本发明属于生物，具体涉及一种靶向b细胞bcma的纳米抗体及其应用。
背景技术：
1、b细胞是免疫系统的重要淋巴细胞，b细胞和浆细胞恶性肿瘤、自身免疫性疾病、淋巴瘤和白血病是常见的b细胞相关疾病，这些疾病的发病机制与b细胞过度活化产生大量自身抗体相关。因此，以b淋巴细胞表面分子为靶点的b淋巴靶向治疗近年来得到了广泛的关注和研究。b淋巴细胞清除策略是利用抗体药物靶向结合b细胞亚群的特定抗原，通过抗体依赖介导的细胞毒性作用或补体，或通过靶向b细胞存活需要的细胞因子，如b细胞激活因子（b-cell activation factor, baff）诱导b细胞凋亡，达到清除b细胞的目的。b细胞清除主要的靶点是cd20，cd19和baff，用于治疗自身免疫疾病包括系统性红斑狼疮，多发性硬化症。
2、bcma（b-cell maturation antigen）是tnf受体家族的一员，全称为b细胞成熟抗原，也称cd269。在管理b细胞的成熟与b细胞分化成浆细胞的过程中扮演着重要的角色，是仅在成熟b细胞表面存在，由185个氨基酸残基组成的非糖基化的iii型整合膜蛋白。bcma结合肿瘤坏死因子（配体）超家族成员13b，并导致nf-kb和mapk8/jnk活化。该受体还与各种肿瘤坏死因子受体相关因子traf家族成员结合，接到细胞存活和增殖的信号。在多发性骨髓瘤中bcma的表达增加，促增殖信号增强，最终癌化。因此在多发性骨髓瘤细胞上bcma的表达水平显著高于健康的浆细胞。涉及表达bcma的浆细胞的另一种b细胞病症是系统性红斑狼疮 (sle)，也称为狼疮。sle是一种全身性自身免疫性疾病，其可影响身体的任何部位，并用攻击身体自身的细胞和组织，导致慢性炎症和组织损伤的免疫系统表示。目前靶向bcma的疗法主要包括抗体药物偶联（antibody-drug conjugate, adc），双特异性抗体（bispecificantibody, bsab）和嵌合抗原受体t细胞免疫疗法（chimeric antigenreceptor t-cells, car-t，能以非主要组织相容性复合体依赖性方式特异识别肿瘤抗原而发挥强大的抗肿瘤免疫效应。
3、然而研究表明，长期服用rituximab，可能导致免疫系统的暂时性抑制，增加感染的风险，部分患者可能对单抗或其成分产生过敏反应，表现为皮疹、呼吸困难等症状，并且导致血细胞（如白细胞、红细胞和血小板）计数降低，这可能会影响患者的健康和恢复能力。尽管以bcma为靶点的car-t细胞治疗对多发性骨髓瘤表现出持久的缓解率，但是治疗后经常复发和出现耐药性。另外，car-t细胞在体内的增殖能力较差，对肿瘤细胞的杀伤效率较低，客观上加大car-t细胞的使用剂量，容易造成较强的毒副作用，如炎症因子风暴和中枢神经系统毒性。但治疗过程中出现的crs（细胞因子释放综合征），脱靶效应等不良反应仍是亟待解决的问题，而利用抗体靶向治疗，分子量太大药物不能穿透血管，到达病灶，治疗效果也没有达到特别好的疗效。同时，相关技术的单抗抗体上的fc片段与其他细胞由非特异性结合，导致药物不能特异性靶向目的细胞，疗效减弱，副作用大。开发新型的靶向b细胞的抗体或者b细胞耗竭疗法，具有重要的意义。
4、纳米抗体是从骆驼科动物（如骆驼、羊驼和骆马）中提取的一种特殊类型的抗体，其大小仅为常规抗体的十分之一。这使得它们能够更容易地穿透组织，到达常规抗体无法到达的地方。纳米抗体具有极高的热稳定性和化学稳定性，使其在各种恶劣环境下都能保持活性。由于纳米抗体的结构简单，因此可以很容易地进行基因工程改造，以产生具有特定功能的抗体。此外，纳米抗体也可以通过细菌、酵母等微生物进行大规模生产，大大降低了生产成本。纳米抗体可以同时识别多个抗原表位，这使得它们在诊断和治疗多种疾病方面具有很大的潜力。纳米抗体由于其独特的结构和性质，使其在靶向药物输送、免疫诊断、肿瘤治疗等方面显示出高效的性能。纳米抗体已经被广泛应用于医学、生物技术、农业等领域，包括疾病的早期诊断、治疗，以及作为研究工具等。开发靶向b细胞的纳米抗体，对于b细胞相关疾病的治疗和研究，具有至关重要的意义。
5、血液净化是一项至关重要的医疗技术，它通过从血液中去除有害物质来治疗多种疾病和中毒状况。通过使用特定的吸附剂，如免疫吸附剂，可以针对性地吸附特定的致病因子，例如自身抗体或炎症介质。免疫吸附是一种技术，它利用特定的抗原、抗体或具有独特理化亲和力的配体与吸附介质结合，形成选择性或特异性的吸附柱。当与药物治疗结合使用时，免疫吸附能显著提高患者对药物的反应性，从而增强药物效果，减少副作用，缩短治疗时间，并降低疾病复发的风险。通过将靶向b细胞的抗体将与固相载体相结合，可以特异性结合人血液中的b细胞，尤其是活化的浆细胞，从而清除产生病理性抗体的b细胞。该方法吸附效率高，吸附性能稳定，靶向清除b细胞，非特异性吸附量低，特异性好，在临床治疗上安全性能好，经济效益高，可能成为b细胞相关疾病治疗的新途径。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种靶向b细胞bcma的纳米抗体及其应用。
2、本发明所采取的技术方案是：
3、本发明的第一个方面，提供：
4、一种靶向b细胞bcma的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，所述纳米抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
5、组合1，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.：1～seq id no.：3所示；
6、组合2，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.：4～seq id no.：6所示；
7、组合3，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.：7～seq id no.：9所示；
