本发明属于采后病害生物防治，具体涉及一种深红沙雷氏菌用于梨果采后青霉病控制及贮藏保鲜的方法。
背景技术：
1、梨果是世界性水果，它作为优良的滋补佳果，有百果之宗的称号，但梨果在采后贮藏运输期间，由于病原微生物的侵染，导致其腐烂变质，极大地降低了梨果商业价值，造成巨大的经济损失。扩展青霉(penicillium expansum)是引起梨果采后青霉病的主要病原菌，不仅会引起果实腐烂变质，而且其分泌的展青霉素(pat)具有致癌、致畸、致突变作用，危害食用者的健康。因此，有必要研究一种安全有效的手段来控制梨果采后青霉病的发生。
2、目前控制果蔬采后病害的方法主要有物理方法、化学方法以及生物防治方法。物理方法包括热处理、冷藏、气调贮藏等，可不同程度地抑制病原菌的活性与毒素积累；但是对设备要求较高工业化难度大，在实际应用上存在较大的局限性。化学方法通常是采用化学杀菌剂来控制果蔬采后病害，是目前最为常见的一种防治方法，该方法成本低，见效快且操作简单，但其长期使用会使病原菌产生耐药性，引起环境污染。生物防治是利用病原菌的拮抗微生物来防治果蔬病害，相比于物理方法、化学方法，具有安全、环保等优点。但是目前利用拮抗微生物防治果蔬病害多面临效果不佳的问题。而且，利用拮抗细菌防治梨果采后病害的研究也鲜有报道。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷与不足，本发明提供一株细菌——深红沙雷氏菌(serratiarubidaea)，系本实验室分离、纯化，菌株保藏编号为cctcc no：m 20241377，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(cctcc)；保藏地址：中国.武汉，武汉大学；保藏日期：2024年06月26日；建议的分类名为：深红沙雷氏菌(serratia rubidaea)b11。
2、本发明中的深红沙雷氏菌是自行筛选鉴定得到的，目前没有在梨果采后病害防治上的应用，通过研究发现，其拮抗效力强，该细菌可以有效控制梨果采后青霉病和自然腐烂的发生，降低腐烂率，减少采后病害造成的损失；并且对梨果品质没有显著的不良影响，同时能够减缓梨果贮藏过程中的品质劣变，从而达到贮藏保鲜的作用，为其在采后保鲜的应用上提供理论基础。
3、为实现以上目的，本发明提供方案如下：
4、本发明所提供的深红沙雷氏菌系本实验室分离、纯化，目前保藏在中国典型培养物保藏中心(cctcc)，菌株保藏编号为cctcc no：m 20241377。
5、本发明提供的深红沙雷氏菌用于梨果采后病害控制的用途，按照下述步骤进行：
6、(1)首先将深红沙雷氏菌接种在lb培养基中进行第一次活化培养，得到活化液；然后，吸取活化液转接入新的lb培养基中，进行第二次活化，得到细菌培养液，经离心后得到菌泥，用无菌生理盐水洗涤后，配制成深红沙雷氏菌菌悬液，浓度为1×106～1×109cells/ml，待用；
7、(2)选取无病害、无机械损伤、色泽大小均匀的梨果，进行消毒处理，然后用流动清水冲洗，清洗后的梨果放入已消毒的塑料筐中晾干；在晾干后的梨果赤道部位形成统一大小和深度的伤口，每个伤口处加入步骤(1)制备的深红沙雷氏菌菌悬液，静置一段时间后接种扩展青霉孢子悬浮液，自然晾干后放入已消毒的塑料筐，并用保鲜膜将其密封，放置于恒温恒湿培养箱中，实现深红沙雷氏菌对梨果采后青霉病的控制；
8、或者选取无病害、无机械损伤、色泽均一、大小相近的梨果，不经任何消毒处理，保持梨果的自然状况，在梨果表面均匀喷洒步骤(1)中制备的深红沙雷氏菌菌悬液，自然晾干后，即可实现梨果采后病害防治及贮藏保鲜的用途。
9、优选的，步骤(1)中所述的lb培养基(以1l计)为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水定容至1000ml，自然ph，115℃灭菌20min。
10、优选的，步骤(1)中第一次活化培养和第二次活化培养的培养条件均为：37℃培养16～18h；离心的条件为：4℃，8000rpm，时间10～15min。
