本发明涉及抗体领域。特别地，本发明涉及用于治疗涉及异常细胞的疾病的治疗性抗体(包括人抗体)的领域。此外，本发明涉及结合egfr和cmet的抗体，包括多特异性抗体，及其在结合egfr和cmet阳性细胞(特别是肿瘤细胞)中的用途。
背景技术：
1、表皮生长因子(epidermal growth factor，egf)受体(epidermal growth factorreceptor，egfr)是胞外蛋白配体的表皮生长因子家族(egf家族)的成员的细胞表面受体。egfr也称为erbb-1受体。该受体在过去已被赋予多种名称(egfr；erbb；erbb1；her1；pig61；mena)。在本发明中，在人中的erbb-1、egfr或her1的名称将可互换使用。egfr是erbb受体家族的成员，该家族是四个紧密相关的受体酪氨酸激酶的亚家族：erbb-1(egfr)、erbb-2(her2/c-neu；her2)、erbb-3(her 3)和erbb-4(her 4)。
2、egfr存在于细胞表面上，并且可通过其特异性配体(包括表皮生长因子和转化生长因子α(transforming growth factorα，tgfα))的结合而被激活。一旦被其生长因子配体激活之后，该受体可经历从无活性的大部分单体形式向活性同二聚体的转换。除了在配体结合之后形成同二聚体之外，egfr还可与erbb受体家族的另一个成员(例如erbb2)配对，以产生激活的异二聚体。二聚体在不存在配体结合的情况下也可形成，并且在配体结合之后可形成激活的egfr簇。
3、egfr二聚化刺激固有的胞内蛋白酪氨酸激酶(protein-tyrosine kinase，ptk)活性。该活性诱导了导致细胞增殖和分化的数种信号转导级联反应。egfr的激酶结构域可使与其复合的其他受体的酪氨酸残基交叉磷酸化(cross-phosphorylate)，并且可以以该方式自身激活。
4、在数种类型的癌症中已鉴定涉及egfr的突变。其是不断扩大的(expanding)抗癌治疗类别的靶标。这样的治疗包括egfr酪氨酸激酶抑制剂(egfr tyrosine kinaseinhibitor，egfr-tki)，例如用于肺癌的吉非替尼和厄洛替尼；以及抗体，例如用于结肠癌和头颈癌的西妥昔单抗和帕尼单抗。
5、西妥昔单抗和帕尼单抗是抑制受体的单克隆抗体。临床开发中的另一些单克隆抗体(monoclonal)是扎鲁目单抗(zalutumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)和马妥珠单抗(matuzumab)。单克隆抗体的目的在于主要通过阻断配体与受体的结合来阻断胞外配体诱导的受体的激活。在结合位点被阻断的情况下，信号诱导分子可无法有效地附着，并因此也无法激活下游信号传导。配体诱导的受体激活也可通过无活性受体构象的稳定性来抑制(马妥珠单抗)。
6、迄今为止，egfr靶向治疗已随着时间的推移而与产生治疗抗性相关。已经描述了针对egfr-tki抗性的多种机制。在患有晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，nsclc)的患者中，抗性机制包括继发突变(例如，t790m、c797s)的发生，替代信号传导(例如，met、hgf、axl、hh、igf-1r)的激活，异常下游途径(例如，akt突变、pten缺失)，egfr-tki介导的凋亡途径的损伤(例如，bcl2样11/bim缺失多态性)和组织学转化。尽管已经鉴定了一些抗性机制，但另一些仍有待鉴定。类似地，用egfr抗体治疗的结直肠癌患者也会随着时间的推移而产生抗性。这可通过kras突变的出现而发生。对于不具有kras突变的那些；met原癌基因的扩增可能与抗egfr治疗期间的获得性抗性相关(bardelli et al.,2013；cancer discov.jun；3(6):658-73.doi:10.1158/2159-8290.cd-12-0558)。肿瘤可以是从头(ab initio)抗性或在治疗期间产生抗性。在许多egfr阳性癌症中均见到针对egfr靶向治疗的抗性，并且在本领域中已证明需要更有效的egfr癌症治疗，所述egfr癌症治疗改善护理标准(standard of care)，并且在应对egfr靶向治疗抗性方面具有优异的能力。
7、met原癌基因受体酪氨酸激酶(met proto-oncogene,receptor tyrosinekinase，cmet)和肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，hgf)的失调已在多种肿瘤中报道。在数种癌症中已观察到配体驱动的cmet激活(ligand-driven cmet activation)。在肺癌、乳腺癌和多发性骨髓瘤中观察到血清和瘤内hgf升高(j.m.siegfried et al.,annthorac surg66,1915(1998)；p.c.ma et al.,anticancer res 23,49(2003)；b.e.elliottet al.can j physiol pharmacol 80,91(2002)；c.seidel,et al,med oncol 15,145(1998))。cmet的过表达、cmet扩增或突变已在多种癌症(例如结直肠癌、肺癌、胃癌和肾癌)中报道，并且可驱动配体非依赖性的受体激活(c.birchmeier et al,nat rev mol cellbiol 4,915(2003)；g.maulik et al.,cytokine growth factor rev 13,41(2002))。hgf的表达也与hgf/cmet信号传导途径的激活相关，并且也是在通过egfr靶向治疗选择下的肿瘤的逃逸机制之一。
