本发明属于生物医药，具体涉及一种稳转trpa1离子通道的细胞株及其构建方法和在可降解材料迁出物神经疼痛筛查中的应用。
背景技术：
1、trpa1(transient receptor potential a1)，又称为anktm1，是一种存在于各种组织和器官中的非选择性阳离子通道（story gm, a trp-like channel expressed innociceptive neurons, is activated by cold temperatures. cell. 2003），它主要表达于感觉神经元中，如肺、皮肤和大脑中的初级感觉神经元，以及肽能神经元，尤其是哺乳动物背根神经节(drg)、三叉神经节(tg)、结节神经节(ng)和颈静脉神经节中的神经元。此外，trpa1也存在于一些非神经元细胞和组织中，包括血管内皮细胞和软骨细胞。trpa1的激活与疼痛调节以及炎症物质的调节密切相关。trpa1还与某些非神经元区域的超敏和过度兴奋有关，并在哮喘、神经病理性疼痛、慢性瘙痒、偏头痛、胃肠运动障碍、焦虑和认知功能障碍的病理生理学中发挥重要作用。
2、普通塑料在发生环境泄漏后有巨大的环境污染问题，通过可降解塑料在自然环境中的可降解性，可以将该类环境污染的影响尽可能降低。但不可避免的，可降解材料在生产过程中会使用到增塑剂、扩链剂等，相关物质的迁出是否会引起神经疼痛目前不得而知。现有的疼痛筛查主要基于动物方法进行，且鲜有方法针对可降解材料中的各种可迁出成分进行神经疼痛的筛查。
3、美国专利us20150052624a1，通过在大鼠中编辑与疼痛相关的基因，从而构建大鼠疼痛模型，建模耗时长且模型之间个体差异较大，无法很好的满足对可降解材料中的各种可迁出成分进行神经疼痛的筛查这一目的。因此，目前迫切需要一种能够快速准确进行神经疼痛筛查的体外替代测试方案。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本发明提供了一种稳转trpa1离子通道的细胞株及其构建方法和在可降解材料迁出物神经疼痛筛查中的应用。
2、一方面，本发明提供了一种基于trpa1离子通道的用于可降解材料迁出物神经疼痛筛查的稳转细胞株模型。
3、具体地，所述的trpa1离子通道的编码基因通过慢病毒转染整合到宿主细胞染色体上实现稳定过表达。
4、优选地，所述trpa1为人源序列，相对分子质量约为127kda。
5、进一步优选地，所述trpa1序列ncbi编号为：np_015628.2。
6、在本发明的某些具体实施例中，所述trpa1的编码序列ncbi编号为：nm_007332.3。
7、具体地，所述慢病毒的表达载体包括但不限于：plvx、plenti cas9或pcslenti。
8、在本发明的某些具体实施例中，上述慢病毒表达载体购买自和元生物。
9、在本发明的某些具体实施例中，所述慢病毒的表达载体为pcslenti。
10、具体地，所述目标细胞包括但不限于：hek293、sh-sy5y或hacat。
11、优选地，所述目标细胞为hek293。
12、另一方面，本发明提供了上述稳转细胞株模型的制备方法。
13、具体地，所述稳转细胞株模型的构建方法包括以下步骤：
14、（1）细胞培养；
15、（2）质粒载体构建；
16、（3）病毒包被、收毒；
17、（4）慢病毒滴度的测试；
18、（5）稳转株筛选；
19、（6）稳转株功能验证。
20、具体地，步骤（2）中，所述质粒载体包括trpa1编码序列。
21、优选地，所述trpa1编码序列为人源序列，ncbi编号为：nm_007332.3。
22、具体地，所述质粒载体同时带有egfp标签及flag标签。
23、具体地，步骤（4）中，所述慢病毒滴度测试方法包括：荧光计数法、qpcr、rt-pcr、流式细胞术或酶联免疫吸附试验试剂盒。
24、优选地，所述慢病毒滴度测试方法为：rt-pcr。
25、具体地，步骤（5）中，所述稳转株筛选为药物筛选，所述药物包括：嘌呤霉素。
26、具体地，步骤（6）中，所述稳转株功能验证包括以下步骤：
27、1）提取膜蛋白，检测表达量；
28、2）进行苯基三氯化锡和/或三丁基氯化锡细胞毒性筛查。
29、进一步具体地，步骤1）中，检测表达量的方法包括：免疫印迹试验、酶联免疫吸附试验、流式细胞术或免疫组织化学法。
30、在本发明的模型具体实施例中，步骤1）中，检测表达量的方法为免疫印迹试验。
31、再一方面，本发明提供了上述稳转细胞株模型在可降解材料迁出物神经疼痛筛查中的应用。
32、与现有技术相比，本发明具有以下优点：
33、本方法首次构建了一种基于trpa1离子通道的用于可降解材料迁出物神经疼痛筛查的稳转细胞株模型，不仅能够通过体外测试进行神经疼痛筛查，还能够对绿色环保可降解材料的生物安全性进行进一步的评估。
1.一种基于trpa1离子通道的用于可降解材料迁出物神经疼痛筛查的稳转细胞株模型，其特征在于，所述的trpa1离子通道的编码基因通过慢病毒转染整合到宿主细胞染色体上实现稳定过表达。
2.根据权利要求1所述的稳转细胞株模型，其特征在于，所述慢病毒的表达载体包括：plvx、plenti cas9或pcslenti。
3.根据权利要求1所述的稳转细胞株模型，其特征在于，所述宿主细胞包括：hek293、sh-sy5y或hacat。
4.权利要求1-3任一项所述的稳转细胞株模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，所述质粒载体同时带有egfp标签及flag标签。
6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）中，所述trpa1编码序列为人源序列，ncbi编号为：nm_007332.3。
7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤（4）中，所述慢病毒滴度测试方法包括：荧光计数法、qpcr、rt-pcr、流式细胞术或酶联免疫吸附试验试剂盒。
8.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤（5）中，所述稳转株筛选为药物筛选，所述药物包括：嘌呤霉素。
9.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤（6）中，所述稳转株功能验证包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的构建方法，其特征在于，步骤1）中，检测表达量的方法包括：免疫印迹试验、酶联免疫吸附试验、流式细胞术或免疫组织化学法。
11.权利要求1-3任一项所述的稳转细胞株模型在可降解材料迁出物神经疼痛筛查中的应用。
