本发明属于荧光和电化学传感，具体涉及一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器及其制备方法和应用，即利用基于金属团簇荧光信号和电化学信号的适配体传感器检测食品中pb2+的应用。
背景技术：
1、针对目前对重金属离子高灵敏度、高特异性检测的需求，研究人员致力于构建多种不同信号模式的生物传感器。单信号模式生物传感器利用特异性生物分子选择性地与靶标结合，通过电化学或光学方法等各种转导技术检测信号变化。相比之下，多信号模式生物传感器采用两种或多种不同的识别元件来判定靶标的含量。该方法同时结合多种传感机制，可有效提高检测体系的灵敏度和选择性。在信号模式生物传感器中，一个识别元件可以与目标发生特异性相互作用产生一种信号，而另一个元件响应由目标存在引起的另一种信号变化，可通过同时分析上述两种信号，对靶标进行有效的定量分析，并提高生物传感器的准确性和可靠性。
2、信号放大作为传感领域的一项关键技术，可通过放大信号强度，克服检测方法的实际应用范围窄或灵敏度有限的局限性，从而实现对低浓度靶标的定量分析。在dna组装扩增技术的基础上，酶催化技术可以降解核酸序列中的核苷酸，使编程寡核苷酸轨道上的互补链渐进式移动并发生重复配对，并将靶标释放到先前的反应循环中。目标分析物的数量随着靶标释放回收过程被间接增加，从而实现信号的二次放大。此外，自催化生物传感器具有操作简便、可在室温下反应等优点。因此，为满足检测程序设计方便化的要求，开发一种简洁、快速、等温的自催化扩增分析方法是污染物测定的理想选择。目前，基于靶循环和杂交链式反应双重信号放大的荧光-电化学双信号适配体传感器检测pb2+的相关研究较少。
技术实现思路
1、针对现有技术中的不足，本发明的第一方面提供一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，以金银双金属纳米团簇和银纳米团簇分别作为荧光信号和电化学信号标签，以适配体作为特异性识别生物分子，通过酶辅助靶循环和杂交链式反应实现二次信号放大，构建检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器。
2、本发明的第二方面提供一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器，通过上述制备方法得到。
3、本发明的第三方面提供上述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器检测铅离子的方法。
4、本发明的第四方面提供上述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的应用。
5、为达到上述目的，本发明的技术方案是：
6、本发明的第一方面提供一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)制备荧光纳米材料au nps@bsa@auag ncs和磁性纳米材料au-mnfe2o4；
8、(2)apt和ssdna分别与荧光纳米材料au nps@bsa@auag ncs和磁性纳米材料au-mnfe2o4偶联并发生互补形成双链dna，构建荧光检测体系；
9、(3)电化学检测过程中生化反应在丝网印刷电极上进行，电极以聚对苯二甲酸乙二醇酯为衬底，通过丝网印刷在基底上固定工作电极、对电极和参比电极，其中所述工作电极和对电极由石墨和聚丙烯酸衍生物组成，所述参比电极由银/氯化银浆料组成；
10、(4)氧化钼纳米片表面原位生成金纳米粒子得到复合物au-moox；
11、(5)制备的au-moox修饰丝网印刷电极以提高电导率和比表面积，得到aunps-moox修饰电极，并将该修饰电极偶联edna；
12、(6)准备s1-s2交联物、hcr反应所需的h1-ag ncs和h2-ag ncs，与步骤(5)处理后的丝网印刷电极构建电化学检测体系。
13、本发明的制得的的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器检测铅离子的机理如下：
14、当样本中含有pb2+时，apt特异性捕获pb2+而从双链中脱离，触发recjf酶解使pb2+再循环和荧光物质释放，磁分离后，上清液含有荧光纳米团簇，沉淀含有偶联ssdna的au-mnfe2o4；通过检测上清液的荧光信号实现pb2+的荧光检测；含偶联ssdna的au-mnfe2o4的沉淀与s1-s2交联物中的s1链杂交，释放的s2链与电极表面偶联的edna以及h1-ag ncs、h2-agncs发生杂交链式反应，通过测定银纳米团簇提供的dpv信号实现对pb2+的电化学检测。