8、cmet受体是通过将共同前体蛋白水解加工成单程(single-pass)、二硫键连接的α/β异二聚体而形成。cmet的胞外部分由三种结构域类型构成。n端区域折叠形成大臂板蛋白(large semaphorin)(sema)结构域，其涵盖整个α亚基和部分β亚基。丛状蛋白-臂板蛋白-整联蛋白(plexin–semaphorin–integrin，psi)结构域紧随sema结构域，并且包含四个二硫键。该结构域通过与免疫球蛋白样结构域相关的四个免疫球蛋白-丛状蛋白-转录(immunoglobulin–plexin–transcription，ipt)结构域与跨膜螺旋连接。在胞内，cmet受体包含酪氨酸激酶催化结构域，其侧翼是独特的近膜和羧基端序列(organ andtsao.therapeutic advances in medical oncology 3.1_suppl(2011):s7-s19，其通过引用整体并入本文中)。
9、cmet的配体，肝细胞生长因子(hgf；也称为离散因子(scatter factor))及其剪接同工型(nk1、nk2)是cmet受体的已知配体。hgf在1991年被鉴定为强效促分裂原(mitogen)/形态发生素(morphogen)。hgf/cmet信号传导途径在多种癌症的发生和进展中发挥重要作用。人癌症中hgf或cmet的失调和/或超激活与不良预后相关。cmet可通过过表达、扩增或突变来激活。激活可促进癌症的发生、进展、侵袭性生长和转移。可以以hgf相关和hgf非依赖性的方式激活cmet。hgf非依赖性激活发生在cmet过表达的情况下。在不存在配体的情况下，丰富的cmet还可触发(异)二聚化和胞内信号传导。其他配体看来不影响这样的cmet过表达细胞的功能。cmet扩增与cmet过表达相关，并已成为肿瘤亚型的生物标志物。
10、hgf在全身无处不在地表达，表明该生长因子是全身可用的细胞因子并且来自肿瘤间质。cmet激活的阳性旁分泌和/或自分泌环可导致cmet进一步表达。hgf特异性抗体利妥木单抗(rilotumumab)(amg102)被开发用于胃癌。i期和ii期试验看来很有希望，但是在预先计划的数据监测委员会对研究20070622进行安全审查之后，与顺铂和卡培他滨作为胃癌中的一线治疗的iii期研究(rilomet-2)被终止。
11、cmet/hgf信号转导与针对egfr靶向治疗之抗性的相关性刺激了应对抗性之方式的开发。迄今为止，基于抗体的方法包括抗hgf抗体；抗cmet或cmet抗体和尚未在临床上有效的抗cmet/egfr(在lee et al.,2015；immunotargets and therapy 4:35–44中综述)。cmet抗体onartuzumab(metmabtm)和emibetuzumab(ly-2875358)已在ii期临床试验中进行了评价。其中，在与egfr抑制剂厄洛替尼一起的组合治疗中，onartuzumab看来针对结直肠癌有效。然而，这些结果在随机iii期临床试验中可能无法重复。metmab是针对cmet的单价单克隆抗体(monovalent monoclonal antibody，mab)，可阻断hgf与cmet的结合以及随后的途径激活(jin et al.,2008cancer research vol.68:pp 4360-68)。
12、克服抗egfr、cmet和hgf免疫治疗的问题，本发明提供了新的双特异性抗体，其包含可结合表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合cmet原癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。
13、迄今为止，本领域中已经描述了某些双特异性egfr x cmet抗体。castoldi r.etal.(2013)描述了定名为mether1的双特异性egfr x cmet抗体，其具有抗体5d5(或metmab)的cmet结合位点和西妥昔单抗的egfr结合位点。双特异性抗体的固定egfr和cmet结合化学计量为2:1(参见补充图)。
14、us20140378664描述了在多种其他双特异性抗体中的cmet x egfr双特异性抗体。完整的双特异性抗体作为单一蛋白质产生，随后被蛋白水解切割。这两个vh/vl结构域作为单链fv片段产生。抗体的结合在胃癌细胞系中诱导cmet降解和akt磷酸化。moores et al(2016)描述了由根据eu编号在第405和409位具有突变的受控fab臂互换(controlled fab-arm exchange，cfae)产生的定名为jnj-61186372的双特异性cmet x egfr抗体，其可具有潜在的免疫原性。使用表达cmet配体hgf的肿瘤细胞系h1975的异种移植模型，显示jnj-61186372在体内具有活性。已知该肿瘤模型将取决于抗体的adcc活性(ahmed et al.,2015)。据报道，jnj-61186372具有对cmet的亲和力比对egfr的亲和力高约40倍的亲和力失衡(moores et al.(2016))，并且已知来源于扎鲁目单抗的抗egfr臂引起输注相关反应、皮肤病等问题。
15、ly3164530是双特异性cmet x egfr抗体，其包含作为与cmet结合抗体ly2875358的重链可变结构域融合的单链fv片段的西妥昔单抗的egfr结合结构域(emibetuzumab；kim和kim 2017)。其是所谓的包含针对每个抗原的两个结合位点的双可变结构域抗体。没有提供关于抗体的hgf抑制的数据。据报道，该抗体结合cmet和egfr并使其内化而没有激动活性。作者回顾了多种cmet、egfr和cmet x egfr的靶向治疗，并且得出的结论是，迄今为止这些抑制剂均未在临床试验中显示出显著的效力。
16、因此，需要新的双特异性cmet x egfr抗体，其包括可具有如本文中所描述的优异特征的那些。
技术实现思路
1、在一个方面中，本发明提供了双特异性抗体，其包含可结合人表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人met原癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。
