本发明涉及杏仁加工。具体地说是具有降压和降血糖效果的多肽及其制备方法和应用。
背景技术：
1、血管紧张素转换酶(angiotensin-i convert ing enzyme，ace)是肾素-血管紧张素系统中的关键酶，能够催化血管紧张素i(angiotensin i)转化为血管紧张素i i(angiotensin i i)，后者是一种强效的血管收缩剂，能显著增加血压。ace还参与降解缓激肽(bradykinin)，后者具有扩血管作用。因此，ace的活性直接影响血压调节。抑制ace的活性是治疗高血压的重要途径，ace抑制剂因此被广泛应用于抗高血压药物的开发。
2、目前，市场上已存在多种ace抑制剂，如替普罗肽等，这些化合物在体外和体内实验中均表现出显著的ace抑制活性，能够有效降低血压。此外，基于食源性肽的天然ace抑制剂因其较少的副作用和良好的生物相容性，受到了广泛关注。研究表明，一些天然存在的多肽具有较强的ace抑制活性，可作为开发新型抗高血压药物的潜在候选物。
3、尽管现有的ace抑制剂如替普罗肽在降压方面具有显著效果，但针对同时具有降压和降血糖双重功效的多肽类药物的研究尚显不足。此外，现有技术中的多肽药物可能存在制备工艺复杂、生产成本高、生物利用度低等问题，限制了其临床应用。
技术实现思路
1、为此，本发明所要解决的技术问题在于提供具有降压和降血糖效果的多肽及其制备方法和应用，所述多肽不仅能够有效抑制ace活性，降低血压，还能通过抑制dpp4的活性调节血糖水平，且制备方法简单，生产成本低，生物活性高。
2、为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
3、一种具有降血压和降血糖效果的多肽，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1、或者seq id no.3、或者seq id no.4、或者seq id no.5、或者seq id no.6、或者seq idno.8、或者seq id no.9、或者seq id no.10所示。
4、上述的多肽，氨基酸序列如seq id no.1所示的多肽和seq id no.8所示的多肽均为具有降血压效果的多肽，氨基酸序列如seq id no.10所示的多肽为具有降血糖效果的多肽。
5、上述的多肽的应用，所述应用为将所述多肽中的任一种用于制造具有降血压和/或降血糖功能的药物。
6、上述的应用，所述应用为将氨基酸序列如seq id no.1或者seq id no.8所示的多肽用于制造具有降血压功能的药物，将氨基酸序列如seq id no.10所示的多肽用于制造具有降血糖功能的药物。
7、多肽的制备方法，包括以下步骤：
8、s1、杏仁脱苦脱皮并破碎，然后进行亚临界脱脂，得到脱脂杏仁粉；
9、s2、使用流动的水对脱脂杏仁粉进行除杂；
10、s3、将除杂后的脱脂杏仁粉进行碱溶，而后除去不溶物，对溶液进行酸沉，对酸沉得到的沉淀进行洗涤和干燥，得到杏仁蛋白粉；
11、s4、使用蛋白酶水解杏仁蛋白粉，得到杏仁蛋白水解物；
12、s5、对杏仁蛋白水解物进行纯化和冷冻干燥，得到上述的多肽。
13、上述的制备方法，在步骤s1中，亚临界脱脂时使用的溶剂为丁烷；在步骤s2中，除杂时，使用流动的水对脱脂杏仁粉进行超滤；超滤时使用的超滤膜为3kda超滤膜，超滤时的水温为4～10℃，超滤时间为22～26小时。使用丁烷作为亚临界脱脂溶剂可有效去除杏仁中的脂肪，保留蛋白质，为后续的水解提供高效基质。使用3kda超滤膜在4～10℃下超滤，有助于除去杂质，保留目标蛋白质，防止蛋白质变性。
14、上述的制备方法，在步骤s3中，碱溶时，脱脂杏仁粉与碱溶反应体系的质量/体积比为1g：(15～20)ml，碱溶反应体系的ph为8.8～9.5，碱溶时间为1～3小时；酸沉时使用的酸为盐酸，盐酸的浓度为8～12mo l/l，酸沉反应体系的ph为3.3～4.7。碱溶的ph、反应时间和质量/体积比影响蛋白质的溶解度和结构，盐酸的浓度和酸沉ph调控蛋白质的沉淀效率和产物纯度，影响最终多肽的纯度。
15、上述的制备方法，在步骤s4中，使用木瓜蛋白酶对杏仁蛋白粉进行水解；水解反应体系中，杏仁蛋白粉的浓度为30～50mg/ml，木瓜蛋白酶的用量与杏仁蛋白粉的质量之比为18000～20000u/g；水解反应体系的ph为6.5～7.2，水解反应的温度为55～65℃，水解反应的时间为3～4小时。在利用蛋白酶水解蛋白质制备多肽时，酶的种类、用量和水解条件对产物多肽序列有显著影响。不同的酶的特异性一般不同，且酶用量影响也会影响蛋白质的降解程度，较高浓度酶将加速酶解反应，并产生更短的肽。水解条件如ph、温度和时间等会影响酶的活性。在上述条件下，使用木瓜蛋白酶水解杏仁蛋白粉，能够制得具有降压和降血糖效果的多肽。
