本发明涉及粪便检测，尤其涉及一种粪便样本保存液及其制备方法、粪便样本保存方法。
背景技术：
1、胃肠道感染传染源主要包括细菌、病毒和寄生虫，这些都会导致包括胃和小肠在内的胃肠道发炎，其症状包括腹泻和脱水，是胃肠道感染的主要危害。尽管胃肠炎对健康成年人不是很严重，仅表现为不适和不便；但对于病重、虚弱、年幼和年老患者，却可引起危及生命的脱水和电解质失衡。
2、感染性腹泻病原学检查常用诊断手法有涂片镜检、培养、免疫分析和分子生物学方法等。传统微生物诊断方法虽为临床常用的检测方法，但费时费力、灵敏度不高，还可能存在一定的漏检情况。分子生物学技术通常比培养更敏感，耗时短，而基于高通量测序技术(next-generation sequencing,ngs)不依赖于传统的微生物培养，直接对临床样本中的核酸进行富集，再进行高通量测序，然后与数据库进行比对分析，根据比对到的序列息来判断样本包含的病原微生物种类，能够快速、客观的检测临床样本中的较多病原微生物(包括病毒、细菌和寄生虫等)，为临床诊断提供依据。
3、但是，目前很多医院不具备ngs检测条件，需要将待测样本转移至有条件进行检测的机构，如何对粪便样本进行保存是至关重要的问题。由于粪便中含有大量酶和细菌，这些活性物质会迅速降解样本中的核酸，导致样本质量下降，影响后续检测结果的准确性，进而影响临床治疗。因此，开发一种适用于ngs的能够稳定保存粪便样本的保存液显得尤为重要。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种粪便样本保存液及其制备方法、粪便样本保存方法。本发明提供的粪便样本保存液使得粪便保存效果更佳，更适用于ngs检测。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种粪便样本保存液，包括以下浓度的组分：
4、异硫氰酸胍1～4mol/l，吐温0.1～1vol％，乙二胺四乙酸二钠10～100mmol/l，双咪唑烷基脲1～5mmol/l，二硫苏糖醇1～10mmol/l，氯化钠1～20mmol/l，十二烷基硫酸钠10～50mmol/l，三羟甲基氨基甲烷缓冲液和水，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的用量使粪便样本保存液的ph值为8。
5、优选地，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
6、异硫氰酸胍2.5mol/l，吐温0.5vol％，乙二胺四乙酸二钠50mmol/l，双咪唑烷基脲2～3mmol/l，二硫苏糖醇5mmol/l，氯化钠10mmol/l，十二烷基硫酸钠35mmol/l。
7、优选地，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
8、异硫氰酸胍2.5mol/l，吐温0.5vol％，乙二胺四乙酸二钠50mmol/l，双咪唑烷基脲3mmol/l，二硫苏糖醇5mmol/l，氯化钠10mmol/l，十二烷基硫酸钠35mmol/l。
9、优选地，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
10、异硫氰酸胍2.5mol/l，吐温0.5vol％，乙二胺四乙酸二钠50mmol/l，双咪唑烷基脲2mmol/l，二硫苏糖醇5mmol/l，氯化钠10mmol/l，十二烷基硫酸钠35mmol/l。
11、优选地，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
12、异硫氰酸胍4mol/l，吐温0.1vol％，乙二胺四乙酸二钠10mmol/l，双咪唑烷基脲1mmol/l，二硫苏糖醇10mmol/l，氯化钠1mmol/l，十二烷基硫酸钠10mmol/l。
13、优选地，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
14、异硫氰酸胍1mol/l，吐温1vol％，乙二胺四乙酸二钠100mmol/l，双咪唑烷基脲5mmol/l，二硫苏糖醇1mmol/l，氯化钠20mmol/l，十二烷基硫酸钠50mmol/l。
15、优选地，所述吐温包括吐温-20。
16、本发明还提供了上述技术方案所述的粪便样本保存液的制备方法，包括以下步骤：
17、将异硫氰酸胍、吐温、乙二胺四乙酸二钠、双咪唑烷基脲、二硫苏糖醇、氯化钠、十二烷基硫酸钠、三羟甲基氨基甲烷缓冲液和水混合后过滤，得到所述粪便样本保存液。
18、本发明还提供了一种粪便样本保存方法，在粪便样本中添加上述技术方案所述的粪便样本保存液。
19、优选地，在每克粪便样本中添加5～15ml所述粪便样本保存液。
20、本发明提供了一种粪便样本保存液，包括以下浓度的组分：异硫氰酸胍1～4mol/l，吐温0.1～1vol％，乙二胺四乙酸二钠10～100mmol/l，双咪唑烷基脲1～5mmol/l，二硫苏糖醇1～10mmol/l，氯化钠1～20mmol/l，十二烷基硫酸钠10～50mmol/l，三羟甲基氨基甲烷缓冲液和水，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的用量使粪便样本保存液的ph值为8。
21、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
22、本发明以异硫氰酸胍(gitc)作为蛋白变性剂，吐温(tween)作为辅助剂，二者搭配能迅速溶解蛋白质，抑制核酸酶对核酸的降解；乙二胺四乙酸二钠(edta-2na)作为螯合剂，螯合样本中金属离子，抑制核酸酶的反应；使用双咪唑烷基脲作为抑菌剂，主要是利用其广谱微生物抑制效果，有效抑制粪便中细菌和真菌的增殖；二硫苏糖醇(dtt)不仅能还原rnase(核糖核酸酶)蛋白质中的二硫键，使rnase酶变性，同时抑制酚类氧化引起的磷酸二酯键的断裂及导致rna和dna的交联；氯化钠(nacl)能够稳定溶液的离子浓度；十二烷基硫酸钠(sds)改变蛋白质构象，还能起到破坏细胞膜和解离核酸的作用；三羟甲基氨基甲烷缓冲液(tris-hcl)能够维持ph值稳定，为核酸提供一个合适的缓冲体系；本发明通过创造性使用吐温、双咪唑烷基脲和二硫苏糖醇，结合异硫氰酸胍、乙二胺四乙酸二钠等成分的合理配比，使得粪便保存效果更佳，更适用于ngs检测，能够在室温条件下有效保护粪便样本中的核酸至少5天，防止其在运输、保存过程中降解，确保样本的稳定性，为样本的运输、保存提供了更多的灵活性和便利。
23、且本发明中异硫氰酸胍还能灭活病毒、释放核酸，降低生物外泄传播的风险。
1.一种粪便样本保存液，其特征在于，包括以下浓度的组分：
2.根据权利要求1所述的粪便样本保存液，其特征在于，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
3.根据权利要求2所述的粪便样本保存液，其特征在于，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
4.根据权利要求2所述的粪便样本保存液，其特征在于，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
5.根据权利要求1所述的粪便样本保存液，其特征在于，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
6.根据权利要求1所述的粪便样本保存液，其特征在于，所述粪便样本保存液包括以下浓度的组分：
7.根据权利要求1～6任一项所述的粪便样本保存液，其特征在于，所述吐温包括吐温-20。
8.权利要求1～7任一项所述的粪便样本保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.一种粪便样本保存方法，其特征在于，在粪便样本中添加权利要求1～7任一项所述的粪便样本保存液。
10.根据权利要求9所述的粪便样本保存方法，其特征在于，在每克粪便样本中添加5～15ml所述粪便样本保存液。