15、一些实施例中，步骤(1)中，所述荧光纳米材料au nps@bsa@auag ncs的制备方法包括：将au nps与bsa溶液混合，搅拌反应后得到au nps@bsa。将au nps@bsa与haucl4和agno3的混合溶液混合均匀后加入适量naoh调节溶液体系ph，继续搅拌反应得到au nps@bsa@auag ncs。
16、一些实施例中，步骤(1)中，所述au nps的添加量为2-3ml，优选为2.5ml。
17、一些实施例中，步骤(1)中，所述bsa溶液的添加量为2-3ml，优选为2.5ml；浓度为50-60mg/ml，优选为50mg/ml。
18、一些实施例中，步骤(1)中，所述制备au nps@bsa制备反应温度为30-40℃，优选为37℃；反应时间为4-6h，优选为5h。
19、一些实施例中，步骤(1)中，所述与haucl4和agno3的混合溶液混合的au nps@bsa添加量为4-5ml，优选为4ml。
20、一些实施例中，步骤(1)中，所述haucl4和agno3的混合溶液添加量为1-1.5ml，优选为1ml；其中haucl4浓度为8-12mm，优选为10mm；agno3浓度为8-12mm，优选为10mm；au与ag的摩尔比为19:1-17:3，优选为18:2。
21、一些实施例中，步骤(1)中，所述naoh的浓度为0.5-1m，优选为1m；体系ph范围为12-13，优选为12。
22、一些实施例中，步骤(1)中，所述au nps@bsa@auag ncs制备反应温度为30-40℃，优选为37℃；反应时间为4-6h，优选为5h。
23、一些实施例中，步骤(1)中，所述磁性纳米材料au-mnfe2o4的制备方法包括：fecl3·6h2o、mncl2·4h2o和pvp溶于乙二醇/二甘醇(v1:v2＝1:1)，搅拌反应至溶液透明，加入醋酸钠搅拌。而后将上述溶液转移至反应釜中反应。反应结束后，磁分离洗涤，真空干燥过夜得到mnfe2o4粉末。haucl4、柠檬酸三钠和nabh4依次加到超纯水中，搅拌至溶液颜色变为橙色，继续在室温下搅拌反应得到金种子。mnfe2o4粉末加入到pei溶液中，超声反应后磁分离洗涤得到pei-mnfe2o4。将上述固体分散于金种子溶液中超声反应，磁分离洗涤后分散至100ml超纯水中，得到au nps-mnfe2o4。取au nps-mnfe2o4分散于150ml超纯水中，加入pvp，完全溶解后加入盐酸羟胺。最后加入haucl4，超声反应后磁分离洗涤得到au-mnfe2o4。
24、一些实施例中，步骤(1)中，所述fecl3·6h2o添加量为350-400mg，优选为360mg；mncl2·4h2o添加量为130-135mg，优选为132mg；pvp添加量为1.5-2g，优选为2g。
25、一些实施例中，步骤(1)中，所述乙二醇/二甘醇溶液体积为18-20ml，优选为20ml。
26、一些实施例中，步骤(1)中，所述含有fecl3·6h2o、mncl2·4h2o和pvp溶液搅拌反应温度为100-120℃，优选为120℃；时间为8-15min，优选为10min。
27、一些实施例中，步骤(1)中，所述醋酸钠的添加量为1.2-1.5g，优选为1.5g；搅拌时间为20-40min，优选为30min。
28、一些实施例中，步骤(1)中，所述在反应釜中反应温度为190-210℃，优选为200℃；反应时间为9-10h，优选为10h。
29、一些实施例中，步骤(1)中，所述真空干燥温度为50-60℃，优选为60℃。
30、一些实施例中，步骤(1)中，所述haucl4添加量为8-10ml，优选为10ml；浓度为4-6mm，优选为5mm；柠檬酸三钠添加量为8-10ml，优选为10ml；浓度为4-6mm，优选为5mm；nabh4添加量为4-6ml，优选为5ml；浓度为0.1-0.15m，优选为0.1m；超纯水体积为180-190ml，优选为180ml。
31、一些实施例中，步骤(1)中，所述金种子制备反应时间为4-6h，优选为4h；粒径为3-5nm，优选为4nm。
32、一些实施例中，步骤(1)中，所述mnfe2o4粉末添加量为80-100mg，优选为100mg；pei溶液添加量为45-50ml，优选为50ml；浓度为9-10mg/ml，优选为10mg/ml；超声反应时间为20-30min，优选为20min。
33、一些实施例中，步骤(1)中，所述分散pei-mnfe2o4所用金种子溶液体积为180-200ml，优选为200ml；超声反应时间为1-1.5h，优选为1h。
