本发明属于生物医学检测，具体涉及一种基于比色法测定尿液中甲醛的方法及其在阿尔茨海默病早期生物标志物检测中的应用。
背景技术：
1、人体健康状况的变化，包括许多疾病，如中风、癌症、多发性硬化症和与年龄相关的神经性痴呆症等，都有可能影响人体甲醛的正常新陈代谢，导致人体尿液中甲醛水平升高。因此，监测尿液甲醛含量对医疗保健工作具有重要意义。然而，尿液样本复杂多样，含有许多干扰物质，影响甲醛的检测和量化。分离或除去这些干扰物质是测定尿液甲醛的先决条件。目前，一些常用的标准方法包括气相色谱(gc)、高效液相色谱(hplc)和荧光高效液相色谱(fluo-hplc)。在后一种情况下，甲醛与某种荧光探针(例如2,4-二硝基苯肼(dnph)或氨苄西林)结合，然后通过高效液相色谱洗脱分离检测。然而，这些色谱方法需要复杂且昂贵的仪器，并不适合常规应用。事实上，到目前为止，还没有简单有效的方法来可靠地检测和定量尿液中的甲醛含量。
技术实现思路
1、本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种基于比色法测定尿液中甲醛的方法及其在阿尔茨海默病早期生物标志物检测中的应用。
2、为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：
3、所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法是在检测待测尿液样本前用活性炭处理尿液样本以除去干扰物质，然后再用比色法测定尿液样本中的甲醛含量。
4、优选地，所述方法是在检测待测尿液样本前用活性炭处理尿液样本，然后将活性炭处理后的尿液样本加入装有mbth溶液的比色皿中反应，再向比色皿中加入含有hcl的fecl3溶液反应，读取吸光度a628并参照甲醛标准液定量尿液样本中的甲醛浓度；或者，所述方法是在检测待测尿液样本前用活性炭处理尿液样本，然后将活性炭处理后的尿液样本加入孔板中，向孔板中加入mbth溶液反应，再向孔板中加入含有hcl的fecl3溶液反应，读取吸光度a628并参照甲醛标准液定量尿液样本中的甲醛浓度；所述活性炭为动物活性炭，优选地，活性炭的尺寸为20-100目，更优选地，活性炭为椰子壳制备的活性炭。
5、优选地，所述活性炭与尿液样本的质量体积比为0.1:100至0.3:100，优选为0.2:100，所述质量体积比的单位为g/μl。
6、优选地，所述用活性炭处理尿液样本是向装有活性炭的容器中加入milli-q水、cacl2溶液和尿液样本；所述活性炭与milli-q水的质量体积比为0.1:400至0.3:400，优选为0.2:400，所述质量体积比的单位为g/μl；所述活性炭与cacl2溶液的质量体积比为0.1:500至0.3:500，优选为0.2:500，所述质量体积比的单位为g/μl。
7、优选地，所述cacl2溶液中cacl2的浓度为15-25mm，优选为20mm，所述cacl2溶液中含有异丙醇，所述异丙醇在cacl2溶液中的体积百分比含量为15-25％，优选为20％。
8、优选地，所述活性炭处理尿液样本的时间为20-50min，优选为30min，然后将活性炭与尿液样本分离。
9、优选地，所述尿液样本加入装有mbth溶液的比色皿中的反应时间为0.5-1.5h，优选为1h，加入含有hcl的fecl3溶液的反应时间为0.5-1.5h，优选为1h。
10、优选地，比色皿中，所述mbth溶液与经活性炭处理的尿液样本的体积比为40:200至60:200，优选为50:200；所述含有hcl的fecl3溶液与经活性炭处理的尿液样本的体积比为40:200至60:200，优选为50:200；孔板中，活性炭处理后的尿液样本分为未稀释液和稀释液两种，所述稀释液是尿液样本与稀释剂按体积比1:1配制，所述稀释剂为异丙醇水溶液，所述异丙醇稀释剂在水中的体积百分比含量为5-20％，优选为10％，将活性炭处理后的尿液样本或稀释尿液样本加入孔板中后，再加入mbth溶液反应，所述mbth溶液与经活性炭处理的尿液样本或稀释尿液样本的体积比为20:140至40:140，优选为30:140，所述含有hcl的fecl3溶液与经活性炭处理的尿液样本的体积比为20:140至40:140，优选为30:140。
11、优选地，所述mbth溶液中mbth浓度为35-45mm，优选为40mm；所述含有hcl的fecl3溶液中hcl的浓度为80-120mm，优选为100mm，fecl3的浓度为70-90mm，优选为80mm。
12、上述基于比色法测定尿液中甲醛的方法可用于检测阿尔茨海默病早期生物标志物。
13、下面对本发明作进一步说明：
