本发明涉及生物技术的产品和方法，特别涉及多链多靶向性抗原结合分子、其制备及其用途。
背景技术：
1、通过独立于t细胞受体特异性的双特异性分子重定向针对肿瘤细胞的t细胞活性是免疫肿瘤学中进一步发展的方法(frankel sr,baeuerle pa.targeting t cells totumor cells using bispecific antibodies[使用双特异性抗体将t细胞靶向肿瘤细胞].curr opin chem biol[化学生物学新见]2013；17:385–92)。这种新的基于蛋白质的药物通常可以同时结合两种不同类型的抗原。它们以几种结构形式为人所知，目前已经探索了癌症免疫疗法和药物递送的应用(fan,gaowei；wang,zujian；hao,mingju；li,jinming(2015).“bispecific antibodies and their applications[双特异性抗体及其应用]”.journal of hematology&oncology[血液学与肿瘤学杂志].8:130)。
2、可用于免疫肿瘤学的双特异性分子可以是抗原结合多肽如抗体，例如igg样抗体，即全长双特异性抗体，或不是全长抗原结合分子的非igg样双特异性抗体。全长双特异性抗体典型地保留具有两个fab臂和一个fc区的传统单克隆抗体(mab)结构，不同的是两个fab位点结合不同抗原。非全长双特异性抗体可以缺乏整个fc区。这些包括化学连接的fab、仅由fab区组成、以及各种类型的二价和三价单链可变片段(scfv)。还存在模拟两种抗体的可变结构域的融合蛋白。这种形式的一个实例是双特异性t细胞接合器(yang,fa；wen,weihong；qin,weijun(2016).“bispecific antibodies as a development platformfor new concepts and treatment strategies[双特异性抗体作为新概念和治疗策略的开发平台]”.international journal of molecular sciences[国际分子科学杂志].18(1):48)。
3、示例性双特异性抗体衍生分子如分子是由两个柔性连接的抗体衍生的结合结构域制备的重组蛋白质构建体。抗原结合分子的一个结合结构域对靶细胞上选择的肿瘤相关表面抗原是特异性的；第二结合结构域对cd3(t细胞上的t细胞受体复合物的亚基)具有特异性。通过其特定设计，抗原结合分子独特地适合于将t细胞与靶细胞瞬时连接，并且同时强有力地激活t细胞对靶细胞的固有溶细胞潜力。以amg 103和amg 110开发进入临床的第一代抗原结合分子(参见wo 99/54440和wo 2005/040220)的重要进一步开发是提供在cd3ε链的n末端结合背景独立表位(context independent epitope)的双特异性抗原结合分子(wo 2008/119567)。与该选择的表位结合的抗原结合分子不仅显示出对人和猕猴，或绒毛猴(callithrix jacchus)、绒顶柽柳猴(saguinusoedipus)或松鼠猴(saimiri sciureus)cd3ε链的跨物种特异性，而且由于识别该特异性表位(而不是先前描述的双特异性t细胞接合分子中cd3结合物的表位)而未展示出与对于前一代t细胞接合抗体所观察到的程度相同的t细胞的非特异性激活。t细胞激活的这种减少与患者中较少或减少的t细胞再分布相关，后者被鉴定为副作用的风险，例如，在帕索妥昔单抗(pasotuximab)中。
4、如wo 2008/119567中所述的基于抗体的分子的特征在于从体内快速清除；因此，虽然它们能够快速到达身体的大部分部位，但它们的体内应用可能受到其在体内的持久性短的限制。另一方面，它们在体内的浓度可以在短时间内进行调整和微调。因为这种小的单链分子的体内半衰期短，所以使用通过连续静脉内输注的长期施用来实现治疗作用。然而，可获得具有更有利的药代动力学特性(包括如wo 2017/134140中所述的更长的半衰期)的双特异性抗原结合分子。增加的半衰期典型地在免疫球蛋白、相对于特别是小尺寸的抗体片段或构建体的体内应用中是有用的，例如为求患者顺应性。
5、基于抗体的免疫肿瘤学的一个挑战性持续问题是肿瘤逃逸。当免疫系统(即使在通过一些基于抗体的免疫疗法触发或指导的情况下)没有足够的能力根除肿瘤时，发生此类肿瘤逃逸，这些肿瘤携带累积的遗传改变和表观遗传改变，并且使用几种机制赢得免疫编辑过程(keshavarz-fathi,mahsa；rezaei,nima(2019)“vaccines for cancerimmunotherapy[用于癌症免疫疗法的疫苗]”)。通常，已知四种干扰有效抗肿瘤免疫应答的机制：(1)缺陷型肿瘤抗原加工或呈递，(2)激活机制的缺乏，(3)抑制机制和免疫抑制状态，以及(4)抗性肿瘤细胞。尤其是对于第一种机制，肿瘤抗原由于遗传不稳定性、肿瘤突变和从免疫系统逃逸，可能以新形式存在。表位阴性肿瘤细胞保持隐藏并且因此对免疫排斥有抗性。它们是在消除表位阳性肿瘤细胞后开发的，类似于达尔文的自然选择理论。因此，当此类肿瘤细胞由于肿瘤逃逸而不再表达各自的抗原时，针对肿瘤细胞上抗原的基于抗体的免疫疗法变得无效。所述抗原丢失在本文中理解为肿瘤逃逸的驱动力，并且因此可以互换使用。因此，需要提供改善的基于抗体的免疫肿瘤学，其解决了抗原丢失的问题以有效预防肿瘤逃逸。
6、相对于t细胞接合双特异性分子，广泛应用免疫肿瘤学的可能更紧迫的挑战是合适靶标的可利用性(bacac等人,clin cancer res[临床癌症研究]；22(13)2016年7月1日)。例如，实体瘤靶标可在肿瘤细胞上过表达，但是在关键组织中的非恶性初生细胞中以较低但显著的水平表达。在自然中，根据bacac等人，t细胞可以通过相对低亲和力的t细胞受体(tcr)区分高抗原表达细胞和低抗原表达细胞，这些受体仍然可以实现与表达足够高水平的靶抗原的靶细胞高亲合力的结合。因此，非常需要可有利于以上、并且因此将杀死高靶标表达细胞和低靶标表达细胞之间的窗口最大化的t细胞接合双特异性分子。本领域中讨论的一种方法是使用两种抗原的双靶向，这可以使仅表达一种靶抗原或表达低水平的两种靶抗原的正常组织的靶标选择性得到改善。此作用被认为依赖于bsab与同一细胞上的两个抗原同时结合所介导的亲合力组分。因此相对于双靶向本身，一些多特异性单克隆抗体(mab)或其他免疫构建体在本领域是已知的。wo 2014/116846教导了多特异性结合蛋白，该多特异性结合蛋白包含与靶细胞抗原特异性地结合的第一结合位点、与免疫细胞上的细胞表面受体特异性地结合的第二结合位点、和与免疫细胞上的细胞表面调节物特异性地结合的第三结合位点。us2017/0022274披露了包含双特异性抗体的三价t细胞重定向复合物，其中该双特异性抗体具有两个针对肿瘤相关抗原(taa)的结合位点和一个针对t细胞的结合位点。
7、然而，如上所述的分子中仅仅双靶向可能不足以实现有效的靶标选择性(mazor等人,mabs[单克隆抗体]7:3,461-469；2015年5月/6月)。特别是bsab结合结构域的配置，即单价相比于二价，是一个关键因素。更重要的是，仅仅提供具有几个价态的双特异性分子可能不会导致临床上合适的治疗方法，还必须考虑在显著免疫学副作用(例如细胞因子释放综合征(crs))方面的潜在风险谱。因此，尽管到目前为止，基于抗体的免疫疗法在临床前和临床上取得了成功，但仍存在明显的局限性，包括个体与癌症类型之间的差异性反应。剂量限制性毒性可能是基于抗体的免疫疗法功效的限制因素，因此并非所有患者都在可用的安全剂量下对治疗产生应答。因此，还需要减少基于抗体的免疫疗法的剂量限制性毒性以使得此类疗法可用于更多的患有多样化增殖性疾病的患者。
8、虽然本领域已知不同的多特异性抗体或抗体片段，其中一些寻址t细胞，但在此之前尚未提出以下多靶向性双特异性分子，其通过增加治疗窗口来解决克服t细胞重定向免疫疗法中剂量限制性毒性的需要并且是稳定且随时可用的治疗系统。
技术实现思路
1、鉴于上述各种未满足的需求，本发明的目的是提供包含至少两条多肽链的分子(即多链分子)，该分子优选是抗原结合分子。本发明的分子进一步优选是双特异性的，例如t细胞接合分子。此外，本发明的分子优选地是多靶向性的，例如它通常能够免疫特异性结合靶细胞上的至少两种抗原，这些抗原通常与一种或多种疾病有关。进一步优选的是，本发明的分子通常能够同时免疫特异性地结合效应细胞上的两种抗原，优选用于治疗所述一种或多种疾病。因此，本发明提供包含至少一个多肽的优选多靶向性双特异性抗原结合分子，其中该分子的特征在于包含至少五个不同的结构实体，即，(i.)结合靶细胞表面抗原(例如第一肿瘤相关抗原，taa)的第一结构域，(ii.)结合人(和优选非人灵长类动物，例如猕猴)cd3链的细胞外表位的第二结构域，其中第一结合结构域和第二结合结构域一起形成第一双特异性实体，(iii.)将第一双特异性实体与第二双特异性实体连接但也充分隔开的间隔物，该第二双特异性实体包含(iv.)结合相同或优选不同靶细胞表面抗原(例如第二taa)的第三结构域，和(v.)结合人(和优选非人灵长类动物，例如猕猴)cd3链的细胞外表位的第四结构域。优选地，这些结构域是(i.)分别按氨基到羧基取向由vh和vl结构域构成的scfv结构域，其中柔性但短的肽接头分别将第一结构域的vl连接到第二结构域的vh且将第三结构域的vl连接到第四结构域的vh，和/或(ii.)fab结构域，这些结构域包含含有vl和cl结构域的第一多肽单体、和含有vh和ch结构域的第二多肽单体。出人意料的是，本文所述的多链多靶向性双特异性抗原结合分子通常能够使t细胞分别区分杀伤仅表达一种或表达两种通常与特定疾病相关的靶标的细胞，从而打开治疗窗口并降低脱靶毒性和副作用的风险。此外，本发明提供了编码多靶向性双特异性抗原结合分子的多核苷酸、包含这种多核苷酸的载体、和表达构建体的宿主细胞、以及包含该抗原结合分子的药物组合物。
2、在第一方面，在本发明的上下文中设想提供包含至少两条多肽链的多链多靶向性双特异性分子，其中该分子包含
3、(i.)第一结合结构域，其结合第一靶细胞表面抗原(taa1)，
4、(ii.)第二结合结构域，其结合人和/或猕猴cd3链的细胞外表位，
5、(iii.)第三结合结构域，其结合第二靶细胞表面抗原(taa2)，以及
6、(iv.)第四结合结构域，其结合人和/或猕猴cd3链的细胞外表位，
7、其中该第一结合结构域和该第二结合结构域形成第一双特异性实体，该第三结合结构域和该第四结合结构域形成第二双特异性实体，并且
8、其中该分子进一步包含选自以下的间隔物实体：
9、(1.)选自以下的二聚化结构域：
10、(a.)fc结构域，其包含分别包含铰链、ch2结构域和ch3结构域的第一和第二多肽单体，其中该第一和第二多肽单体形成异二聚体；其中该异二聚体由以下形成：
11、-电荷对突变，其选自：(i.)d399k、k409d、k392d、和e356k，(ii.)d399k、k409d、k392d、e357k、k370d、和e356k，(iii.)d399k、k409d、k392d、e356k和k439d，(iv.)d399k、k409d、和k392d，(v.)d399k、k409d、k392d、e357k和e370k，(vi.)d399k、k409d、k392d、e357k、k370e和k360e，(vii.)d399k、k409d、k392d、e357k、k370e、e356k、和k439e，以及(viii.)d399k、k409d、k392d、e357k、k370e、k360e、e356k、和k439d，优选地在该第一多肽单体的ch3结构域中包含k392d、k409d和/或k439d突变，并且在该第二多肽单体的ch3结构域中包含e356k和/或d399k突变，其中位置根据eu编号；或者
12、-杵臼结构(knobs-into-holes)突变，其优选地在该第一多肽单体中包含t366s、l368a和y407v突变且在该第二单体中包含t366w突变，其中这些位置根据eu编号；
13、(b.)人血清白蛋白(hsa)结构域，其包含第一和第二多肽单体，其中该第一和该第二多肽单体分别对应于hsa亚结构域，其中该第一和第二多肽单体形成天然hsa样异二聚体；以及
14、(c.)包含第一和第二多肽单体的fab，其中该第一多肽单体包含vl和cl结构域，该第二多肽单体包含vh和ch1结构域，其中该cl和ch1结构域通过二硫桥连接；