34、一些实施例中，步骤(1)中，所述au nps-mnfe2o4添加量为45-50ml，优选为50ml；pvp添加量为2.5-3g，优选为2.5g；盐酸羟胺添加量为2-2.5ml，优选为2ml；浓度为45-50mg/ml，优选为50mg/ml。
35、一些实施例中，步骤(1)中，所述haucl4添加量为1.2-1.5ml，优选为1.5ml；浓度为20-25mm，优选为24mm；超声反应时间为5-8min，优选为5min。
36、一些实施例中，步骤(2)中，所述apt与荧光纳米材料au nps@bsa@auag ncs偶联的制备方法包括：将au nps@bsa@auag ncs分散于pbs(10mm,ph 7.0)中，依次加入edc和nhs，于37℃下继续反应。将氨基修饰的apt加至上述体系中反应得到apt/au nps@bsa@auagncs。
37、一些实施例中，步骤(2)中，所述au nps@bsa@auag ncs添加量为40-50μl，优选为40μl。
38、一些实施例中，步骤(2)中，所述pbs溶液体积为150-160μl，优选为160μl。
39、一些实施例中，步骤(2)中，所述edc添加量为4-4.5mg，优选为4.48mg；nhs添加量为2-2.5mg，优选为2.5mg；反应时间为20-40min，优选为30min。
40、一些实施例中，步骤(2)中，所述氨基修饰的apt添加量为10-15μl，优选为10μl；浓度为40-50μm，优选为50μm；反应温度为35-40℃，优选为37℃；反应时间为4-5h，优选为4h。
41、一些实施例中，步骤(2)中，所述ssdna与磁性纳米材料au-mnfe2o4偶联的制备方法包括：巯基修饰的ssdna经tcep还原后，与au-mnfe2o4混合后搅拌过夜。反应结束后经磁分离洗涤，复溶于500μl超纯水中，得到ssdna/au-mnfe2o4。
42、一些实施例中，步骤(2)中，所述巯基修饰的ssdna添加量为45-50μl，优选为50μl；浓度为50-80μm，优选为50μm。
43、一些实施例中，步骤(2)中，所述au-mnfe2o4添加量为4-6mg，优选为5mg；反应温度为25-30℃，优选为25℃。
44、一些实施例中，步骤(3)中，所述丝网印刷电极的工作电极直径为3.5毫米。
45、一些实施例中，步骤(4)中，所述au-moox复合材料的制备方法包括：在8ml超纯水中加入钼粉，室温下超声至均匀分散，缓慢加入12ml h2o2，完全溶解后用水稀释至总体积20ml，而后加入聚乙二醇2000，连续快速磁力搅拌，形成透明的黄色溶液，并将其转移至50ml反应釜中反应。反应结束后，离心洗涤收集蓝色moox纳米片沉淀复溶于20ml水中。50μlhaucl4和100μl柠檬酸三钠依次加至3.5ml超纯水中，边搅拌边加入100μl nabh4，剧烈搅拌得到金种子。110ml ctab和100μl nai充分混合后分成不同体积的三份：a(10ml)、b(10ml)、c(90ml)。将1.2ml haucl4、0.5ml抗坏血酸和0.5ml naoh充分混合，分别加至体系a和b中，取1.2ml haucl4加至体系c中。然后，取1ml金种子溶液加至体系a中，混合10s后，取1ml混合溶液加至体系b中，混合10s。最后将体系b中所有溶液与500μl上述制备的moox溶液加至体系c中，搅拌至溶液变成蓝紫色。将上述溶液置于避光环境中陈化，反应完成后离心洗涤，最后分散于10ml超纯水中得到au-moox。
46、一些实施例中，步骤(4)中，所述钼粉添加量为1.8-2g，优选为1.96g；超声时间为40-60min，优选为60min；聚乙二醇2000添加量为8-10g，优选为10g；反应釜中反应温度为75-85℃，优选为80℃；反应时间为10-12h，优选为12h。
47、一些实施例中，步骤(4)中，所述haucl4浓度为20-25mm，优选为24mm；柠檬酸三钠浓度为8-10mm，优选为10mm；nabh4浓度为0.1-0.15m，优选为0.1m；金种子反应搅拌时间为20-40min，优选为30min。
48、一些实施例中，步骤(4)中，所述ctab浓度为40-60mm，优选为50mm；nai浓度为0.1-0.15m，优选为0.1m。
49、一些实施例中，步骤(4)中，所述haucl4浓度为20-25mm，优选为24mm；抗坏血酸浓度为0.08-0.1m，优选为0.1m；naoh浓度为0.1-0.15m，优选为0.1m。
50、一些实施例中，步骤(4)中，所述陈化反应温度为25-30℃，优选为30℃；反应时间为20-30h，优选为24h。
51、一些实施例中，步骤(5)中，所述au-moox修饰电极的制备方法包括：将上述制备的au-moox与5μl超纯水混合后，滴加至工作电极上，烘干即得。
