本发明涉及畜禽药物制剂，具体涉及一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液的制备方法与应用。
背景技术：
1、奶牛蹄病是国内外奶牛养殖过程中发病率较高的疾病之一，是导致奶牛被迫淘汰的重要病因。蹄病不仅影响奶牛的正常步行，而且还降低奶牛的泌乳量和繁殖力，使奶牛经济效益下降，导致巨大的经济损失。引起奶牛蹄病的主要因素包括环境因素，例如牛舍排水、粪污清理不及时；地面因素，如出现石子、尖锐物等；修蹄因素以及其它营养因素等。奶牛蹄病的主要类型包括腐蹄病、蹄疣、趾间皮炎、蹄底溃疡等。不同蹄病治疗时手段略有差异。
2、在奶牛蹄病防控时，包括修蹄管理，例如定期修蹄，对病牛及时进行治疗；还包括蹄浴管理，一般的蹄浴槽设置长度为3-5m，深度大约为15cm，液面高度大于10cm，从而使得牛蹄完全没入蹄浴液中；在饲养过程中注重牛舍卫生，保证及时清理粪便，降低蹄部受污染几率；另外，还可以改善牛舍养殖中地面平整度，可铺设相对较软的橡胶垫；还可在饲养过程中注重奶牛营养均衡，降低疾病发生概率。
3、在上述预防措施中，奶牛蹄浴是治疗和防控奶牛蹄病的最有效方法，蹄浴过程中的蹄浴液通过对牛蹄进行清洁和消毒来起作用，该方法不仅对早期的蹄疣有治疗作用，还能对晚期蹄疣有控制复发的作用，同时可以有效减少趾间皮炎和腐蹄病的发病率，对常见的蹄病类型均有较好的改善作用。
4、现有已知的蹄浴液的主要成分一般包括使用高渗透性，提高蹄部硬度的硫酸铜，广泛使用的福尔马林、通常与硫酸铜配合使用的硫酸锌，石灰粉等多种化学成分，还可使用百里香酚、中草药提取物，植物提取成分等天然成分；蹄浴液组成多种，成分差异大。以上成分使用过程中存在诸多问题，例如蹄浴效果不明确，通常会存在环境污染的问题，比如常用蹄浴液组成中福尔马林、硫酸铜等化学成分使用会造成养殖场有害排放增加，对环境造成压力，并且药物成分的使用不可避免会产生耐药性问题；化学成分的使用还存在很高的刺激性，施用于动物后会对动物蹄部产生刺激，因此，寻求更安全，刺激性更小的替代品是蹄浴液关注的重点。
5、在现有蹄浴液的开发中，人们通常也会专注于开发对环境无污染，具有安全、有效、无残留的蹄浴液。现有技术中存在使用安全无毒副作用的蹄浴液的研究，例如公开号为cn110507748a的相关研究中提供了一种奶牛蹄浴液及其制备方法，原料包括中药提取液，抑菌剂，防冻剂，水；所述中药提取液由以下重量份的原料制成：青黛，乳香，没药，红花，苦参，黄柏，芦荟等，其通过使用大量的中药成分来实现相应效果。公开号为cn110248670a的文献公开了一种将包括细菌混合物的组合物用于制备预防和改善患有涉及足部寄生虫或细菌感染的疾病的有蹄类动物的病状的药物的应用，所述组合物包括：至少一种芽孢杆菌属细菌菌株，尤其至少一种枯草芽孢杆菌， 以及至少一种乳酸细菌菌株，尤其至少一种乳酸乳球菌或至少一种戊糖片球菌，将上述细菌组合或与消毒剂复配治疗有蹄类动物的相关疾病，如通过喷洒抗菌治疗跛行等症状。
6、综上，已有蹄浴液的研发中虽然会关注使用的安全性和效果，但是研究并不深入，尤其是未见针对奶牛蹄病针对性的研发菌种复配的相关报道，基于此，本发明提供一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液的制备方法与应用。
技术实现思路
1、基于现有技术的问题，本发明提供了一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液及其制备方法。基于奶牛蹄病发病的主要致病菌，通过特定枯草芽孢杆菌和戊糖乳杆菌的复配，协同发挥抗菌功效，辅料的选择能够进一步提升蹄浴液的性能。本发明的蹄浴液能显著降低奶牛蹄病的发病率，提高奶牛养殖的经济效益，具有广阔的市场前景。
2、本发明的第一方面，提供了一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液由复合乳酸菌、辅料和水制备得到；
3、复合乳酸菌为：枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)lb-kc和戊糖乳杆菌（lactobacillus pentosus）mrs-rgj；
4、其中枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)lb-kc保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25562；
5、戊糖乳杆菌（lactobacillus pentosus）mrs-rgj保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.25561；
6、辅料为：海藻糖、卡拉胶、聚乙烯吡咯烷酮；
7、以及水。
8、在复合乳酸菌选择时，首先，根据已有研究可知，引起奶牛蹄病发生的主要病原菌根据蹄病的类型差异有所不同，例如奶牛腐蹄病主要是由坏死梭杆菌和产黑色素拟杆菌引起的，另外还包括节瘤拟杆菌和坏死厌气丝杆菌，其中节瘤拟杆菌能产生蛋白酶，消化角质，使蹄的表面及基层易受侵害，从而造成腐蹄病发生。对于另一种疣性皮炎，普遍认为其致病菌是密螺旋体和坏死梭杆菌，另外还有可能包括拟杆菌属、支原体属、弯曲杆菌属等致病菌种；蹄底溃疡病的主要致病菌包括化脓性棒状杆菌和坏死厌气丝杆菌引起。不同类型的蹄病主要致病菌存在差异，针对上述致病菌，发明人选取蹄病的主要致病菌坏死梭杆菌、化脓性棒状杆菌和节瘤拟杆菌作为病原菌考察对象，通过菌种的种类和用量的筛选，确定选取枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj进行复配。