15、其中该二聚化结构域分别包含两个n-末端和两个c-末端，其中至少一个n-末端和一个c-末端分别连接到双特异性实体，其中该第一、第二、第三和第四结构域中的任一个可以选自任何形式的结合结构域，优选地选自fab和单链结构域，该单链结构域优选地选自单链fv(scfv)和scfab；
16、(2.)选自以下的单链结构域：泛素，β2微球蛋白，仅vh结构域，来自met-受体的psi结构域，来自生腱蛋白的纤连蛋白iii型结构域，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)，白介素-4，cd137l胞外域，白介素-2，来自人程序性细胞死亡1配体1(pdl1)的pd-1结合结构域，tim-3(as24-130)，minisog，程序性细胞死亡蛋白1(pd1)结构域，人血清白蛋白(hsa)，或包含各自包含铰链、ch2和ch3结构域、铰链和另外的ch2和ch3结构域的两个多肽单体的单链fc(scfc)结构域，其中所述两个多肽单体通过肽接头彼此融合，
17、其中该单链结构域包含一个n-末端和一个c-末端，它们分别连接到双特异性实体，其中该第一、第二、第三和第四结合结构域中的至少一个是双链fab，并且剩余的多达至少三个结合结构域中的任一个可选自任何形式的结合结构域，优选地选自fab和单链结构域，该单链结构域优选地选自scfv和scfab；
18、其中位于该间隔物实体n-末端的第一个氨基酸和c-末端的最后一个氨基酸的cα原子之间的距离间隔至少其中该间隔物实体使该第一双特异性实体和该第二双特异性实体间隔至少约的距离，其中所指示距离优选理解为(i.)该第一结合结构域和该第三结合结构域或(ii.)该第一双特异性实体和该第二双特异性实体的质心之间的距离，并且该间隔物实体位于该第一双特异性实体和该第二双特异性实体之间。
19、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供多链多靶向性双特异性抗原结合分子，其中当间隔物是单链结构域时，这些结合结构域从氨基到羧基顺序的排列选自由以下组成的组：
20、(i.)第一和第二结构域、间隔物、第三和第四结构域
21、(ii.)第一和第二结构域、间隔物、第四和第三结构域
22、(iii.)第二和第一结构域、间隔物、第三和第四结构域，以及
23、(iv.)第二和第一结构域、间隔物、第四和第三结构域。
24、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供多链多靶向性双特异性抗原结合分子，其中当间隔物是单链结构域时，这些结合结构域从氨基到羧基顺序的排列选自由以下组成的组：
25、(i.)fab形式的第一结构域、scfv形式的第二结构域、间隔物、fab形式的第三结构域和scfv形式的第四结构域(例如图3b)；
26、(ii.)fab形式的第一结构域、fab形式的第二结构域、间隔物、fab形式的第三结构域和fab形式的第四结构域(例如图3d)；
27、(iii.)scfv形式的第一结构域、fab形式的第二结构域、间隔物、scfv形式的第三结构域和fab形式的第四结构域(例如图3h)；
28、(iv.)scfv形式的第一结构域、scfv形式的第二结构域、间隔物、scfv形式的第三结构域和fab形式的第四结构域；
29、(v.)scfv形式的第一结构域、scfv形式的第二结构域、间隔物、fab形式的第三结构域和scfv形式的第四结构域；
30、(vi.)fab形式的第一结构域、scfv形式的第二结构域、间隔物、scfv形式的第三结构域和scfv形式的第四结构域；以及
31、(vii.)scfv形式的第一结构域、fab形式的第二结构域、间隔物、scfv形式的第三结构域和scfv形式的第四结构域，
32、其中每个scfv从氨基到羧基顺序包含vh、接头和vl或vl、接头和vh，优选vh、接头和vl。
33、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供多链多靶向性双特异性抗原结合分子，其中当间隔物是二聚化结构域时，这些结合结构域从氨基到羧基顺序的排列选自由以下组成的组：
34、(i.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、scfv形式的第二结构域、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体的第二链，和包含该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、包含与第四链上第三结构域的vl和cl一起形成fab的该第三结构域的vh和ch1的第三结构域的第三链，以及包含该第三结构域的vl和cl以及scfv形式的第四结构域的第四链(例如图3a)；
35、(ii.)fab形式的第一结构域、fab形式的第二结构域、间隔物、fab形式的第三结构域和fab形式的第四结构域(例如图3c)；
36、(iii.)包含scfv形式的第二结构域、与第二链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体的第一链，包含该第一结构域的vl和cl的第二链，包含该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、包含与第四链上第三结构域的vl和cl一起形成fab的该第三结构域的vh和ch1的第三结构域的第三链，以及包含该第三结构域的vl和cl以及scfv形式的第四结构域的第四链(例如图3e)；
37、(iv.)包含scfv形式的第二结构域、与第二链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体的第一链，包含该第一结构域的vl和cl的第二链，包含该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第四结构域、包含与第四链上第三结构域的vl和cl一起形成fab的该第三结构域的vh和ch1的第三结构域的第三链，以及包含该第三结构域的vl和cl的第四链(例如图3f)；
38、(v.)包含scfv形式的第二结构域、与第二链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体的第一链，包含该第一结构域的vl和cl的第二链，包含该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第四结构域、包含与第四链上第三结构域的vl和cl一起形成fab的该第三结构域的vh和ch1的第三结构域的第三链，以及包含该第三结构域的vl和cl的第四链(例如图3g)；
39、其中每个scfv从氨基到羧基顺序包含vh、接头和vl或vl、接头和vh，优选vh、接头和vl。
40、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中当间隔物是二聚化结构域时，这些结合结构域的排列处于氨基到羧基顺序并选自由以下组成的组：
41、(i.)包含scfv形式的第一结构域、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第三结构域的第一链和包含scfv形式的第二结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第四结构域的第二链(例如图2a)；
42、(ii.)包含scfv形式的第一结构域、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第二结构域的第一链和包含scfv形式的第三结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第四结构域的第二链(例如图2b)；
43、(iii.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第三结构域的第二链，和包含scfv形式的第二结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第四结构域的第三链(例如图2c)；
44、(iv.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第二结构域的第二链，和包含scfv形式的第四结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第三结构域的第三链(例如图2d)；
45、(v.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体的第二链，和包含scfv形式的第二结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第三结构域以及scfv形式的第四结构域的第三链(例如图2e)；
46、(vi.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第三结构域和scfv形式的第四结构域的第二链，和包含scfv形式的第二结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体的第三链(例如图2f)；
47、(vii.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、与第三链一起形成fab的第三结构域的vh和ch1的第二链，包含该第三结构域的vl和cl的第三链，包含该第二结构域的vh和ch1——与第五链一起形成fab——该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、与第六链一起形成fab的第三结构域的vh和ch1的第四链，包含该第二结构域的vl和cl的第五链，以及包含该第四结构域的vl和cl的第六链(例如图2g)；
48、(viii.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第二结构域的第二链，包含scfv形式的第四结构域、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、与第四链一起形成fab的第三结构域的vh和ch1的第三链，以及包含该第三结构域的vl和cl的第四链(参见例如图2h)；
49、(ix.)包含scfv形式的第一结构域、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第三结构域的第一链，包含与第三链一起形成fab的第二结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、与第四链一起形成fab的第四结构域的vh和ch1的第二链，包含该第二结构域的vl和cl的第三链，以及包含该第四结构域的vl和cl的第四链(例如图2i)；
50、(x.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第三结构域的第二链，包含与第四链一起形成fab的第二结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第四结构域的第三链，以及包含该第二结构域的vl和cl的第四链(例如图2j)；
51、(xi.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第二结构域的第二链，包含与第四链一起形成fab的第四结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第三结构域的第三链，以及包含该第四结构域的vl和cl的第四链(例如图2k)；
52、(xii.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体的第二链，包含与第四链一起形成fab的第二结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体、scfv形式的第三结构域、scfv形式的第四结构域的第三链，以及包含该第二结构域的vl和cl的第四链(例如图2l)；