52、一些实施例中，步骤(5)中，所述au-moox的添加量为4-6μl，优选为5μl。
53、一些实施例中，步骤(5)中，所述烘干温度为20-30℃，优选为30℃。
54、一些实施例中，各步骤涉及的核苷酸序列如下：步骤(2)中，所述apt的序列如seqid no：1所示；所述ssdna的序列seq id no：2所示；步骤(5)中，所述au-moox修饰电极偶联的edna的序列如seq id no：3所示；步骤(6)中，所述s1的序列如seq id no：4所示，所述s2的序列如seq id no：5所示，所述h1的序列如seq id no：6所示，所述h2的序列如seq id no：7所示。
55、本发明的第二方面，提供一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器，其由上述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法得到。
56、本发明的第三方面提供上述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器检测铅离子的方法，包括以下步骤：
57、(一)待测物滴加荧光体系中进行检测，apt通过对其的特异性捕获而从双链中脱离，触发酶解过程，导致待测物的再循环和荧光信号的产生，测定荧光信号实现对pb2+的一次定量；
58、(二)经磁分离后沉淀物在电化学体系中进行检测，从双链中脱离的ssdna与s1杂交，释放的s2作为二级靶代物触发杂交链式反应，测定该反应中银纳米团簇提供的电化学信号实现对pb2+的二次定量。
59、一些实施例中，步骤(一)中，所述pb2+在荧光体系中的检测方法包括：ssdna/au-mnfe2o4与apt/au nps@bsa@auag ncs的混合溶液(v1:v2＝20:10)中依次加入pb2+标准溶液和10μl recjf，反应结束后通过磁分离得到上清液，测定其荧光光谱(激发波长360nm，发射波长范围为400nm-800nm)。
60、一些实施例中，步骤(一)中，所述ssdna/au-mnfe2o4与apt/au nps@bsa@auag ncs的混合溶液添加量为25-35μl，优选为30μl。
61、一些实施例中，步骤(一)中，所述pb2+标准溶液添加量为10-15μl，优选为10μl。
62、一些实施例中，步骤(一)中，所述recjf浓度为0.3-0.5u/μl，优选为0.3u/μl；反应温度为20-30℃，优选为25℃；反应时间为40-60min，优选为60min。
63、一些实施例中，步骤(二)中，所述pb2+在电化学体系中的检测方法包括：将上述磁分离过程中的沉淀部分与20μl s1-s2交联物混合反应后，磁分离得到上清液。将上清液滴加至edna修饰电极上，于37℃下反应30min后，冲洗电极。而后加入10μl h1-ag ncs和10μlh2-ag ncs，于37℃下进行hcr反应，反应结束后冲洗电极。通过在pbs(0.1m,ph 7.0)中测定agncs提供的dpv信号对pb2+进行定量。
64、一些实施例中，步骤(二)中，所述s1-s2交联物浓度为20-30μm，优选为20μm；反应温度为20-30℃，优选为25℃；反应时间为20-40min，优选为30min。
65、一些实施例中，步骤(二)中，所述h1-ag ncs和h2-ag ncs浓度为4-6μm，优选为5μm。
66、一些实施例中，步骤(二)中，所述hcr反应时间为20-40min，优选为30min。
67、本发明的第四方面，提供一种上述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器在检测食品重金属离子pb2+中的应用。
68、一些实施例中，检测茶叶和蔬菜中重金属离子pb2+的方法，通过所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器实现，包括如下步骤：
69、(a)配制不同浓度梯度的pb2+标准溶液，滴加至所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器上，测定其荧光信号强度和电化学特征峰信号强度，拟合标准曲线；
70、(b)将茶叶和蔬菜经前处理，滴加至所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器上，分别根据荧光和电化学检测线性模型测定pb2+的浓度。
