本公开涉及化妆品原料性能筛选，具体涉及一种利用3d黑素皮肤模型筛选原料美白功效的方法。
背景技术：
1、近年来，美白类化妆品受到越来越多东方女性的青睐。在西方国家，美白产品还被应用于无规律色素过度沉着的预防和治疗中，如老年斑和雀斑等。因此，众多化妆品公司在改变皮肤色素沉着方面开展大量的研究，进行高效美白产品的开发工作。作为抵御紫外线辐射的物理屏障，黑色素对皮肤具有关键的光保护功能，然而，黑色素过度生成会导致皮肤出现色斑、肤色不均、暗沉等问题，影响人们的皮肤美观和自信。因此，改善色素过度沉着、美白肌肤是很多消费者的急切需求。
2、美白类功效性护肤品的开发中，对其活性原料的美白功效进行评估是配方设计前期的重要步骤之一。随着美白原料及配方的持续研发投入，应建立令人信服的功效评价方法。体外重建人体皮肤模型已广泛用于皮肤刺激、皮肤致敏和皮肤光毒性等研究中，而体外构建含黑色素细胞的皮肤模型可用于美白化妆品功效评估。
3、目前，细胞层面用于美白评估的模型主要是小鼠黑色素瘤b16细胞，由于其具有多次传代、生长快以及对培养要求低等优点，成为筛选美白活性成分的首选细胞，但b16细胞与人体黑素细胞始终存在差异，并且经过几代培养后，其黑色素产生能力会降低，这就导致筛选过程中可能会出现漏检和误检等问题。
4、3d人造皮肤模型因为其组织结构和生理功能与正常皮肤组织十分相似，而成为良好的皮肤替代模型，并且在近年来被广泛应用于化妆品原料及成品功效评估。其中，3d黑素皮肤模型将正常人的表皮细胞与黑素细胞共培养，采用气液面培养方式构建而成，具有类似正常人体表皮组织结构，有助于提高筛选具有美白活性原料的准确性。
5、cn115501156a中公开了一种具有美白舒缓功效的化妆品原料组合物及其评价体系，采用3d皮肤模型功效评价模块，用于对含原料组合物的化妆品成品进行功效评价。但该方案仅从表观层面来分析原料的美白功效，没有从与黑色素相关的基因层面进行综合评价，也没有建立一个详细的评分系统，筛选结果的准确性不够高。
技术实现思路
1、基于此，本公开的目的是从多层面评估原料的美白功效，提高原料美白功效筛选结果的准确性。
2、为实现上述目的，本公开提供以下技术方案：
3、一种利用3d黑素皮肤模型筛选原料美白功效的方法，包括以下步骤：
4、s1.选用3d黑素皮肤模型，分别设置空白对照组、阳性对照组、阴性对照组和样品组；
5、s2.对所述阳性对照组和所述样品组进行uvb辐照，向所述阴性对照组添加曲酸并进行uvb辐照，所述空白对照组在培养期间不进行处理且避光；
6、s3.辐照结束后，向所述样品组添加待检测的原料样品，继续培养；
7、s4.培养结束后，分别检测所述样品组、所述空白对照组、所述阳性对照组和所述阴性对照组的皮肤表观亮度、黑色素含量、mitf基因表达量以及tyr基因表达量；
8、s5.根据步骤s4中的检测结果判断所述原料样品的美白功效。
9、优选地，在步骤s5中，分别计算所述样品组、所述空白对照组和所述阴性对照组与所述阳性对照组的皮肤表观亮度、黑色素含量、mitf基因表达量、tyr基因表达量的比值；
10、用graphpad prism作图，结果表示为mean±sd；各组间比较采用one-way anova统计分析，所有的统计分析均为双尾；其中
11、p<0.05认为具有显著差异，说明受试物具有一定美白作用，评分为0.3；
12、p<0.01认为具有非常显著差异，说明受试物具有显著美白作用，评分为0.5；
13、p<0.001认为具有极其显著差异，说明受试物具有极其显著美白作用，评分为0.7；
14、p<0.0001认为具有极其显著差异，说明受试物具有极其显著美白作用，评分为1.0；
15、汇总四个检测指标的评分，由此判断所述样品组中的所述原料样品的美白功效强弱。
16、更优选地，将所述皮肤表观亮度和所述黑色素含量作为宏观指标，将所述mitf基因表达量和所述tyr基因表达量作为微观指标，所述样品组至少有一个所述宏观指标和至少有一个所述微观指标的评分大于等于0.3时，判定所述样品组中的原料样品具有美白效果。
17、优选地，在步骤s2中，辐照强度为0.2～0.4mw/cm2，辐照温度为28℃，辐照剂量为50～70mj/cm2。
18、更优选地，辐照天数为所述辐照剂量与所述辐照强度的比值。
19、优选地，所述原料样品的添加量为0.5～2ml，所述原料样品的浓度为5mg/ml～10mg/ml。
20、更优选地，连续4天重复步骤s3。
21、优选地，还包括对所述原料样品的溶解度进行评估的步骤：
22、水中溶解度≥1000μg/ml的所述原料样品直接溶于培养基；
23、水中溶解度<1000μg/ml的所述原料样品用二甲基亚砜溶剂溶解。
24、优选地，所述3d黑素皮肤模型的培养条件为：37±0.5℃，(5±1)％的co2浓度，饱和湿度。
25、优选地，在步骤s4中，使用体式显微镜拍摄所述3d黑素皮肤模型的表观照片，使用色差仪检测所述皮肤表观亮度；
26、使用碱裂解法检测所述3d黑素皮肤模型的所述黑色素含量，通过rna转录和qcpr检测所述mitf基因和tyr基因的表达。
27、本公开要求保护的技术方案取得了以下有益效果：
28、本公开的检测指标包括皮肤表观亮度、黑色素含量以及与黑色素相关的基因表达，使得化妆品原料作用对象涵盖了表观和微观两种维度，建立了系统的评价体系，具有准确、高效的优势，为皮肤护理产品美白活性原料的前期验证及筛选提供快捷可靠的评价方法，为美白原料的复配方案提供参考依据，也为护肤品行业动物替代实验、皮肤护理产品开发和功效验证的进一步研究提供有效依据。
1.一种利用3d黑素皮肤模型筛选原料美白功效的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤s5中，分别计算所述样品组、所述空白对照组和所述阴性对照组与所述阳性对照组的皮肤表观亮度、黑色素含量、mitf基因表达量、tyr基因表达量的比值；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将所述皮肤表观亮度和所述黑色素含量作为宏观指标，将所述mitf基因表达量和所述tyr基因表达量作为微观指标，所述样品组至少有一个所述宏观指标和至少有一个所述微观指标的评分大于等于0.3时，判定所述样品组中的所述原料样品具有美白效果。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤s2中，辐照强度为0.2～0.4mw/cm2，辐照温度为28℃，辐照剂量为50～70mj/cm2。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，辐照天数为所述辐照剂量与所述辐照强度的比值。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原料样品的添加量为0.5～2ml，所述原料样品的浓度为5mg/ml～10mg/ml。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，连续4天重复步骤s3。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对所述原料样品的溶解度进行评估的步骤：
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述3d黑素皮肤模型的培养条件为：37±0.5℃，(5±1)％的co2浓度，饱和湿度。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤s4中，使用体式显微镜拍摄所述3d黑素皮肤模型的表观照片，使用色差仪检测所述皮肤表观亮度；