53、(xiii.)包含该第一结构域的vl和cl的第一链，包含与该第一链一起形成fab的该第一结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第一多肽单体、scfv形式的第三结构域、scfv形式的第四结构域的第二链，包含与第四链一起形成fab的第二结构域的vh和ch1、该间隔物二聚化结构域的第二多肽单体的第三链，以及包含该第二结构域的vl和cl的第四链(例如图2m)；
54、其中每个scfv从n到c取向包含vh、接头和vl或vl、接头和vh，优选vh、接头和vl。
55、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中间隔物实体是球状蛋白质，其中位于n末端的第一个氨基酸和位于c末端的最后一个氨基酸的cα原子之间的距离间隔至少优选至少更优选至少以便将该第一双特异性实体和该第二双特异性实体有效地间隔开优选至少
56、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中将该第一双特异性实体和该第二双特异性实体有效间隔开的所述间隔物实体(当间隔物为单链时)选自由以下组成的组：泛素、β2微球蛋白、sand结构域、绿色荧光蛋白(gfp)、vhh抗体lama结构域、来自met受体的psi结构域、来自生腱蛋白的纤连蛋白iii型结构域、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、白介素-4、cd137l胞外域、白介素-2、来自人程序性细胞死亡1配体1(pdl1)的pd-1结合结构域、tim-3(as 24-130)、minisog、程序性细胞死亡蛋白1(pd1)结构域、人血清白蛋白(hsa)或任何前述间隔物实体的衍生物、刚性接头的多聚体、和fc结构域或其二聚体或三聚体，每个fc结构域包含两个多肽单体，每个多肽单体包含铰链、ch2和ch3结构域铰链以及另外的ch2和ch3结构域，其中所述两个多肽单体通过肽接头彼此融合，或其中这两个多肽单体通过非共价ch3-cdh3相互作用和/或共价二硫键连接在一起形成异二聚体。
57、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中所述间隔物实体(当为单链时)是至少一个fc结构域，优选地一个结构域或两个或三个共价连接的结构域，该结构域或这些结构域中的每一个从氨基到羧基顺序包含：
58、铰链-ch2-ch3-接头-铰链-ch2-ch3。
59、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中该间隔物实体中的所述多肽单体中的每一个具有与选自下组的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，该组由以下组成：seq id no:17-24，其中优选地所述多肽单体中的每一个具有选自seqid no:17-24的氨基酸序列。
60、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中间隔物中的ch2结构域包含结构域内半胱氨酸二硫桥。
61、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中该单链间隔物实体包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：seq id no:13和15至16和25至34、泛素(seq id no:1081)、β2微球蛋白(seq id no:1083)、sand结构域(seq id no:1084)、绿色荧光蛋白(gfp)(seq id no:1085)、vhh抗体lama结构域(seq id no:1086)、来自met受体的psi结构域(seq id no:1087)、来自生腱蛋白的纤连蛋白iii型结构域(seq id no:1088)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)(seq id no:1089)、白介素-4(seq id no:1090)、cd137l胞外域(seq id no:1091)、白介素-2(seq id no:1092)、来自人程序性细胞死亡1配体1(pdl1)的pd-1结合结构域(seq id no:1093)、tim-3(as24-130)(seq id no:1094)、minisog(seq id no:1095)、程序性细胞死亡蛋白1(pd1)结构域(seq id no:16)、人血清白蛋白(has，seq id no:15)或其具有至少90％，优选95％或甚至98％序列同一性的氨基酸，优选scfc(seq id no:25)。
62、
63、在所述方面内，还设想第一肽链的第一肽单体是seq id no 35并且第二肽链的第二肽单体是seq id no 36，其中这两个肽单体优选地形成异二聚体。
64、在所述方面内，还设想抗原结合分子的特征在于：
65、(i)该第一结构域和该第三结构域包含两个抗体衍生的可变结构域，并且该第二结构域和该第四结构域包含两个抗体衍生的可变结构域；
66、(ii)该第一结构域和该第三结构域包含一个抗体衍生的可变结构域，并且该第二结构域和该第四结构域包含两个抗体衍生的可变结构域；
67、(iii)该第一结构域和该第三结构域包含两个抗体衍生的可变结构域，并且该第二结构域和该第四结构域包含一个抗体衍生的可变结构域；或者
68、(iv)该第一结构域包含一个抗体衍生的可变结构域，并且该第三结构域包含一个抗体衍生的可变结构域。
69、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供包含两条多肽链的抗原结合分子，其中
70、该第一多肽链包含该第一结构域的vh，vh第二结构域，优选包含铰链、ch2和ch3结构域的第一多肽单体，该第三结构域的vh和该第四结构域的vh；并且
71、该第二多肽链包含该第一结构域的vl，vl第二结构域，优选包含铰链、ch2和ch3结构域的第一多肽单体，该第三结构域的vl和该第四结构域的vl，
72、其中优选地，该第一和第二多肽单体形成异二聚体，从而连接该第一和第二多肽链。
73、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一、第二、第三和第四结合结构域各自以氨基到羧基的顺序包含vh结构域和vl结构域，其中每个结构域内的vh和vl通过肽接头连接，优选以下柔性接头，该柔性接头包含丝氨酸、谷氨酰胺和/或甘氨酸作为氨基酸结构单元，优选仅丝氨酸(ser，s)或谷氨酰胺(gln，q)和甘氨酸(gly，g)，更优选(g4s)n或(g4q)n，甚至更优选seq id no:1或3。
74、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供肽接头，其中该肽接头包含s(g4x)n和(g4x)n或由其组成，其中x选自由q、t、n、c、g、a、v、i、l和m组成的组，其中n是选自整数1至20的整数，优选其中n是1、2、3、4、5或6，优选其中x是q，其中优选该肽接头是(g4x)n，n是3，并且x是q。
75、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一结合结构域和第二结合结构域以及第三结合结构域和第四结合结构域之间的肽接头优选是柔性接头，其包含丝氨酸、谷氨酰胺和/或甘氨酸或谷氨酸、丙氨酸和赖氨酸作为氨基酸结构单元，优选选自由seq id no:1至4、6至12和1125组成的组。
76、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一结合结构域或第二结合结构域与间隔物之间的肽接头，和/或第三结合结构域和第四结合结构域与间隔物之间的肽接头分别优选是富含小氨基酸和/或亲水性氨基酸，优选甘氨酸的短接头并且优选是seq id no:5。
77、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供一抗原结合分子，其中第一靶细胞表面抗原和第二靶细胞表面抗原中的任一个选自由以下组成的组：cs1、bcma、cdh3、flt3、cd123、cd20、cd22、epcam、msln和cll1。
78、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一靶细胞表面抗原和第二靶细胞表面抗原不同。
79、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一靶细胞表面抗原和第二靶细胞表面抗原相同。
80、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一结合结构域能够结合第一靶细胞表面抗原并且同时第三结合结构域能够结合第二靶细胞表面抗原，优选其中第一靶细胞表面抗原和第二靶细胞表面抗原在同一靶细胞上。
81、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供根据权利要求1所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和该第二靶细胞表面抗原分别选自由以下组成的组：cs1和bcma、bcma和cs1、flt3和cd123、cd123和flt3、cd20和cd22、cd22和cd20、epcam和msln、msln和epcam、msln和cdh3、cdh3和msln、flt3和cll1、以及cll1和flt3。
82、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供根据权利要求1所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和/或该第二靶细胞表面抗原是人msln(选自seq id no:1181、1182和1183)，并且其中本发明的抗原结合分子的第一和/或第三结合结构域如本文所述通过鼠嵌合序列分析确定结合人msln表位簇e1(seq id no:1175，根据kabat的aa296-346位置)，但优选不结合人msln表位簇e2(seq id no:1176，根据kabat的aa 247-384位置)、e3(seq id no:1177，根据kabat的aa385-453位置)、e4(seq id no:1178，根据kabat的aa 454-501位置)和/或e5(seq id no:1179，根据kabat的aa 502-545位置)。
83、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供根据权利要求1所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和/或该第二靶细胞表面抗原是人cdh3(seq id no:1170)，并且其中根据权利要求1所述的抗原结合分子的第一和/或第三结合结构域结合人cdh3表位簇d2b(seq id no:1171，根据kabat的aa 253-290位置)、d2c(seq id no:1172，根据kabat的aa 291-327位置)、d3a(seq id no:1173，根据kabat的aa 328-363位置)和d4b(seq id no:1174，根据kabat的aa 476-511位置)，优选d4b(seq id no:1174，根据kabat的aa 476-511位置)，如本文所述通过鼠嵌合序列分析确定。
84、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域(cd3结合结构域)均具有(i.)特征在于低于由表面等离子体共振(spr)测量的约1.2x 10-8m的kd值的亲和力，或(ii.)特征在于由spr测量的约1.2x10-8m的kd值的亲和力。
85、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域(cd3结合结构域)具有特征在于通过spr测量的约1.0x 10-7至5.0x10-6m，优选地约1.0至3.0x 10-6m，更优选地由spr测量的约2.5x 10-6m的kd值的亲和力。
86、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域(cd3结合结构域)具有特征在于通过spr测量的约1.0x 10-7至5.0x10-6m，优选地约1.0至3.0x 10-6m，更优选地由spr测量的约2.5x 10-6m的kd值的亲和力。