9、在原料用量选择方面，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液中，按重量分数计：复合乳酸菌为0.5-1.1份、海藻糖6-10份、卡拉胶10-15份、聚乙烯吡咯烷酮12-20份和水200-300份制备得到，复合乳酸菌菌剂中枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj的有效活菌数之比为2-4：1。
10、优选的，按重量分数计：所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液中复合乳酸菌为0.8份、海藻糖8份、卡拉胶13份、聚乙烯吡咯烷酮16份和水250份制备得到，复合乳酸菌菌剂中枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj的有效活菌数之比为3：1。
11、进一步优选的，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液的ph为6.5-7.2。
12、本发明复合乳酸菌奶牛蹄浴液中的ph控制在适宜菌种功效发挥的范围内，确保菌种活性的发挥。
13、本发明的另一方面，提供一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:将复合乳酸菌、辅料和水进行混合，搅拌3-5分钟，得到所述奶牛蹄浴液。
14、本发明的制备方法简单，将原料充分混匀后使用即可，工业化使用便捷。
15、本发明的第三方面，还提供了一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液在防治奶牛蹄病中的应用。
16、本发明的复合乳酸菌奶牛蹄浴液具备良好的防治奶牛蹄病的效果，疗效确切。
17、作为优选的方案，所述奶牛蹄病包括腐蹄病、疣性皮炎、蹄底溃疡中的一种或多种。
18、进一步优选的，所述奶牛蹄病主要是由坏死梭杆菌、化脓性棒状杆菌和节瘤拟杆菌引起的。
19、与现有技术相比，本发明所采用的技术方案至少能够实现如下有益效果之一：
20、（1）本发明的复合乳酸菌蹄浴液，以抑菌效果突出的乳酸菌为活性成分，相对于现有技术中的化学成分具有安全性高、疗效突出的优势，填补在奶牛蹄浴液制备时无功效确切的复合益生菌组合的空白，本发明的产品具有广阔的市场前景。
21、（2）发明人通过筛选研究确定两种乳酸菌，分别为枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj；在前期研究的基础上确定其生物学特征和生理学形式，并进一步从奶牛蹄病的主要致病菌入手，通过实验筛选研究，明确将以上两种菌进行复配制备得到的复合乳酸菌在抑制奶牛蹄病相关菌种方面具有协同功效，抑菌性能突出。
22、（3）在辅料选择方面，发明人基于乳酸菌的生长特性，为了充分发挥活性，调整辅料的组成。加入海藻糖能够维持乳酸菌细胞结构及功能的稳定性，卡拉胶作为稳定剂，能够提高蹄浴液的粘结性，促进菌种在蹄浴过程中的附着和吸收，提升效果；而聚乙烯吡咯烷酮则能促进成膜，与卡拉胶配合，提升复合乳酸菌抑菌性能的持久性发挥。
23、（4）本发明的复合乳酸菌蹄浴液在防治奶牛蹄病方面效果突出，两种菌之间具备明确的协同增效作用。实验研究结果表明，枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj在抑制奶牛蹄病主要致病菌方面存在协同功效；产业应用效果表明，使用本发明条件下的奶牛蹄浴液对患病奶牛治疗时，治疗有效率最高达到95%，疗效确切，具备广阔的市场应用前景。
1.一种复合乳酸菌奶牛蹄浴液，其特征在于，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液由复合乳酸菌、辅料和水制备得到；
2.根据权利要求1所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液，其特征在于，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液中，按重量分数计：复合乳酸菌为0.5-1.1份、海藻糖6-10份、卡拉胶10-15份、聚乙烯吡咯烷酮12-20份和水200-300份制备得到，复合乳酸菌菌剂中枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj的有效活菌数之比为2-4：1。
3.根据权利要求2所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液，其特征在于，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液中，按重量分数计：复合乳酸菌为0.8份、海藻糖8份、卡拉胶13份、聚乙烯吡咯烷酮16份和水250份制备得到，复合乳酸菌菌剂中枯草芽孢杆菌lb-kc和戊糖乳杆菌mrs-rgj的有效活菌数之比为3：1。
4.权利要求3所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液，其特征在于，所述复合乳酸菌奶牛蹄浴液的ph为6.5-7.2。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:将复合乳酸菌、辅料和水进行混合，搅拌3-5分钟，得到所述奶牛蹄浴液。
6.一种权利要求1-4任一项所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液在防治奶牛蹄病中的应用。
7.根据权利要求6所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液在防治奶牛蹄病中的应用，其特征在于，所述奶牛蹄病包括腐蹄病、疣性皮炎、蹄底溃疡中的一种或多种。
8.根据权利要求6所述的复合乳酸菌奶牛蹄浴液在防治奶牛蹄病中的应用，其特征在于，所述奶牛蹄病主要是由坏死梭杆菌、化脓性棒状杆菌和节瘤拟杆菌引起的。