71、一些实施例中，步骤(a)中，pb2+的标准曲线拟合的方法：将pb2+标准品用超纯水稀释至不同浓度，将不同浓度的溶液滴加到所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器上，检测荧光信号和银纳米团簇的电化学dpv信号，分别通过信号峰强度值进行标准曲线拟合。
72、一些实施例中，步骤(a)中，pb2+溶液的不同浓度为0ng/ml、0.001ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml；
73、一些实施例中，步骤(b)中，在粉碎的茶叶粉末和蔬菜中加入硝酸和过氧化氢，然后于石墨消解炉中消解；消解完成后，用水定容，过滤除杂后作为检测所需溶液，滴加至所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器上，检测电化学信号，根据标准曲线计算茶叶和蔬菜中pb2+的含量。
74、由于采用上述方案，本发明的有益效果是：
75、一、本发明构建的酶辅助靶循环金属团簇荧光-电化学双信号适配体传感器，通过recjf外切酶降解适配体核苷酸，将靶标循环释放至荧光体系中，实现信号一次放大；磁分离得到的s2作为二级靶代物进入电化学检测体系中触发杂交链式反应过程，dna稳定的银纳米团簇可作为交联序列并提供电化学信号，实现信号二次放大，提高检测体系灵敏度。
76、二、本发明制备的金纳米粒子和氧化钼纳米片复合纳米材料au-moox具有优异的导电性，可有效提高丝网印刷电极的电导率和比表面积；构建的传感器以荧光和电化学双信号响应作为分析对象，在pb2+检测方面具有较高的准确度和可靠性，此外，适配体的特异性识别功能有效避免了其他重金属离子的潜在干扰，具有特异性强、准确度高的优点。
77、三、本发明为高灵敏度、高特异性检测重金属离子的多信号生物传感器的制备提供新的方法，且制备方法新颖，制备过程简单，可应用于食品检测行业，例如可以快速检测茶叶和蔬菜样品中重金属的pb2+含量，具有重要的实际应用价值。
1.一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述荧光纳米材料au nps@bsa@auag ncs的制备方法包括：将au nps与bsa溶液混合，搅拌反应后得到au nps@bsa；将au nps@bsa与haucl4和agno3的混合溶液混合均匀后加入naoh调节溶液体系ph，继续搅拌反应得到au nps@bsa@auag ncs；其中：
3.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述磁性纳米材料au-mnfe2o4的制备方法包括：fecl3·6h2o、mncl2·4h2o和pvp溶于体积比1：1的乙二醇/二甘醇，搅拌反应至溶液透明，加入醋酸钠搅拌；而后将上述溶液转移至反应釜中反应；反应结束后，磁分离洗涤，真空干燥过夜得到mnfe2o4粉末；haucl4、柠檬酸三钠和nabh4依次加到超纯水中，搅拌至溶液颜色变为橙色，继续在室温下搅拌反应得到金种子；mnfe2o4粉末加入到pei溶液中，超声反应后磁分离洗涤得到pei-mnfe2o4；将上述固体分散于金种子溶液中超声反应，磁分离洗涤后分散至100ml超纯水中，得到au nps-mnfe2o4；取au nps-mnfe2o4分散于150ml超纯水中，加入pvp，完全溶解后加入盐酸羟胺；最后加入haucl4，超声反应后磁分离洗涤得到au-mnfe2o4；其中：
4.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述apt与荧光纳米材料au nps@bsa@auag ncs偶联的制备方法包括：将au nps@bsa@auag ncs分散于pbs(10mm,ph 7.0)中，依次加入edc和nhs，于37℃下继续反应；将氨基修饰的apt加至上述体系中反应得到apt/au nps@bsa@auag ncs；其中：
5.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述ssdna与磁性纳米材料au-mnfe2o4偶联的制备方法包括：巯基修饰的ssdna经tcep还原后，与au-mnfe2o4混合后搅拌过夜。反应结束后经磁分离洗涤，复溶于500μl超纯水中，得到ssdna/au-mnfe2o4；其中：
6.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述丝网印刷电极的工作电极直径为3.5毫米。