87、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域(cd3结合结构域)各自单独具有比一个包含根据seq id no 43的vh和根据seqid no 44的vl的cd3结合结构域低至少约10倍，优选至少约50倍或更优选至少约100倍的活性(即在单靶向环境中，相比于双靶向环境)。
88、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结构域是结合cd3ε链的效应结合结构域，这些效应结合结构域包含连接至vl的vh区或由其组成区域，其中
89、i)该vh区包含：
90、x1yax2n的cdr-h1序列，其中x1是k、v、s、g、r、t或i；且x2是m或i；
91、rirskynnyatyyadx1vkx2的cdr-h2序列，其中x1是s或q；且x2是d、g、k、s或e；并且
92、hx1nfgnsyx2sx3x4ay的cdr-h3序列，其中x1是g、r或a；x2是i、l、v或t；x3是y、w或f；并且x4是w、f或y；并且
93、ii)其中该vl区包含：
94、x1sstgavtx2x3x4yx5n的cdr-l1序列，其中x1是g、r或a；x2是s或t；x3是g或s；x4是n或y；并且x5是p或a；
95、x1tx2x3x4x5x6的cdr-l2序列；其中x1是g或a；x2是k、d或n；x3是f、m或k；x4是l或r；x5是a、p或v；并且x6是p或s；以及
96、x1lwysnx2wv的cdr-l3序列，其中x1是v、a或t；并且x2是r或l；并且
97、iii)其中i)的vh区和/或ii)的vl区的cdr序列中的一个或多个包含选自以下的一个氨基酸取代或其组合：cdr-h1中的x24v和x24f；
98、cdr-h2中的d15和x116a；
99、cdr-h3中的h1、x12e、f4和n6；以及
100、cdr-l3中的x11l和w3。
101、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域包含vh区和vl区，该vh区包含选自seq id no 37至39、45至47、53至55、61至63、69至71、436至438、1126至1128、1136至1138、1142至1144、1148至1150和1217至1219的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，该vl区包含选自seq id no 40至42、48至50、56至58、64至66、72至74、439至441、1129至1131、1139至1141、1145至1147、1151至1153、和1220至1222的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，优选61至63和64至66或1217至1219以及1220至1222。
102、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域包含选自seq id no 43、51、59、67、75、442、1132和1223，优选67或1223的vh区。
103、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域包含选自seq id no 44、52、60、68、76、443、1133和1224，优选68或1224的vl区。
104、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第二和第四结合结构域包含选自seq id no 43、51、59、67、75、442、1132和1223，优选67的vh区，和选自seq id no 44、52、60、68、76、443、1133和1224，优选68的vl区，其中当该vh区是1132且该vl区是1133时，该第二结合结构域和/或该第四结合结构域作为scfab结构域另外包含seq idno:1134的ch1结构域和seq id no:1135的clk结构域，并且其中该vh区和该vl区通过优选地选自seq id no 1、3和1125的接头彼此连接，或其中该第二结构域和该第四结构域的vh-ch1的vh的seq id no为seq id no 1223，该第二结构域和该第四结构域的vh-ch1的ch1的seq id no为seq id no 1224，该第二结构域和该第四结构域的vl-cl的vl的seq id no为seq id no 1225，并且该第二结构域和该第四结构域的vl-l的cl的seq id no为seq id no1226。在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域结合cdh3并包含vh区，该vh区包含seq id no:1154作为cdr-h1，其中x1(“x”后面的数字表示序列表中n-到c-取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)是s或n，x2是y或s、x3是p或w，x4是i或m且x5是y、n或h；seq id no:1155作为cdr-h2，其中x1是k、v、n或r；x2是a、d、r、y、s、w或h；x3是y、s、p、g或t；x4是s、g或k；x5是a、v、d、k、g或t；x6是a、v、d、k、s、g或h；x7是y、g或e；x8是k、i或n；x9是a、s或n；x10是s、q或g；x11是s或k；x12是f或v；并且x13是k或q；以及seq id no:1156作为cdr-h3，其中x1是f或q；x2是r、k、s或w；x3是g或d；x4是y、p或r；x5是r、s、g、n或t；x6是y、a或h；x7是f、l或m；x8是a或v；x9是y或v；并且其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合cdh3并包含vl区，该vl区包含seq id no:1158作为cdr-l1，其中x1是k或r，x2是a或s；x3是q、d、s、g或e；x4是s、d或n；x5是v、l或i；x6是k、y、s或h；x7是s或n；x8是f、l或m；并且x9是a、n或h；seq id no:1159作为cdr-l2，其中x1是y、g、w、n；x2是t或a；x3是s或k；x4是t、n或r；x5是l或r；x6是e、a、v或h；并且x7是s或e；和seq idno:1160作为cdr-l3，其中x1是q或v；x2是q、n或h；x3是f、l、y、w、n或h；x4是a、d、y、s或n；x5是q、r、s、g、w或m；x6是t、y或f；并且x7是f、y或l。
105、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域结合msln并包含vh区，该vh区包含seq id no:1162作为cdr-h1，其中x1(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)是s、g或d；x2是y、a、g或f；x3是i、w或m；并且x4是v、s、g、t或h；seq id no:1163作为cdr-h2，其中x1是a、s、n、w、y或v；x2是y、s或n；x3是y、g、p或s；x4是d、h、s或n；x5是g或s；x6是e、g或s；x7是g、s、n、f、t或q；x8是s、w、k、d、i或t；x9是y或n；x10是a或n；x11是a、p、n、d、e、i或q；x12是d、a、s或k；x13是v、l或f；x14是k或q；并且x15是g或s；和seq id no:1164作为cdr-h3，其中x1是d、e或v；x2是r、g或e；x3是y、a或n；x4是s、y、v或h；x5是a、p、f、y或h；x6是r或s；x7是e或g；x8是y或l；x9是r、y或l；x10是y或g；x11是d或y；x12是r、y或f；x13是m、s、f、d或y；x14是a、g、s或t；x15是l、m或f；并且x16是y、i或v；并且其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合msln并包含vl区，该vl区包含seq id no:1166作为cdr-l1，其中x1是a或s；x2是g或s；x3是e或q；x4是g、s或k；x5是i、l、v或f；x6是r、g或s；x7是d、s、n或t；x8是a、s、k或t；x9是y或w；x10是v或l；并且x11是y或a；seq id no 1167作为cdr-l2，其中x1是a、g或q；x2是a或s；x3是s或t；x4是g、s、k、i或t；x5是r或l；x6是a、p或q；并且x7是s或t；和seq id no 1168作为cdr-l3，其中x1是a或q；x2是y、s、a或t；x3是g、e、y、h或q；x4是a或s；x5是s、t或f；x6是-、p或t；x7是r、a、l或f；并且x8是v或t。
106、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域结合cdh3并包含seq id no:1157的vh区，其中(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)x1是q或e；x2是v、l；x3是q、e；x4是a或g；x5是g或e；x6是v或l；x7是k或v，x8是k或q，x9是a或g，x10是v或l，x11是k或r，x12是v或l，x13是a或k，x14是y或f，x15是t或s，x16是t或s，x17是s或n，x18是y或s，x19是p或w，x20是i或m，x21是y、n或h，x22是t或a，x23是q或k，x24是v或m，x25是s或g，x26是k、v、n或r，x27是a、d、r、y、s、w或h，x28是y、s、p、gr或t，x29是s、k、或g，x30是a、v、d、k、或、t，x31是a、-、d、k、s、g、或h，x32是y、g、或e，x33是k、i、或n，x34是a、s、或n，x35是s、q、或g，x36是s或k，x37是f或v，x38是q或k，x39是f或v，x40是i或m，x41是t或s，x42是v、i或r，x43是t、k或n，x44是t、a、s或k，x45是s或n，x46是a、v或l，x47是l或m，x48是q或e，x49是l或m，x50是s或n，x51是s或r，x52是t或r，x53是a或s，x54是g、d、或e，x55是t或s，x56是t、k、或r，x57是s、q、w、或r，x58是-、d、或g，x59是y、p、或r，x60是f、s、g、n或t，x61是y、a、或h，x62是a、-、或v，x63是f或m，x64是y或v；x65是t、l或m；和seq id no 1161的vl区，其中x1是d或e；x2 q或v；x3是l、m；x4是a、s或d；x5是f、s或t；x6是a、s；x7是a、v；x8是p、v、l；x9是d、e；x10是a、v；x11是i、l；x12是t、s、n；x13是k、r；x14是a、s；x15是q、d、s、g或e；x16是s、d、n；x17是v、i或l；x18是-、k、y、s或h；x19是s、n；x20是f、l、m；x21是a、n、h；x22是k、q；x23是a、p、v；x24是k、r；x25是i、v；x26是y、g、w、n；x27是t、a；x28是s、k；x29是t、n、r；x30是l、r；x31是e、a、v、h；x32是s、e；x33是a、s、v、d；x34是d、e；x35是t、k；x36是s、r；x37是a、s、p；x38是f、v；x39是a、g；x40是t、v；x41是q、v；x42是q、n、h；x43是f、l、y、w、n、h；x44是a、d、y、s、n；x45是q、r、s、g、w、m；x46是f、y、t；x47是f、y、l；x48是v、l；并且x49是d或e(其中每个位置的所有aa都意味着在替代性“或”中，即使没有明确说明)。