14、本发明开发了一种方便可靠的比色法，用于检测和量化尿液甲醛浓度。首先用一种合适的活性炭处理每份待测尿液样本，以除去所有主要干扰物质，同时保持尿液甲醛的最小流失，然后用试剂定量尿液甲醛，其中也可能包括一些其他低分子量醛类。所用试剂为3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙(mbth)和fecl3/hcl。此外，还确定了主要干扰物质的成份，它们是含有各种类型的二羟基苯的各类有机衍生物。在本发明的检测条件下，这些干扰物质的反应活性远超甲醛，产生棕红色物种，严重干扰甲醛测定。但这些干扰物质可被活性炭有效吸附除去。本发明初步数据显示，尿液甲醛含量与aβ蛋白特异性检测条检测到的尿液aβ蛋白含量之间存在一些良好的相关性，这有望使本发明的尿液甲醛检测成为一种方便且非侵入性的生物标志物，用于早期检测阿尔茨海默病。
1.一种基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述方法是在检测待测尿液样本前用活性炭处理尿液样本，然后再用比色法测定尿液样本中的甲醛。
2.如权利要求1所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述方法是在检测待测尿液样本前用活性炭处理尿液样本，然后将活性炭处理后的尿液样本加入装有mbth溶液的比色皿中反应，再向比色皿中加入含有hcl的fecl3溶液反应，读取吸光度a628并参照甲醛标准液定量尿液样本中的甲醛浓度；或者，所述方法是在检测待测尿液样本前用活性炭处理尿液样本，然后将活性炭处理后的尿液样本加入孔板中，向孔板中加入mbth溶液反应，再向孔板中加入含有hcl的fecl3溶液反应，读取吸光度a628并参照甲醛标准液定量尿液样本中的甲醛浓度；所述活性炭为动物或植物活性炭。
3.如权利要求2所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述活性炭与尿液样本的质量体积比为0.1:100至0.3:100，所述质量体积比的单位为g/μl。
4.如权利要求3所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述用活性炭处理尿液样本是向装有活性炭的容器中加入高纯水、cacl2溶液和尿液样本；所述活性炭与高纯水的质量体积比为0.1:400至0.3:400，所述质量体积比的单位为g/μl；所述活性炭与cacl2溶液的质量体积比为0.1:500至0.3:500，所述质量体积比的单位为g/μl。
5.如权利要求4所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述cacl2溶液中cacl2的浓度为15-25mm，所述cacl2溶液中含有异丙醇（isopropyl alcohol），所述异丙醇在cacl2溶液中的体积百分比含量为15-25%。
6.如权利要求2所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述活性炭处理尿液样本的时间为20-50min，然后将活性炭与尿液样本分离。
7.如权利要求2所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述尿液样本与mbth溶液的反应时间为0.5-1.5h，与含有hcl的fecl3溶液的反应时间为0.5-1.5h。
8.如权利要求2所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，比色皿中，所述mbth溶液与经活性炭处理的尿液样本的体积比为40:200至60:200，所述含有hcl的fecl3溶液与经活性炭处理的尿液样本的体积比为40:200至60:200；孔板中，活性炭处理后的尿液样本分为未稀释液和稀释液，所述稀释液是尿液样本与稀释剂按体积比1:1配制，所述稀释剂为异丙醇水溶液，所述异丙醇稀释剂在水中的体积百分比含量为5-20%。将活性炭处理后的尿液样本和稀释尿液样本分别加入孔板中后，再加入mbth溶液反应，所述mbth溶液与经活性炭处理的尿液样本或稀释尿液样本的体积比为20:140至40:140，所述含有hcl的fecl3溶液与经活性炭处理的尿液样本或稀释尿液样本的体积比为20:140至40:140。
9.如权利要求2所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法，其特征在于，所述mbth溶液中mbth浓度为35-45mm；所述含有hcl的fecl3溶液中hcl的浓度为80-120mm，fecl3的浓度为70-90mm。
10.如权利要求1至9任一项所述基于比色法测定尿液中甲醛的方法在阿尔茨海默病早期生物标志物检测中的应用。