7.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述au-moox复合材料的制备方法包括：在8ml超纯水中加入钼粉，室温下超声至均匀分散，缓慢加入12ml h2o2，完全溶解后用水稀释至总体积20ml，而后加入聚乙二醇2000，连续快速磁力搅拌，形成透明的黄色溶液，并将其转移至50ml反应釜中反应；反应结束后，离心洗涤收集蓝色moox纳米片沉淀复溶于20ml水中；50μlhaucl4和100μl柠檬酸三钠依次加至3.5ml超纯水中，边搅拌边加入100μl nabh4，剧烈搅拌得到金种子；110ml ctab和100μl nai充分混合后分成不同体积的三份：a10ml、b10ml、c 90ml；将1.2mlhaucl4、0.5ml抗坏血酸和0.5ml naoh充分混合，分别加至体系a和b中，取1.2ml haucl4加至体系c中；然后，取1ml金种子溶液加至体系a中，混合10s后，取1ml混合溶液加至体系b中，混合10s；最后将体系b中所有溶液与500μl上述制备的moox溶液加至体系c中，搅拌至溶液变成蓝紫色；将上述溶液置于避光环境中陈化，反应完成后离心洗涤，最后分散于10ml超纯水中得到au-moox；其中：
8.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述au-moox修饰电极的制备方法包括：将上述制备的au-moox与5μl超纯水混合后，滴加至工作电极上，烘干即得；其中：
9.根据权利要求1所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述apt的序列如seq id no：1所示；所述ssdna的序列seqid no：2所示；步骤(5)中，所述au-moox修饰电极偶联的edna的序列如seq id no：3所示；步骤(6)中，所述s1的序列如seq id no：4所示，所述s2的序列如seq id no：5所示，所述h1的序列如seq id no：6所示，所述h2的序列如seq id no：7所示。
10.一种检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器，其特征在于，通过权利要求1至9任一项所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器的制备方法得到。
11.利用权利要求10所述的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器检测铅离子的方法，其特征在于，包括以下步骤：
12.根据权利11所述的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器检测铅离子的方法，其特征在于，步骤(一)中，pb2+在荧光体系中的检测方法包括：在体积比20：10的ssdna/au-mnfe2o4与apt/au nps@bsa@auag ncs的混合溶液中依次加入pb2+标准溶液和10μl recjf，反应结束后通过磁分离得到上清液，测定其荧光光谱，荧光光谱测定条件为激发波长360nm，发射波长范围为400nm-800nm；其中：
13.根据权利12所述的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器检测铅离子的方法，其特征在于，步骤(二)中，pb2+在电化学体系中的检测方法包括：将磁分离过程中的沉淀部分与20μl s1-s2交联物混合反应后，磁分离得到上清液；将上清液滴加至edna修饰电极上，于37℃下反应30min后，冲洗电极；而后加入10μl h1-ag ncs和10μl h2-ag ncs，于37℃下进行hcr反应，反应结束后冲洗电极；通过在浓度0.1m、ph 7.0的pbs中测定ag ncs提供的dpv信号对pb2+进行定量；其中：
14.权利要求10所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器在检测食品重金属离子pb2+中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，检测茶叶和蔬菜中重金属离子pb2+通过所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器实现，包括如下步骤：
16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，步骤(a)中，pb2+的标准曲线拟合的方法：将pb2+标准品用超纯水稀释至不同浓度，将不同浓度的溶液滴加到所述检测铅离子的靶循环荧光-电化学双信号适配体传感器上，检测荧光信号和银纳米团簇的电化学dpv信号，分别通过信号峰强度值进行标准曲线拟合；其中：