107、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域结合msln并包含seq id no:1165的vh区，其中(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)x1是是e、q；x2是v、l、q，x3是e、q；x4是a、g、p；x5是e、g；x6是v、l；x7是v、k；x8是k、q；x9是g、s；x10是e、a、g、r；x11是s、t；x12是v、l；x13是r、s、k；x14是v、l；x15是s、t；x16是a、k、t；x17是a、v；x18是y、i、f；x19是s、t；x20是s、f；x21是s、t；x22是d、g、s；x23是y、g、a、f；x24是i、w、m；x25是g、s、v、t、h；x26是i、v；x27是a、p；x28是m、k、q；x29是g、c；x30是i、m、v、l；x31是a、g、s；x32是a、s、n、w、y、v；x33是y、s、n；x34是y、g、p、s；x35是d、h、s、n；x36是g、s；x37是e、g、s；x38是g、s、n、f、t、q；x39是s、k、w、d、i、-、t；x40是y、n；x41是a、n；x42是a、p、n、e、d、i、q；x43是d、a、s、k；x44是v、l、f；x45是k、q；x46是g、s；x47是v、f；x48是i、m；x49是s、t；x50是r、v；x51是n、t；x52是a、s；x53是i、k；x54是s、n；x55是s、t、q；x56是a、l、f；x57是y、s、f；x58是l、m；x59是e、k、q；x60是m、l；x61是s、n；x62是r、s；x63是v、l；x64是r、t；x65是a、s；x66是d、a、e；x67是r、k；x68是d、e、v、l；x69是e、r、g、p；x70是r、a、n、y；x71是g、s、y、v、h；x72是a、p、f、d、y；x73是r、g；x74是m、r、s、d；x75是e、g；x76是y、l；x77是y、f；x78是y、s、f；x79是a、g、s、t、h；x80是l、m、f；x81是y、i、v；并且x82是l、m、t；以及seq id no 1169的vl区(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)x1是e、s、d；x2是y、i、l；x3是e、-、v、t；x4是v、l、m；x5是p、s；x6是g、s；x7是s、t；x8是v、l；x9是a、v、l；x10是p、v；x11是e、q、d；x12是r、t；x13是a、v；x14是s、t；x15是i、l；x16是s、t；x17是a、s；x18是g、s；x19是e、q；x20是g、s、k；x21是i、v、l、f；x22是r、g、s；x23是d、s、-；x24是a、s、n、k、t；x25是y、wm；x26是v、l；x27是y、a；x28是k、q；x29是a、s、v；x30是r、v、k；x31是v、l；x32是a、g、q；x33是a、s；x34是s、t；x35是g、s、k、i、t；x36是r、l；x37是a、p、q；x38是s、t；x39是i、v；x40是e、s、d；x41是g、n；x42是n、t；x43是d、t；x44是a、f；x45是r、g、s；x46是l、t；x47是e、q；x48是a、p；x49是e、m；x50是e、f；x51是d、v、t；x52是a、q；x53是y、s、a、t；x54是g、e、y、h、q；x55是a、s；x56是s、t、f；x57是p、t；x58是r、a、l、f；x59是v、t；x60是p、c；x61是v、l；x62是e、t；x63是i、v；并且x64是l、k(其中每个位置的所有aa都意味着在替代性“或”中，即使没有明确说明)。
108、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域包含vh区，该vh区包含选自seq id no:77至79、86至88、95至97、103至105、111至113、119至121、127至129、135至137、143至145、151至153、159至161、168至170、177至179、185至187、194至196、203至205、212至214、221至223、230至232、238至240、334至336、356至358、365至367、376至378、385至387、和194、432和196的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，或如序列表格表6中一起披露的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的任何组合，优选86至88、194至196或1227至1229以及1237至1239。
109、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域包含vl区，该vl区包含选自seq id no:80至82、89至91、98至100、106至108、114至116、122至124、130至132、138至140、146至148、154至156、162至164、171至173、180至182、188至190、197至199、206至208、215至217、224至226、233至235、241至243、337至339、359至361、368至370、379至381、388至390的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，或如序列表格表6中一起披露的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的任何组合，优选89至91和197至199或1230至1232和1240 1242。
110、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域包含分别针对第一和第三结合结构域选自seq id no:83、92、101、109、117、125、133、141、149、157、165、174、183、191、200、209、218、227、236、244、340、362、371、382、391和433，优选433和92或1233+1235和1243+1245(呈fab的vh和ch1)的vh区。
111、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域包含分别针对第一和第三结合结构域选自seq id no:84、93、102、110、118、126、134、142、150、158、166、175、184、192、201、210、219、228、237、245、341、363、372、383、392，优选200和93或1234+1236和1244+1246(呈fab的vl和cl)的vl区。
112、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其中第一和/或第三(靶)结合结构域包含选自seq id no:85、94、193、202、211、220、229、364、384、393，优选94和202的通过单一氨基酸交换(e至i)而稳定性增加的vl区。
113、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供抗原结合分子，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的组合：seq id no:1259和1251、1247和1248、1249和1250、1254、1255和1253、1252、1257、1253和1256、和1254、1258、1253和1256。
114、在第二方面，在本发明的上下文中进一步设想提供一种多核苷酸，该多核苷酸编码本发明的抗原结合分子，优选地选自seq id no:1070至1072和1074。
115、在第三方面，在本发明的上下文中还设想提供一种载体，该载体包含本发明的多核苷酸。
116、在第四方面，在本发明的上下文中进一步设想提供一种宿主细胞，该宿主细胞用本发明的多核苷酸或载体转化或转染。
117、在第五方面，在本发明的上下文中还设想提供一种用于生产本发明的抗原结合分子的方法，所述方法包括在允许表达该抗原结合分子的条件下培养本发明的宿主细胞并且从培养物中回收所产生的抗原结合分子。
118、在第六方面，在本发明的上下文中进一步设想提供一种药物组合物，该药物组合物包含本发明的抗原结合分子或根据本发明的方法产生的抗原结合分子。
119、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想该药物组合物在约-20℃下稳定至少四周。
120、在本发明的上下文中进一步设想提供本发明的抗原结合分子或根据本发明的方法产生的抗原结合分子，用于在预防、治疗或缓解以下疾病中使用，该疾病选自增殖性疾病、肿瘤性疾病、癌症或免疫学障碍。
121、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想疾病优选是急性骨髓性白血病(aml)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、非小细胞肺癌(nsclc)、胰腺癌和结直肠癌(crc)]。在第七方面，在本发明的上下文中进一步设想提供用于治疗或缓解增殖性疾病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含至少一条多肽链的分子，其中该分子包含
122、(i.)第一结合结构域，其优选包含与第一靶细胞表面抗原(例如taa1)特异性结合的互补位，
123、(ii.)第二结合结构域，其优选包含与人(优选猕猴)cd3ε链的细胞外表位特异性结合的互补位，
124、(iii.)第三结合结构域，其优选包含与第二靶细胞表面抗原(例如taa2)特异性结合的互补位，和
125、(iv.)第四结合结构域，其优选包含与人(优选猕猴)cd3ε链的细胞外表位特异性结合的互补位，
126、其中该第一结合结构域和该第二结合结构域形成第一双特异性实体，该第三结合结构域和该第四结合结构域形成第二双特异性实体，并且
127、其中该分子包含具有至少约大于约5kda的分子量和/或具有超过50个氨基酸的长度的间隔物实体，其中该间隔物实体将该第一双特异性实体和该第二双特异性实体间隔开至少约(该第一双特异性实体和该第二双特异性实体的质心之间的距离)，并且该间隔物实体位于该第一双特异性实体和该第二双特异性实体之间。
128、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想提供通过提供本文所述形式的多链多靶向性双特异性抗原结合分子来寻址病理生理组织和一个或多个生理组织上显著共表达的疾病相关靶标的方法，其中该分子寻址(i.)在疾病相关组织和生理组织上均表达的靶标和(ii.)与疾病相关但不在(i.)下的生理组织上表达的另一靶标，其中该方法优选地避免在这样的靶标是msln的情况下形成腹内粘连和/或纤维化。
129、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想疾病优选是肿瘤性疾病、癌症或免疫学障碍，包括向有需要的受试者施用本发明的或根据本发明的方法产生的抗原结合分子的步骤，其中疾病优选是急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、胰腺癌和/或结直肠癌。
130、在所述方面内，在本发明的上下文中还设想taa1和taa2优选地选自epcam和msln、msln和epcam、msln和cdh3、cdh3和msln、flt3和cll1以及cll1和flt3。
131、在第八方面，在本发明的上下文中还设想提供一种试剂盒，该试剂盒包含本发明的抗原结合分子或根据本发明的方法产生的抗原结合分子、本发明的多核苷酸、本发明的载体、和/或本发明的宿主细胞。
1.一种包含至少两条多肽链的分子，其中该分子包含
2.根据权利要求1所述的分子，其是抗原结合分子，优选是双特异性抗原结合分子，更优选是多链多靶向性双特异性抗原结合分子。
3.根据权利要求2所述的抗原结合分子，其中当该间隔物是单链结构域时，这些结合结构域从氨基到羧基顺序的排列选自由以下组成的组：
4.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中当该间隔物是单链结构域时，这些结合结构域从氨基到羧基顺序的排列选自由以下组成的组：
5.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中当该间隔物是二聚化结构域时，这些结合结构域从氨基到羧基顺序的排列选自由以下组成的组：
