产生来自反应剂的大量废弃物，因此环境负担或制备成本的增大成为问题。此外，在每使肽延长1个残基时，都要使用与氨基酸同等以上的较大的保护基团，进一步需要该保护基团的脱保护工序，因此原子经济性(atom economy)下降及工序数增加也成为较大问题。因此，谋求一种迅速且高效的肽合成方法。
2、作为减少肽合成的工序数的方法，已知有通过一锅合成法合成三肽或者寡肽的方法。其中，shin等报告了使用脱氢氨基酸n-羧酸酐(脱氢nca)的一锅三肽合成(例如，参照非专利文献1及2)。然而，非专利文献1及2的方法只不过是通过使用相较于通常的氨基酸n-羧酸酐(nca)更稳定的脱氢nca提高收率，使用通常的nca无法延长广泛的氨基酸残基。
3、此外，还示出了氨基甲酸酯保护nca在一锅三肽合成中是有用的(例如，参照非专利文献3)。然而，非专利文献3的方法需要另外制备氨基甲酸酯保护nca，需要去除保护基团这一情况并未改变。此外，对在通常的肽合成、特别是在碱性条件下的肽合成中成为问题的氨基酸残基的差向异构化没有任何提及。
4、另一方面，还存在未使用不稳定的nca，通过一锅法合成寡肽的报告例(例如，参照非专利文献4)。然而，非专利文献4的方法使用了保护基团及高价的试剂，需要去除该保护基团及来自该试剂的杂质的工序，且反应时间长。因此，无法称之为能够适用广泛的氨基酸的优异的肽合成法。
5、因此，以往需要通过对延长的所有氨基酸进行保护或脱氢化，从而进行稳定化。即，迄今为止未提供一种使用无保护氨基酸迅速地得到各种肽的方法。因此，谋求一种这样的方法。
6、现有技术文献
7、非专利文献
8、非专利文献1：chem. lett. 1994, 1909-1910.
9、非专利文献2：bull. chem. soc. jpn. 1994, 67, 2151-2161.
10、非专利文献3：tetrahedran lett. 1995, 36, 807-810.
11、非专利文献4：org. biomol. chem. 2017, 15, 7533-7542.
技术实现思路
1、（一）要解决的技术问题
2、本发明鉴于上述现有技术的现状而完成，其主要目的在于提供一种使用氨基酸n-羧酸酐(nca)制备双残基延长的各种肽的方法。
3、（二）技术方案
4、为了达成上述目的，本技术的发明人进行了认真研究。结果发现，通过使第一氨基酸或肽、卤化剂、叔胺、氨基酸n-羧酸酐(nca)及第二氨基酸或肽进行反应，从而使氨基酸或肽的n末端进行双残基延长，由此能够在短时间内得到双残基延长的各种肽。本技术的发明人根据上述见解进行了进一步研究，完成了本发明。即，本发明包含以下的构成。
5、项1. 一种制备方法，其为制备下述通式(6)所表示的双残基延长肽的方法，
6、[化学式1]
7、
8、式(6)中，r1表示氢原子或烷基；r4、r8及r10相同或不同，表示氢原子或甲基；r2、r5、r6、r9及r11相同或不同，表示氨基酸残基的侧链；r2、r5、r6、r9及r11经由它们所键合的碳原子与相邻的氮原子共同形成环或不形成环；r3、r7及r12相同或不同，表示氢原子、或者经取代或未经取代的一价有机基团；p1表示氢原子、氨基的保护基团、标签或固相载体；p2表示氢原子、羧基的保护基团、标签或固相载体；n1表示0以上的整数，在n1为2以上的整数时，n1个的r1、r2及r3任选相同或不同；n2表示0以上的整数，在n2为2以上的整数时，n2个的r10、r11及r12任选相同或不同，
9、所述制备方法包含：使下述通式(1)所表示的第一氨基酸或肽、卤化剂、下述通式(3)所表示的叔胺、下述通式(4)所表示的氨基酸n-羧酸酐(nca)及下述通式(5)所表示的第二氨基酸或肽进行反应的反应工序，
10、[化学式2]
11、
12、式(1)中，r1、r2、r3、r4、r5、p1及n1与所述的r1、r2、r3、r4、r5、p1及n1相同，
13、[化学式3]
14、
15、式(3)中，r13、r14、r15相同或不同，表示经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的芳基、或者经取代或未经取代的杂芳基；或者，r13、r14及r15中的2个以上连接，形成或不形成具有或不具有1个以上的杂原子或取代基的环，
16、[化学式4]
17、
18、式(4)中，r6及r7与所述的r6及r7相同，
19、[化学式5]
20、
21、式(5)中，r8、r9、r10、r11、r12、p2及n2与所述的r8、r9、r10、r11、r12、p2及n2相同。
22、项2. 根据项1所述的制备方法，其中，所述反应工序包含：
