本发明涉及生物，尤其涉及鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的ssr引物及方法。
背景技术：
1、菠菜为苋科藜亚科菠菜属，是一种以绿叶与嫩茎为主要食用部位的一、二年生草本植物。
2、菠菜按性别分为以下几种类型:全雌株、全雄株、雌雄同株、营养雄株。因此在田间生产的过程中去杂及其重要，在杂交种生产的过程中要及时去除全雄株，在授粉结束后也要及时拔掉营养雄株。但是由于菠菜性别分化易受外界环境因素影响存在着去杂不彻底的情况，授粉结束后营养雄株也存在拔除不彻底的情况，会对生产的杂交种纯度有一定程度的影响。传统种子纯度鉴定一般是依据表型在田间进行，需要作物生长到一定阶段对其某一个或是多个性状进行观测进而判断种子纯度，此方法存在周期长、工作量大、受环境因素影响大、经验因素影响大等缺陷。
3、威菠67菠菜是无锡普威农业科技有限公司自主培育的的一个新品种类型，该品种芽率好，纯度高、长势整齐，直立性好、叶片黑绿油亮，长园叶近似牛舌状，长势中等，从播种到上市35－38天，特耐抽苔，易捆绑，成品率高，高抗白粉病和霜霉病，耐底温性好。该品种之前一直采用形态学鉴定种子纯度，随着播种面积和种子需求量的增加，急需探索出一种快捷、准确且不易受外界因素影响的纯度鉴定方法。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本发明提供的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的ssr引物及方法，以克服现有技术中一直采用形态学鉴定种子纯度导致的受外界环境、种植时节、种植技术和经验等因素影响较大并且工作量大、周期长等问题，从而在一两个小时以内就能够快速准确的鉴定出威菠67菠菜杂交种的种子纯度，具有广阔的应用前景。
2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
3、本发明提供的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的ssr引物，包括上游引物sp190-f和下游引物sp190-r，其中，
4、上游引物sp190-f为：gagcaccggaataacgat；
5、下游引物sp190-r为：ggggccagattgtatctcg。
6、一种鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法，包括：
7、(1)提取待测样品威菠67菠菜杂交种基因组dna；
8、(2)利用权利要求1所述引物对所述步骤(1)威菠67菠菜杂交种基因组dna进行pcr扩增；
9、(3)采用8％的聚丙烯酰胺凝胶对步骤(2)的pcr扩增产物进行电泳分离，进行银染显色；
10、(4)统计结果，计算威菠67菠菜杂交种纯度，种子纯度(％)＝(总检测种子粒数-非杂交种数-外来杂种数)/总检测种子粒数×100％；
11、其中所述步骤(2)采用10μl的反应体系：2×taq master mix 5μl，10μm的所述上游引物和所述下游引物各0.5μl，基因组dna 1.5μl，0.1μm ph＝8.0的tris-hcl 2.5μl；
12、pcr反应程序为：
13、第一阶段：95℃预变性5min；
14、第二阶段：94℃变性45s；58℃退火1min；72℃延伸1min；将此阶段进行33个循环；
15、第三阶段：72℃延伸7min；
16、第四阶段：4℃保温。
17、上述的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法中，所述步骤(1)具体如下：取半片子叶置于2ml的离心管中；加入1颗直径3mm的钢珠，同时加入300μl dna提取液；置于研磨机上在50hz的频率下，研磨15s；10000转每分钟离心1min，取出备用。
18、上述的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法中，所述步骤(3)中采用8％的聚丙烯酰胺凝胶对扩增产物电泳检测；取1.5μl扩增产物加入每个点样孔内，进行电泳，1.5h后停止电泳；小心取出凝胶，倒入100ml蒸馏水中溶有1.2g agno3的染色液中摇晃3min；将染色液倒出，加入少量蒸馏水快速漂洗，再倒入显色液，摇晃至显现出条带为止，用蒸馏水漂洗；其中显色液为15gnaoh、15ml甲醛加入到1000ml蒸馏水内的混合液。
19、上述的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法中，所述步骤(4)中计算威菠67菠菜杂交种纯度，将步骤(3)得到的凝胶放置于白色灯箱上，拍照统计结果，比较威菠67菠菜杂交种和父母本带型特征，同时有父母本两条带型的为威菠67杂交种，仅有父母本其中一条带型的记为非杂交种，出现其他带型的为外来杂种。
20、上述技术方案具有如下优点或者有益效果：
21、本发明提供的一种鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的ssr引物及方法，通过筛选并使用在威菠67菠菜杂交种中能同时展现出父本和母本的特异性条带、具有较强的特异性的引物，从而克服了采用形态学鉴定种子纯度导致的受外界环境、种植时节、种植技术和经验等因素影响较大并且工作量大、周期长等问题，从而在一两个小时以内就能够快速准确的鉴定出威菠67菠菜杂交种的种子纯度，具有快速、稳定、操作简单、成本低廉、不受环境影响等优点，可以高效的检测威菠67菠菜杂交种的种子纯度，具有广阔的应用前景。
1.一种鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的ssr引物，其特征在于，包括上游引物sp190-f和下游引物sp190-r，其中，
2.一种鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法，其特征在于，包括：
3.如权利要求2所述的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体如下：
4.如权利要求2所述的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法，其特征在于，所述步骤(3)中采用8％的聚丙烯酰胺凝胶对扩增产物电泳检测；取1.5μl扩增产物加入每个点样孔内，进行电泳，1.5h后停止电泳；
5.如权利要求2所述的鉴定威菠67菠菜杂交种纯度的方法，其特征在于，所述步骤(4)中计算威菠67菠菜杂交种纯度，将步骤(3)得到的凝胶放置于白色灯箱上，拍照统计结果，比较威菠67菠菜杂交种和父母本带型特征，同时有父母本两条带型的为威菠67杂交种，仅有父母本其中一条带型的记为非杂交种，出现其他带型的为外来杂种。