6.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中当该间隔物是二聚化结构域时，这些结合结构域的排列处于氨基到羧基顺序并选自由以下组成的组：
7.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该间隔物实体是球状蛋白质，其中位于n-末端的第一个氨基酸和位于c-末端的最后一个氨基酸的cα原子之间的距离间隔至少优选至少更优选至少以便将该第一双特异性实体和该第二双特异性实体有效地间隔开优选至少
8.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中将该第一双特异性实体和该第二双特异性实体充分间隔开且是单链的所述间隔物实体选自由以下组成的组：泛素、β2微球蛋白、sand结构域、绿色荧光蛋白(gfp)、vhh抗体lama结构域、来自met受体的psi结构域、来自生腱蛋白的纤连蛋白iii型结构域、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、白介素-4、cd137l胞外域、白介素-2、来自人程序性细胞死亡1配体1(pdl1)的pd-1结合结构域、tim-3(as24-130)、minisog、程序性细胞死亡蛋白1(pd1)结构域、人血清白蛋白(hsa)或任何前述间隔物实体的衍生物、刚性接头的多聚体、和fc结构域或其二聚体或三聚体，每个fc结构域包含两个多肽单体，每个多肽单体包含铰链、ch2和ch3结构域、铰链以及另外的ch2和ch3结构域，其中所述两个多肽单体通过肽接头彼此融合，或其中这两个多肽单体通过非共价ch3-ch3相互作用和/或共价二硫键连接在一起形成异二聚体。
9.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中当为单链时，所述间隔物实体是至少一个fc结构域，优选地一个结构域或两个或三个共价连接的结构域，该结构域或这些结构域中的每一个从氨基到羧基顺序包含：
10.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该间隔物实体的所述多肽单体中的每一个具有与选自下组的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，该组由以下组成：seq id no:17-24，其中优选地所述多肽单体中的每一个具有选自seq id no:17-24的氨基酸序列。
11.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该间隔物中的ch2结构域包含结构域内半胱氨酸二硫桥。
12.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该间隔物实体包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：seq id no:13和15至16和25至34泛素(seq id no:1081)、β2微球蛋白(seq id no:1083)、sand结构域(seq id no:1084)、绿色荧光蛋白(gfp)(seq id no:1085)、vhh抗体lama结构域(seq id no:1086)、来自met受体的psi结构域(seqid no:1087)、来自生腱蛋白的纤连蛋白iii型结构域(seq id no:1088)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)(seq id no:1089)、白介素-4(seq id no:1090)、cd137l胞外域(seq id no:1091)、白介素-2(seq id no:1092)、来自人程序性细胞死亡1配体1(pdl1)的pd-1结合结构域(seq id no:1093)、tim-3(as24-130)(seq id no:1094)、minisog(seq idno:1095)、程序性细胞死亡蛋白1(pd1)结构域(seq id no:16)、人血清白蛋白(has，seq idno:15)或其具有至少90％优选95％或甚至98％序列同一性的氨基酸，优选scfc(seq idno:25)。
13.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该二聚化间隔物中第一肽链的第一肽单体是seq id no 35并且该二聚化间隔物中第二肽链的第二肽单体是seq idno 36，其中这两个肽单体优选地形成异二聚体。
14.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该抗原结合分子的特征在于
15.根据前述权利要求1至7中任一项所述的抗原结合分子，其中该抗原结合分子包含两条多肽链，其中
16.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该抗原结合分子，其中该第一、第二、第三和第四结合结构域各自以氨基到羧基的顺序包含vh结构域和vl结构域，其中每个结构域内的vh和vl通过肽接头连接，优选以下柔性接头，该柔性接头包含丝氨酸、谷氨酰胺和/或甘氨酸作为氨基酸结构单元，优选仅丝氨酸(ser，s)或谷氨酰胺(gln，q)和甘氨酸(gly，g)，更优选(g4s)n或(g4q)n，甚至更优选seq id no:1或3。
17.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该肽接头包含s(g4x)n和(g4x)n或由其组成，其中x选自由q、t、n、c、g、a、v、i、l和m组成的组，并且其中n是选自整数1至20的整数，优选其中n是1、2、3、4、5或6，优选其中x是q，其中优选该肽接头是(g4x)n，n是3，并且x是q。
18.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一结合结构域和该第二结合结构域以及该第三结合结构域和该第四结合结构域之间的肽接头优选是柔性接头，该柔性接头包含丝氨酸、谷氨酰胺和/或甘氨酸或谷氨酸、丙氨酸和赖氨酸作为氨基酸结构单元，优选选自由seq id no:1至4、6至12和1125组成的组。
19.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一结合结构域或该第二结合结构域与该间隔物之间的肽接头，和/或该第三结合结构域和该第四结合结构域与该间隔物之间的肽接头分别优选是富含小氨基酸和/或亲水性氨基酸、优选甘氨酸的短接头并且优选是seq id no:5。
20.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和该第二靶细胞表面抗原中的任一个选自由以下组成的组：cs1、bcma、cdh3、flt3、cd123、cd20、cd22、epcam、msln和cll1。
21.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和该第二靶细胞表面抗原不相同。
22.根据前述权利要求1至20中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和该第二靶细胞表面抗原相同。
23.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一结合结构域能够结合该第一靶细胞表面抗原并且同时该第三结合结构域能够结合该第二靶细胞表面抗原，优选其中该第一靶细胞表面抗原和该第二靶细胞表面抗原在同一靶细胞上。
24.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和该第二靶细胞表面抗原分别选自由以下组成的组：cs1和bcma、bcma和cs1、flt3和cd123、cd123和flt3、cd20和cd22、cd22和cd20、epcam和msln、msln和epcam、msln和cdh3、cdh3和msln、flt3和cll1、以及cll1和flt3。
25.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和/或该第二靶细胞表面抗原是人msln(选自seq id no:1181、1182和1183)，并且其中本发明的抗原结合分子的第一和/或第三结合结构域如本文所述通过鼠嵌合序列分析确定结合人msln表位簇e1(seq id no:1175，根据kabat的aa 296-346位置)，但优选不结合人msln表位簇e2(seq id no:1176，根据kabat的aa 247-384位置)、e3(seq id no:1177，根据kabat的aa 385-453位置)、e4(seq id no:1178，根据kabat的aa 454-501位置)和/或e5(seq idno:1179，根据kabat的aa502-545位置)。
26.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一靶细胞表面抗原和/或该第二靶细胞表面抗原是人cdh3(seq id no:1170)，并且其中根据权利要求1所述的抗原结合分子的第一和/或第三结合结构域结合人cdh3表位簇d2b(seq id no:1171，根据kabat的aa 253-290位置)、d2c(seq id no:1172，根据kabat的aa 291-327位置)、d3a(seqid no:1173，根据kabat的aa 328-363位置)和d4b(seq id no:1174，根据kabat的aa 476-511位置)，优选d4b(seq id no:1174，根据kabat的aa 476-511位置)，如本文所述通过鼠嵌合序列分析确定。
27.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域(cd3结合结构域)均具有(i.)特征在于低于由表面等离子体共振(spr)测量的约1.2x 10-8m的kd值的亲和力，或(ii.)特征在于由spr测量的约1.2x 10-8m的kd值的亲和力。
28.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域(cd3结合结构域)具有特征在于由spr测量的约1.0x 10-7至5.0x 10-6m，优选地由spr测量的约1.0至3.0x 10-6m、更优选约2.5x 10-6m的kd值的亲和力。
29.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域(cd3结合结构域)具有特征在于由spr测量的约1.0x 10-7至5.0x 10-6m，优选地由spr测量的约1.0至3.0x 10-6m、更优选约2.5x 10-6m的kd值的亲和力。
30.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域(cd3结合结构域)各自单独具有比一个包含根据seq id no 43的vh和根据seq id no 44的vl的cd3结合结构域低至少约10倍、优选至少约50倍或更优选至少约100倍的活性(即在单靶向性环境中，相比于双靶向性环境)。
31.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域包含vh区和vl区，该vh区包含选自seq id no 37至39、45至47、53至55、61至63、69至71、436至438、1126至1128、1136至1138、1142至1144、1148至1150、和1217至1219的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，该vl区包含选自seq id no 40至42、48至50、56至58、64至66、72至74、439至441、1129至1131、1139至1141、1145至1147、1151至1153、和1220至1222，优选61至63和64至66或1217至1219和1220至1222的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
