本发明属于微生物的,具体涉及短双歧杆菌bx-18菌在调节肠道菌群稳态,缓解炎症性肠病症状中的应用。
背景技术:
1、炎症性肠病( inflammatory bowel disease,ibd) 包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc) 和克罗恩病( crohn’s disease,cd)。目前炎症性肠病还没有确定的病因,主流观点认为其与微生物群紊乱,肠道免疫功能失调密切相关。研究发现 炎症性肠病的时空和地理分布似乎都与社会的工业化和城市化平行。
2、肠道菌群失调指宿主和肠道菌群间平衡丧失导致其组成和功能发生变化,是炎症性肠病发病机理的潜在相关机制及主要特征,其特点为: 共生缺失,微生物群落改变,细菌多样性减少。如不加以控制,炎症可能会向癌症方向发展。已有研究结果显示,与正常人相比炎症性肠病患者肠道中厚壁菌及拟杆菌丰度显著下降;而变形杆菌,真菌等致病菌丰度明显增加。目前调节肠道菌群的方式主要包括抗生素药物,粪菌移植和益生菌制剂三种方法,但由于抗生素存在无差别灭杀肠道微生物且易诱导耐药性,而粪菌移植存在供体难觅,质量参差以及技术难度较大等问题,益生菌似乎成为了未来治疗或缓解炎症性肠病的“最优解”。益生菌是通过定殖在人体内,改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。其种类繁多,较常见的如双歧杆菌、乳杆菌等。益生菌改善炎症性肠病症状的作用机制主要包括:改善肠道菌群失调,拮抗肠道致病菌,加强肠黏膜屏障,改善肠道过度免疫应答状态,产生有益代谢物质的保护作用,减少中性粒细胞浸润有效缓解结肠炎症。
技术实现思路
1、本申请的目的之一在于提供一株具有调节肠道菌群稳态,缓解炎症性肠病症状的短双歧杆菌及其应用。该菌株于2018年分离自湖北省恩施市健康百岁老人肠道,具有较好的胃肠道消化液耐受能力。
2、本申请的目的之二在于提供的短双歧杆菌bx-18在改善和缓解炎症性肠病症状上的应用;
3、进一步的,所述短双歧杆菌bx-18在制备食品、保健品或药品中的应用。
4、本申请的第一方面,提供一株短双歧杆菌(bifidobacterium breve)菌株,命名为:bx-18,所述短双歧杆菌bx-18保藏于中国微生物菌种保藏管理中心,保藏编号:cgmccno. 28446。
5、本发明所述菌株采样于健康百岁老人粪便中,将粪便样品震荡混匀,取1ml于含有0.05% l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基中,37℃厌氧培养48小时后,接种环挑取单菌落划线于含有0.05% l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基中,37℃厌氧培养48h后,挑取白色菌落反复接种筛选,直至得到均一的单个菌落,命名为bx-18。
6、短双歧杆菌经革兰氏染色为阳性,显微镜下呈短杆状,电镜下呈弯曲、短杆状;在含有0.05% l-半胱氨酸盐的mrs液体培养基中呈均匀浑浊生长,久置菌体呈白色沉淀。所述短双歧杆菌bx-18,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心。,保藏号为cgmcc no.28446;分类名称为短双歧杆菌( bifidobacterium breve)。
7、本申请所述的短双歧杆菌bx-18,具有如下生物学特性:革兰氏阳性菌,无鞭毛、不运动,不形成芽孢,专性厌氧;多形态杆菌,其菌落光滑且边缘完整,呈乳白色,闪光并有柔软质地。
8、本发明提供一种上述双歧杆菌的筛选,其特征在于包括以下步骤:
9、(1)乳酸菌筛选
10、收集粪便样品振荡混匀后,取粪便样品1ml,将其涂布到含有0.05% l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基上进行培养;培养一段时间后,挑取单菌落进一步使用含有0.05% l-半胱氨酸盐的mrs固体培养基进行划线分离纯化,纯化后再依次进行革兰氏染色镜检实验,符合双歧杆菌鉴定条件的菌株,用甘油保藏储存在-80℃的环境下备用;
11、(2)菌种鉴定
12、采用细菌dna提取试剂盒提取分离到的菌株基因组dna,并对提取的dna进行 16srdna序列的pcr扩增,所得pcr产物纯化后进行测序,测序结果进行blast比对,从genbank中找到了相似菌株16s rrna的基因序列,将菌株16s rrna的基因序列进行blast比对,最终鉴定结果确定该菌株为短双歧杆菌。
13、所述短双歧杆菌菌株bx-18,具有较好的耐酸耐胆盐特性,在ph2.5的人工胃液中消化3小时存活率为65.97%,随即在人工肠液中继续消化8h,存活率为55.75%,能够以活的状态进入人体肠道。
14、本发明还提供了上述方案所述的菌剂的制备方法,包括以下步骤:将上述方案所述的短双歧杆菌bx-18接种于含有0.05% l-半胱氨酸盐的mrs培养基,于37℃ 厌氧条件下进行培养,得到菌剂。
15、本申请的第二方面提供了第一方面所述的短双歧杆菌bx-18菌剂或者所述的制备方法制备得到的菌剂在改善炎症性肠病症状中的应用效果。
16、所述菌剂中,短双歧杆菌的活菌数不低于1×106 cfu/ml或1×106 cfu/g。
17、可选的,所述产品为短双歧杆菌乳粉或发酵剂。
18、可选的,所述产品为固体饮料、乳饮料或压片糖果。
19、可选的,所述产品包括功能性药品或保健品。
20、可选的,所述产品为使用含有所述发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。
21、由以上技术方案可知,本申请提供了一株用于缓解炎症性肠病症状的短双歧杆菌,所述短双歧杆菌对胃肠消化液有良好的耐受性,能够以活得状态进入肠道并定植。短双歧杆菌bx-18通过调节体重变化率,肠道菌群组成及多样性等途径缓解炎症性肠病症状。通过所述短双歧杆菌在食品、益生菌固体饮料、压片糖果、功能性药物辅助材料等领域的应用,以调节炎症性肠病患者菌群紊乱,改善疾病症状进行有效干预。
1.一株短双歧杆菌bx-18,其特征在于,所述短双歧杆菌bx-18的保藏号为cgmccno.28446,保藏地址为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心。
2.根据权利要求1所述的短双歧杆菌bx-18,其特征在于,所述短双歧杆菌菌株bx-18的16s rrna的序列如seq id no.1所示。
3.含有权利要求1或2所述的短双歧杆菌bx-18菌株的菌剂。
4.含有权利要求1或2所述的短双歧杆菌bx-18菌株的菌剂的制备方法,其特征在于,采用培养基厌氧条件下培养。
5.含有权利要求1或2所述的短双歧杆菌bx-18或者权利要求3所述的菌剂或者权利要求4所述的制备方法制备得到的菌剂在制备改善炎症性肠病症状的产品中的应用。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述产品包括食品、保健品、药品。