11、优选的，步骤(1)中活化液转接的接种量为1-2％(v/v)；所述的深红沙雷氏菌浓度为1×108-1×109cfu/ml。
12、优选的，步骤(2)中消毒处理的操作为：将梨果浸入含0.2％次氯酸钠溶液的水中消毒2-4min；塑料筐的消毒为清水清洗干净后晾干，再用75％酒精均匀喷洒，得到消毒消毒的塑料筐。
13、优选的，步骤(2)中打孔的孔径为5mm，深度为4mm。
14、优选的，步骤(2)中每个伤口处加入的细菌菌悬液与扩展青霉孢子悬浮液的体积比为1:1；所述的扩展青霉孢子悬浮液的浓度为1×105spores/ml；所述静置一段时间为2h。
15、优选的，步骤(2)中恒温恒湿培养箱的温度为20-25℃，相对湿度90％。
16、优选的，步骤(2)中所述在梨果表面均匀喷洒深红沙雷氏菌菌悬液，具体用量为每平方厘米喷洒0.02～0.05ml的菌悬液。
17、与现有技术相比，本发明的优点：
18、(1)本发明所使用的深红沙雷氏菌为本实验室分离、纯化，经小鼠急性毒性试验验证为无毒类细菌，对人体安全无危害。
19、(2)本发明所使用的深红沙雷氏菌可以有效控制梨果采后青霉病和自然腐烂，用量少且效果显著，同时对梨果采后贮藏过程中的品质无不良影响，如对硬度、可溶性固形物和抗坏血酸含量等均无不良影响，并且还可以减缓在贮藏过程中的品质劣变，从而控制番茄品质下降，有利于梨果的贮藏保鲜。
20、(3)本发明使用的深红沙雷氏菌目前尚未有在梨果采后病害防治上应用的报道，具有独创性；其具备良好的生防效果，可以代替或减少使用化学杀菌剂进行梨果采后病害的控制，同时减少化学杀菌剂对消费者健康及环境的危害，具有绿色环保的优点以及良好的市场应用前景。
1.一种生防深红沙雷氏菌，其特征在于，所述生防深红沙雷氏菌为深红沙雷氏菌(serratia rubidaea)b11，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no：m20241377。
2.根据权利要求1所述的生防深红沙雷氏菌用于梨果采后病害控制及贮藏保鲜的用途。
3.根据权利要求2所述的生防深红沙雷氏菌用于梨果采后病害控制及贮藏保鲜的用途，其特征在于，具体步骤如下：
4.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的lb培养基，以1l计为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水定容至1000ml，ph自然，115℃灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中所述离心的条件均为：4℃，8000rpm，时间10～15min；所述第一次活化培养和第二次活化培养的条件均为：温度37℃，时间16～18h。
6.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(1)中活化液转接的接种量为1-2％(v/v)；所述的深红沙雷氏菌浓度为1×108-1×109cfu/ml。
7.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中消毒处理的操作为：将梨果浸入含0.2％次氯酸钠溶液的水中消毒2-4min；塑料筐的消毒为清水清洗干净后晾干，再用75％酒精均匀喷洒，得到消毒的塑料筐。
8.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中所述打孔的孔径为5mm，深度为4mm；每个伤口处加入深红沙雷氏菌菌悬液和扩展青霉孢子悬浮液均为30μl；所述静置一段时间为2h；所述扩展青霉孢子悬浮液浓度为1×105cfu/ml。
9.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中恒温恒湿培养箱的温度为20-25℃，相对湿度90％。
10.根据权利要求1所述的一种深红沙雷氏菌防治梨果采后病害及贮藏保鲜的方法，其特征在于，步骤(2)中所述在梨果表面均匀喷洒深红沙雷氏菌菌悬液，具体用量为每平方厘米喷洒0.02～0.05ml的菌悬液。