32.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域包含选自seq id no 43、51、59、67、75、442、1132和1223，优选67或1223的vh区。
33.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域包含选自seq id no 44、52、60、68、76、443、1133和1224，优选68或1224的vl区。
34.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第二结合结构域和该第四结合结构域包含选自seq id no 43、51、59、67、75、442、1132和1223，优选67的vh区，和选自seq id no 44、52、60、68、76、443、1133和1224，优选68的vl区，其中当该vh区是1132且该vl区是1133时，该第二结合结构域和/或该第四结合结构域作为scfab结构域另外包含seqid no:1134的ch1结构域和seq id no:1135的clk结构域，并且其中该vh区和该vl区通过优选地选自seq id no 1、3和1125的接头彼此连接，或其中该第二结构域和该第四结构域的vh-ch1的vh的seq id no为seq id no 1223，该第二结构域和该第四结构域的vh-ch1的ch1的seq id no为seq id no 1224，该第二结构域和该第四结构域的vl-cl的vl的seq id no为seq id no 1225，并且该第二结构域和该第四结构域的vl-l的cl的seq id no为seq idno 1226。
35.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合cdh3并包含vh区，该vh区包含seq id no:1154作为cdr-h1，其中x1(“x”后面的数字表示序列表中n-到c-取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)是s或n，x2是y或s、x3是p或w，x4是i或m且x5是y、n或h；seq id no:1155作为cdr-h2，其中x1是k、v、n或r；x2是a、d、r、y、s、w或h；x3是y、s、p、g或t；x4是s、g或k；x5是a、v、d、k、g、或t；x6是a、v、d、k、s、g或h；x7是y、g、或e；x8是k、i、或n；x9是a、s、或n；x10是s、q或g；x11是s或k；x12是f或v；并且x13是k或q；以及seq id no:1156作为cdr-h3，其中x1是f或q；x2是r、k、s或w；x3是g或d；x4是y、p或r；x5是r、s、g、n或t；x6是y、a或h；x7是f、l或m；x8是a或v；x9是y或v；并且其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合cdh3并包含vl区，该vl区包含seq id no:1158作为cdr-l1，其中x1是k或r，x2是a或s；x3是q、d、s、g或e；x4是s、d或n；x5是v、l或i；x6是k、y、s、或h；x7是s或n；x8是f、l或m；并且x9是a、n或h；seq id no:1159作为cdr-l2，其中x1是y、g、w、或n；x2是t或a；x3是s或k；x4是t、n或r；x5是l或r；x6是e、a、v或h；并且x7是s或e；和seq id no:1160作为cdr-l3，其中x1是q或v；x2是q、n或h；x3是f、l、y、w、n、或h；x4是a、d、y、s或n；x5是q、r、s、g、w或m；x6是t、y或f；并且x7是f、y或l。
36.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合msln并包含vh区，该vh区包含seq id no:1162作为cdr-h1，其中x1(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)是s、g或d；x2是y、a、g或f；x3是i、w、或m；并且x4是v、s、g、t或h；seq id no:1163作为cdr-h2，其中x1是a、s、n、w、y或v；x2是y、s或n；x3是y、g、p或s；x4是d、h、s、或n；x5是g或s；x6是e、g或s；x7是g、s、n、f、t或q；x8是s、w、k、d、i或t；x9是y或n；x10是a或n；x11是a、p、n、d、e、i或q；x12是d、a、s或k；x13是v、l、或f；x14是k或q；并且x15是g或s；以及seq id no:1164作为cdr-h3，其中x1是d、e或v；x2是r、g或e；x3是y、a或n；x4是s、y、v、或h；x5是a、p、f、y或h；x6是r或s；x7是e或g；x8是y或l；x9是r、y或l；x10是y或g；x11是d或y；x12是r、y或f；x13是m、s、f、d或y；x14是a、g、s或t；x15是l、m或f；并且x16是y、i或v；并且其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合msln并包含vl区，该vl区包含seq id no:1166作为cdr-l1，其中x1是a或s；x2是g或s；x3是e或q；x4是g、s或k；x5是i、l、v或f；x6是r、g或s；x7是d、s、n或t；x8是a、s、k或t；x9是y或w；x10是v或l；并且x11是y或a；seq id no 1167作为cdr-l2，其中x1是a、g或q；x2是a或s；x3是s或t；x4是g、s、k、i或t；x5是r或l；x6是a、p或q；并且x7是s或t；和seq id no 1168作为cdr-l3，其中x1是a或q；x2是y、s、a或t；x3是g、e、y、h或q；x4是a或s；x5是s、t或f；x6是p或t；x7是r、a、l或f；并且x8是v或t。
37.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合cdh3并包含seq id no:1157的vh区，其中(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)x1是q或e；x2是v、l；x3是q、e；x4是a或g；x5是g或e；x6是v或l；x7是k或v，x8是k或q，x9是a或g，x10是v或l，x11是k或r，x12是v或l，x13是a或k，x14是y或f，x15是t或s，x16是t或s，x17是s或n，x18是y或s，x19是p或w，x20是i或m，x21是y、n或h，x22是t或a，x23是q或k，x24是v或m，x25是s或g，x26是k、v、n或r，x27是a、d、r、y、s、w或h，x28是y、s、p、gr或t，x29是s、k、或g，x30是a、v、d、k或t；x31是a、d、k、s、g或h；x32是y、g、或e，x33是k、i、或n，x34是a、s、或n，x35是s、q、或g，x36是s或k，x37是f或v，x38是q或k，x39是f或v，x40是i或m，x41是t或s，x42是v、i或r，x43是t、k或n，x44是t、a、s或k，x45是s或n，x46是a、v或l，x47是l或m，x48是q或e，x49是l或m，x50是s或n，x51是s或r，x52是t或r，x53是a或s，x54是g、d或e；x55是t或s，x56是t、k、或r，x57是s、q、w、或r，x58是d、或g，x59是y、p、或r；x60是f、s、g、n或t，x61是y、a、或h，x62是a、-、或v，x63是f或m，x64是y或v；x65是t、l或m；和seq id no 1161的vl区，其中x1是d或e；x2 q或v；x3是l、m；x4是a、s或d；x5是f、s或t；x6是a或s；x7是a或v；x8是p、v或l；x9是d或e；x10是a或v；x11是i或l；x12是t、s、或n；x13是k或r；x14是a、s；或x15是q、d、s、g或e；x16是s、d或n；x17是v、i或l；x18是k、y、s或h；x19是s或n；x20是f、l或m；x21是a、n或h；x22是k或q；x23是a、p或v；x24是k或r；x25是i或v；x26是y、g、w或n；x27是t或a；x28是s或k；x29是t、n或r；x30是l或r；x31是e、a、v或h；x32是s或e；x33是a、s、v或d；x34是d或e；x35是t或k；x36是s或r；x37是a、s或p；x38是f或v；x39是a、g；x40是t或v；x41是q或v；x42是q、n、h；x43是f、l、y、w、n或h；x44是a、d、y、s或n；x45是q、r、s、g、w或m；x46是f、y或t；x47是f、y或l；x48是v或l；并且x49是d或e(其中每个位置的所有aa都优选意味着以替代性“或”的方式，即使没有明确说明)。
38.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域结合msln并包含seq id no:1165的vh区，其中(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)x1是e或q；x2是v、l或q；x3是e或q；x4是a、g或p；x5是e或g；x6是v或l；x7是v或k；x8是k或q；x9是g或s；x10是e、a、g或r；x11是s或t；x12是v或l；x13是r、s或k；x14是v或l；x15是s或t；x16是a、k或t；x17是a或v；x18是y、i或f；x19是s或t；x20是s或f；x21是s或t；x22是d、g或s；x23是y、g、a或f；x24是i、w或m；x25是g、s、v、t或h；x26是i或v；x27是a或p；x28是m、k或q；x29是g或c；x30是i、m、v或l；x31是a、g或s；x32是a、s、n、w、y或v；x33是y、s或n；x34是y、g、p或s；x35是d、h、s或n；x36是g或s；x37是e、g或s；x38是g、s、n、f、t或q；x39是s、k、w、d、i或t；x40是y或n；x41是a或n；x42是a、p、n、e、d、i或q；x43是d、a、s或k；x44是v、l或f；x45是k、q；x46是g或s；x47是v或f；x48是i或m；x49是s或t；x50是r或v；x51是n或t；x52是a或s；x53是i或k；x54是s或n；x55是s、t或q；x56是a、l或f；x57是y、s或f；x58是l或m；x59是e、k或q；x60是m或l；x61是s或n；x62是r或s；x63是v或l；x64是r或t；x65是a或s；x66是d、a或e；x67是r或k；x68是d、e、v或l；x69是e、r、g或p；x70是r、a、n或y；x71是g、s、y、v或h；x72是a、p、f、d或y；x73是r或g；x74是m、r、s或d；x75是e或g；x76是y或l；x77是y或f；x78是y、s或f；x79是a、g、s、t或h；x80是l、m或f；x81是y、i或v；并且x82是l、m或t；以及seq id no 1169的vl区(“x”后面的数字表示序列表中n到c取向的各个氨基酸序列中“x”的数字顺序)x1是e、s或d；x2是y、i或l；x3是e、v或t；x4是v、l或m；x5是p或s；x6是g或s；x7是s或t；x8是v或l；x9是a、v或l；x10是p或v；x11是e、q或d；x12是r或t；x13是a或v；x14是s或t；x15是i或l；x16是s或t；x17是a或s；x18是g或s；x19是e或q；x20是g、s或k；x21是i、v、l或f；x22是r、g或s；x23是d或s；x24是a、s、n、k或t；x25是y、w或m；x26是v或l；x27是y或a；x28是k或q；x29是a、s或v；x30是r、v或k；x31是v或l；x32是a、g或q；x33是a或s；x34是s或t；x35是g、s、k、i或t；x36是r或l；x37是a、p或q；x38是s或t；x39是i或v；x40是e、s或d；x41是g或n；x42是n或t；x43是d或t；x44是a或f；x45是r、g或s；x46是l或t；x47是e或q；x48是a或p；x49是e或m；x50是e或f；x51是d、v或t；x52是a或q；x53是y、s、a或t；x54是g、e、y、h或q；x55是a或s；x56是s、t或f；x57是p或t；x58是r、a、l或f；x59是v或t；x60是p或c；x61是v或l；x62是e或t；x63是i或v；并且x64是l或k(其中每个位置的所有aa都优选意味着以替代性“或”的方式，即使没有明确说明)。