8、组合4，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.：10～seq id no.：12所示。
9、在一些纳米抗体的实例中，其氨基酸序列为：
10、bh5：
11、qvqlvesggglvveggslrlsctasgftfdnvhmswfrqapgkeregvvwiypsdssiyrftisrdnakttvylqmedlkpedtgiyycaargpmfdyrq fdywgqgtqvtvss
12、bc6：
13、qvqlvesggglvqagdslrlscaasgltfddhywswfrqapgkeregvvtvsysggdtfrftissdnakttvtlqmdnlkptdtaiyycaarghslfdvwgqgtqvtvss
14、ba5：
15、qvqlvesggglvqaggslrlscaasgftfdgyglswfrqapgkeregvvlidsggsstfrftissdnakttvylqmenlkpedtaiyycaakehgvmdswgqgtqvtvss；
16、bd7：
17、qvqlvesggglvqaggslrlscvasgrtfddygvhwfrqppgkeregvvyidssggtyyrftisrdnakttvylqmnslkpedtaiyycaardshgvmfdywgqgtrvtvss。
18、上述序列中，下划线标记的部分为cdr区，未标记的部分为fr区。
19、在一些纳米抗体的实例中，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的纳米抗体。
20、通过引入抗体fc区，可以实现纳米抗体的二聚化。fc区的引入，还可以利用fc的亲和性，简化抗体的纯化操作。fc的引入，还有利于延长抗体的半衰期，提高抗体在体内的稳定性。抗体fc区没有特殊要求，优选为人源抗体的fc区。所述抗体fc区包括人源igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igd、igm、ige的fc段或其变体、改造体。
21、本发明的第二个方面，提供：
22、一种二价或多价纳米抗体，包括至少一条本发明第一个方面所述的纳米抗体。
23、二价或多价纳米抗体由单条纳米抗体通过接头元件连接而成。接头元件优选为柔性肽，包括但不限于(g4s)n，n为1或以上的整数，优选的，n为1～4的整数。二价或多价纳米抗体中的纳米抗体可以相同，也可以不同。
24、本发明的第三个方面，提供：
25、本发明第一个方面和本发明第二个方面所述的纳米抗体的应用，所述应用包括但不限于：
26、制备b细胞免疫吸附剂；
27、制备b细胞检测试剂；
28、制备靶向bcma免疫偶联物；
29、制备治疗b细胞相关疾病的抗体药物。
30、在一些应用的实例中，所述免疫偶联物由纳米抗体和连接在纳米抗体上的偶联物构成，如抗体与小分子组成的adc药物。
31、在一些应用的实例中，所述偶联物为药物。
32、在一些应用的实例中，所述b细胞相关疾病选自肿瘤及自身免疫性疾病。
33、在一些应用的实例中，肿瘤包括但不限于多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、胶质母细胞瘤；自身免疫性疾病包括但不限于红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、 特发性炎症性肌炎、系统性硬化症、原发性干燥综合征。
34、本发明的第四个方面，提供：
35、一种免疫吸附剂，包括固相载体，所述固相载体上偶联有本发明第一个方面和本发明第二个方面所述的纳米抗体。
36、在一些免疫吸附剂的实例中，所述固相载体选自壳聚糖、琼脂糖、纤维素、葡聚糖、树脂、纤维素中的至少一种。
37、本发明的第五个方面，提供：
38、一种血液净化器械，包括本发明第四个方面所述的免疫吸附剂。
39、本发明的第六个方面，提供：
40、编码本发明第一个方面或本发明第二个方面所述纳米抗体的基因。
41、本发明的第七个方面，提供：
42、一种表达载体，其表达本发明第一个方面或本发明第二个方面所述的纳米抗体，或含有本发明第六个方面所述的基因。
43、本发明的有益效果是：
44、本发明提供的纳米抗体可以特异性结合人血液中的b细胞，尤其是活化的浆细胞，从而清除产生病理性抗体的b细胞。本发明提供的纳米抗体，与传统抗体相比，具有更小的分子量，稳定性强，成本低，易于表达且表达量高，适用于大规模生产。
45、本发明将纳米抗体将与固相载体相结合，可以靶向清除血液中的b细胞，在较短时间内减少病人血液中b细胞数量，降低抗体水平，从而改善生活质量，减少并发症，为那些对传统治疗无效或不耐受的患者提供了新的治疗选择。
1.一种靶向b细胞bcma的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，其特征在于，所述纳米抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列选自以下序列中的一条：
3.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的纳米抗体。
4.一种二价或多价纳米抗体，其特征在于，包括至少一条权利要求1～3任一项所述的纳米抗体。
5.权利要求1～4任一项所述的纳米抗体的应用，其特征在于，所述应用包括：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述偶联物为药物，所述b细胞相关疾病选自肿瘤及自身免疫性疾病。
7.一种免疫吸附剂，包括固相载体，其特征在于，所述固相载体上偶联有权利要求1～4任一项所述的纳米抗体，优选的，所述固相载体选自壳聚糖、琼脂糖、纤维素、葡聚糖、树脂、纤维素中的至少一种。
8.一种血液净化器械，其特征在于，包括权利要求7所述的免疫吸附剂。
9.编码权利要求1～4任一项所述纳米抗体的基因。
10.一种表达载体，其特征在于，其表达权利要求1～4任一项所述的纳米抗体，或含有权利要求9所述的基因。