16、上述的制备方法，水解反应体系中，杏仁蛋白粉的浓度为40mg/ml，木瓜蛋白酶的用量与杏仁蛋白粉的质量之比为20000u/g；水解反应体系的ph为6.5，水解温度为60℃，水解时间为220分钟。
17、上述的制备方法，在步骤s5中，对杏仁蛋白水解物进行纯化时，使用超滤除去杏仁蛋白水解物中分子量小于3kda的组分，而后对余留组分依次进行凝胶色谱纯化和反向色谱分离纯化。
18、本发明的技术方案取得了如下有益的技术效果：
19、1、本发明提供了同时具有降血压和降血糖效果的多肽，并通过分子对接实验测试了这些多肽与血管紧张素转化酶ace和二肽基肽酶-ⅳdpp4的结合能力，实验结果表明，这些多肽能够与ace和dpp4的活性位点结合，这表明这些多肽能够抑制ace和dpp4的活性，发挥降血压和降血糖的功能。抑制率测试实验进一步证明了，ylsf和wnprdpq能够抑制ace和dpp4的活性，hlpl能够抑制dpp4的活性，且结合能测试结果显示，这三种多肽与ace和dpp4的结合均较为稳定。
20、2、本发明提供的多肽能够与ace、dpp4和其他的一些与调节血压和调节血糖有关的酶发生相互作用，本发明为开发新型治疗高血压、糖尿病等疾病的药物提供了新的策略，具有重要的临床应用价值。
1.一种具有降血压和降血糖效果的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seqid no.1、或者seq id no.3、或者seq id no.4、或者seq id no.5、或者seq id no.6、或者seq id no.8、或者seq id no.9、或者seq id no.10所示。
2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.1所示的多肽和seq id no.8所示的多肽均为具有降血压效果的多肽，氨基酸序列如seq id no.10所示的多肽为具有降血糖效果的多肽。
3.多肽的应用，其特征在于，所述应用为将权利要求1或2所述多肽中的任一种用于制造具有降血压和/或降血糖功能的药物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用为将氨基酸序列如seq id no.1或者seq id no.8所示的多肽用于制造具有降血压功能的药物，将氨基酸序列如seq idno.10所示的多肽用于制造具有降血糖功能的药物。
5.多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤s1中，亚临界脱脂时使用的溶剂为丁烷；在步骤s2中，除杂时，使用流动的水对脱脂杏仁粉进行超滤；超滤时使用的超滤膜为3kda超滤膜，超滤时的水温为4～10℃，超滤时间为22～26小时。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤s3中，碱溶时，脱脂杏仁粉与碱溶反应体系的质量/体积比为1g：(15～20)ml，碱溶反应体系的ph为8.8～9.5，碱溶时间为1～3小时；酸沉时使用的酸为盐酸，盐酸的浓度为8～12mol/l，酸沉反应体系的ph为3.3～4.7。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤s4中，使用木瓜蛋白酶对杏仁蛋白粉进行水解；水解反应体系中，杏仁蛋白粉的浓度为30～50mg/ml，木瓜蛋白酶的用量与杏仁蛋白粉的质量之比为18000～20000u/g；水解反应体系的ph为6.5～7.2，水解反应的温度为55～65℃，水解反应的时间为3～4小时。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，水解反应体系中，杏仁蛋白粉的浓度为40mg/ml，木瓜蛋白酶的用量与杏仁蛋白粉的质量之比为20000u/g；水解反应体系的ph为6.5，水解温度为60℃，水解时间为220分钟。
10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤s5中，对杏仁蛋白水解物进行纯化时，使用超滤除去杏仁蛋白水解物中分子量小于3kda的组分，而后对余留组分依次进行凝胶色谱纯化和反向色谱分离纯化。