39.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域包含vh区，该vh区包含选自以下的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3：seq id no:77至79、86至88、95至97、103至105、111至113、119至121、127至129、135至137、143至145、151至153、159至161、168至170、177至179、185至187、194至196、203至205、212至214、221至223、230至232、238至240、334至336、356至358、365至367、376至378、385至387和194、432和196、446至448、454至456、462至464、470至472、478至480、486至488、494至496、502至504、510至512、518至520、526至528、534至536、542至544、550至552、558至560、566至568、574至576、582至584、590至592、598至600、606至608、614至616、622至624、630至632、638至640、646至648、654至656、662至664、670至672、678至680、686至688、694至696、702至704、710至712、718至720、726至728、734至736、742至744、750至752、758至760、766至768、774至776、782至784、790至792、798至800、806至808、814至816、822至826、830至832、838至840、846至848、854至856、862至864、870至872、878至880、886至888、894至896、902至904、910至912、918至920、926至928、934至936、942至944、950至952、958至960、966至968、974至976、982至984、990至992、998至1000、1006至1008、1014至1016、1022至1024、1030至1032、1038至1040、1046至1048、1054至1056、和1062至1064，或优选地如序列表格表6中一起披露的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的任何组合，对于该第一结合结构域和该第三结合结构域优选86至88以及194、432和196，分别地，对于该第一结合结构域更优选194、432和196，对于该第三结合结构域更优选86至88，或对于该第一结合结构域和该第三结合结构域更优选1227至1229和1237至1239。
40.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域包含vl区，该vl区包含选自以下的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3：seq id no:80至82、89至91、98至100、106至108、114至116、122至124、130至132、138至140、146至148、154至156、162至164、171至173、180至182、188至190、197至199、206至208、215至217、224至226、233至235、241至243、337至339、359至361、368至370、379至381、388至390、449至451、457至459、465至467、473至475、481至483、489至491、497至499、505至507、513至515、521至523、529至531、537至539、545至547、553至555、561至563、569至571、577至579、585至587、593至595、601至603、609至611、617至619、625至627、633至635、641至643、649至651、657至659、665至667、673至675、681至683、689至691、697至699、705至707、713至715、721至723、729至731、737至739、745至747、753至755、761至763、769至771、777至779、785至787、793至795、801至803、809至811、817至819、825至829、833至835、841至843、849至851、857至859、865至867、873至875、881至883、889至891、897至899、905至907、913至915、921至923、929至931、937至939、945至947、953至955、961至963、969至971、977至979、985至987、993至995、1001至1003、1009至1011、1017至1019、1025至1027、1033至1035、1041至1043、1049至1051、1057至1059、和1065至1067，或优选地如序列表格表6中一起披露的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的任何组合，对于该第一结合结构域和该第三结合结构域优选89至91和197至199，分别地，对于该第一结合结构域更优选197至199，对于该第三结合结构域更优选89至91，或对于该第一结合结构域和该第三结合结构域更优选1230至1232和1240 1242。
41.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域包含选自以下的vh区：seq id no:83、92、101、109、117、125、133、141、149、157、165、174、183、191、200、209、218、227、236、244、340、362、371、382、391、和433、452、460、468、476、484、492、500、508、516、524、532、540、548、556、564、572、580、588、596、604、612、620、628、636、644、652、660、668、676、684、692、700、708、716、724、732、740、748、756、764、772、780、788、796、804、812、820、828、836、844、852、860、868、876、884、892、900、908、916、924、932、940、948、956、964、972、980、988、996、1004、1012、1020、1028、1036、1044、1052、1060、和1068，或优选地如序列表格表52中一起披露的任何vh，对于该第一结合结构域和该第三结合结构域优选433和92，分别地，对于该第一结合结构域更优选433，对于该第三结合结构域更优选92，或对于该第一结合结构域和该第三结合结构域更优选1233+1235和1243+1245(呈fab的vh和ch1)。
42.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或该第三(靶)结合结构域包含选自以下的vl区：seq id no:84、93、102、110、118、126、134、142、150、158、166、175、184、192、201、210、219、228、237、245、341、363、372、383、392、453、461、469、477、485、493、501、509、517、525、533、541、549、557、565、573、581、589、597、605、613、621、629、637、645、653、661、669、677、685、693、701、709、717、725、733、741、749、757、765、773、781、789、797、805、813、821、829、837、845、853、861、869、877、885、893、901、909、917、925、933、941、949、957、965、973、981、989、997、1005、1013、1021、1029、1037、1045、1053、1061、和1069，或优选地如序列表格表52中一起披露的任何vl，对于该第一结合结构域和该第三结合结构域优选200和93，分别地，对于该第一结合结构域更优选200，对于该第三结合结构域更优选93，或对于该第一结合结构域和该第三结合结构域更优选1234+1236和1244+1246(呈fab的vl和cl)。
43.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其中该第一和/或第三(靶)结合结构域包含选自seq id no:85、94、193、202、211、220、229、364、384、393，优选94和202的通过单一氨基酸交换(e至i)而稳定性增加的vl区。
44.根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子，其包含选自由seq id no:1259和1251、1247和1248、1249和1250、1254、1255和1253、1252、1257、1253和1256、和1254、1258、1253和1256组成的组的氨基酸序列的组合，或如序列表格表6中披露的任何其他全长多靶向性双特异性抗原结合分子。
45.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1至44中任一项所述的抗原结合分子。
46.一种载体，其包含根据权利要求45所述的多核苷酸。
47.一种宿主细胞，其经根据权利要求45所述的多核苷酸或根据权利要求46所述的载体转化或转染。
48.一种用于产生根据权利要求1至44中任一项所述的抗原结合分子的方法，所述方法包括在允许该抗原结合分子表达的条件下培养本发明的宿主细胞并从培养物中回收产生的抗原结合分子。
49.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至38中任一项所述的或根据权利要求48所述的方法产生的抗原结合分子。
50.根据权利要求49所述的药物组合物，其在约-20℃稳定至少四周。
51.根据权利要求1至44所述的或根据权利要求48的方法产生的抗原结合分子，用于在选自增殖性疾病、肿瘤性疾病、癌症或免疫学障碍的疾病的预防、治疗或缓解中使用。
52.根据权利要求51所述的抗原结合分子，其中该疾病优选是急性骨髓性白血病(aml)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、非小细胞肺癌(nsclc)、胰腺癌和结直肠癌(crc)。
53.一种用于治疗或缓解增殖性疾病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含至少一条多肽链的分子，其中该分子包含
54.根据权利要求53所述的方法，其中该方法包括通过提供本文所述形式的多靶向性双特异性抗原结合分子来寻址在病理生理组织和一个或多个生理组织上显著共表达的疾病相关靶标，其中该分子寻址(i.)在疾病相关组织和生理组织上均表达的靶标和(ii.)与疾病相关但不在(i.)下的生理组织上表达的另一靶标，其中该方法优选地避免在这样的靶标是msln的情况下形成腹内粘连和/或纤维化。
55.根据权利要求53所述的方法，其中该疾病是肿瘤性疾病、癌症或免疫学障碍。
56.根据权利要求55所述的方法，其中该疾病优选是急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、胰腺癌和/或结直肠癌。
57.根据权利要求47所述的方法，其中该taa1和taa2优选地选自epcam和msln、msln和epcam、msln和cdh3、cdh3和msln、flt3和cll1以及cll1和flt3。
58.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至44中任一项所述的或根据权利要求48所述的方法产生的抗原结合分子、根据权利要求45所述的多核苷酸、根据权利要求46所述的载体和/或根据权利要求47所述的宿主细胞。