23、(a)使所述通式(1)所表示的第一氨基酸或肽、卤化剂、所述通式(3)所表示的叔胺及所述通式(4)所表示的氨基酸n-羧酸酐(nca)进行反应的反应工序；以及
24、(b)使所述工序(a)中得到的反应混合物及所述通式(5)所表示的第二氨基酸或肽进行反应的反应工序。
25、项3. 根据项1或2所述的制备方法，其中，所述工序(a)包含：
26、(a1)使所述通式(1)所表示的第一氨基酸或肽、卤化剂及所述通式(3)所表示的叔胺进行反应的反应工序；以及
27、(a2)使所述工序(a1)中得到的反应混合物及所述通式(4)所表示的氨基酸n-羧酸酐(nca)进行反应的反应工序。
28、项3-1. 根据项1~3中任一项所述的制备方法，其中，所述r2、r5、r6、r9及r11为天然氨基酸残基的侧链。
29、项3-2. 根据项1~3-1中任一项所述的制备方法，其中，所述n1为0~100的整数。
30、项3-3. 根据项1~3-2中任一项所述的制备方法，其中，所述n2为0~100的整数。
31、项4. 根据项1~3-3中任一项所述的制备方法，其中，所述卤化剂为下述通式(2)所表示的亚硫酰，
32、[化学式6]
33、
34、式(2)中，x相同或不同，表示卤原子。
35、项5. 根据项1~4中任一项所述的制备方法，其中，所述叔胺包含脂肪族胺和/或杂环芳香族胺。
36、项6. 根据项1~5中任一项所述的制备方法，其中，所述反应工序的反应温度为-80~100℃。
37、项7. 根据项1~6中任一项所述的制备方法，其中，所述反应工序的反应时间小于60分钟。
38、项8. 根据项1~7中任一项所述的制备方法，其中，所述反应工序通过流动法(flowmethod)进行。
39、项9. 根据项1~8中任一项所述的制备方法，其中，所述反应工序通过微流法(microflow method)进行。
40、项10. 一种酰基化nca，其由下述通式(8)表示，
41、[化学式7]
42、
43、式(8)中，r1表示氢原子、或者经取代或未经取代的一价有机基团；r4表示氢原子或甲基；r2、r5及r6相同或不同，表示氨基酸残基的侧链；r2、r5及r6经由它们所键合的碳原子与相邻的氮原子共同形成环或不形成环；r3及r7表示氢原子、或者经取代或未经取代的一价有机基团；p1表示氢原子、氨基的保护基团、标签或固相载体；n1表示0以上的整数，在n1为2以上的整数时，n1个的r1~r3任选相同或不同。
44、项11. 一种肽，其由下述通式(9)表示，
45、[化学式8]
46、
47、式(9)中，r16、r17及r18相同或不同，表示氨基酸残基的侧链；r16、r17及r18经由它们所键合的碳原子与相邻的氮原子共同形成环或不形成环；p3表示氢原子或氨基的保护基团；p4表示氢原子、羧基的保护基团。
48、项12. 一种肽，其由seq id no:1所表示的氨基酸序列构成。
49、（三）有益效果
50、根据本发明，通过将第一氨基酸或肽、氨基酸n-羧酸酐(nca)、特定的卤化剂及特定的叔胺进行组合，使其与第二氨基酸或肽进行反应，从而使第一氨基酸或肽的n末端进行双残基延长，由此能够在短时间内得到双残基延长的各种肽。
1.一种制备方法，其为制备下述通式(6)所表示的双残基延长肽的方法，
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述反应工序包含：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，所述工序(a)包含：
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述卤化剂为下述通式(2)所表示的亚硫酰，
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述叔胺包含脂肪族胺和/或杂环芳香族胺。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述反应工序的反应温度为-80~100℃。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述反应工序的反应时间小于60分钟。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的制备方法，其中，所述反应工序通过流动法进行。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，所述反应工序通过微流法进行。
10.一种酰基化nca，其由下述通式(8)表示，
11.一种肽，其由下述通式(9)表示，
12.一种肽，其由seq id no:1所表示的氨基酸序列构成。