2、双特异性抗体可包含共同轻链(common light chain)。第一和第二可变结构域优选地包含相同或基本上相同的(共同的)轻链可变区。所述共同轻链可变区可以是已知与经历重组的多样的人可变区基因区段良好配对的那些。更优选地，所述共同轻链优选地是由种系vk基因区段，优选o12/igvκ1-39*01可变区基因区段编码的可变区。优选的轻链可变区包含重排的igvκ1-39*01/igjκ1*01或igvκ1-39*01/igjκ5*01。cmet结合臂的轻链和egfr结合臂的轻链优选地是相同的(共同的)轻链。共同轻链优选地为与人轻链恒定区连接的重排κ轻链igvκ1-39*01/igjκ1*01或igvκ1-39*01/igjκ5*01。双特异性抗体可以是人抗体。双特异性抗体可以是全长抗体。其可具有可结合egfr的一个可变结构域和可结合cmet的一个可变结构域。在一个方面中，可结合人egfr的可变结构域也可有益地结合小鼠egfr和/或食蟹猴(cynomolgus)egfr。可结合人egfr的可变结构域可与人egfr的结构域iii结合。可结合cmet的可变结构域可阻断抗体5d5与cmet的结合。可结合cmet的可变结构域可阻断hgf与cmet的结合。cmet抗体的kd可比egfr抗体的kd小至少10倍。一个ch3结构域中第405和409位的氨基酸可与另一ch3结构域中相应位置处的氨基酸相同(eu编号)。
3、第一可变结构域可包含具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3的重链可变区
4、其中x1＝n或s；x2＝a或g；x3＝d或g；x4＝r、s或y；x5＝h、l或y；x6＝d或w并且x7＝d或g；在除了x1至x7之外的位置具有0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合。
5、第二可变结构域可包含重链可变区，所述重链可变区具有带有0至10个、优选0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合的seq id no：1至23的序列之一的氨基酸序列。
6、描述了双特异性抗体，其中
7、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝s；x5＝y；x6＝w并且x7＝g；
8、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝s；x5＝y；x6＝w并且x7＝g；
9、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝s；x5＝y；x6＝w并且x7＝g；
10、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w并且x7＝d；
11、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w并且x7＝d；
12、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w并且x7＝d；
13、x1＝n；x2＝g；x3＝g；x4＝y；x5＝l；x6＝d并且x7＝g；
14、x1＝n；x2＝a；x3＝g；x4＝y；x5＝l；x6＝d并且x7＝g；或
15、x1＝s；x2＝g；x3＝g；x4＝y；x5＝l；x6＝d并且x7＝g。在一些实施方案中
16、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w并且x7＝d；
17、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w并且x7＝d；或
18、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w并且x7＝d。
19、在一个优选的实施方案中，x3至x7＝drhwd，并且x1和x2为ng；sg或na。
20、描述了双特异性抗体，其中第二可变结构域的重链可变区包含具有0至10个、优选0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合的seq id no：1至3、7、8、10、13、15、16、17、21、22或23的序列之一的氨基酸序列。
21、本发明还提供了用于治疗患有肿瘤的对象的方法，所述方法包括向有此需要的个体施用如本文中所述的双特异性抗体。通常来说，个体是患有涉及异常细胞的疾病的个体，例如，个体可患有肿瘤。
22、本发明还提供了双特异性抗体，其包含可结合表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合met原癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域，其中第一可变结构域包含具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3的重链可变区，其中
23、x1＝n或s；x2＝a或g；x3＝d或g；x4＝r、s或y；x5＝h、l或y；x6＝d或w并且x7＝d或g；在除了x1至x7之外的位置具有0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合，并且其中第二可变结构域包含重链可变区，所述重链可变区具有带有0至10个、优选0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合的seq id no：1至23的序列之一的氨基酸序列。
24、第一可变结构域优选地包含具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayngntnyaqklqg和包含序列drhwhwwldafdy的cdr3的重链可变区，以及第二可变结构域优选地包含具有cdr1序列sysmn、cdr2序列wintytgdptyaqgftg和cdr3序列etyyydrggypfdp的重链可变区。
25、本发明还提供了如本文中公开的本发明的双特异性抗体，其用于治疗患有涉及异常细胞的疾病(例如肿瘤)的对象。
26、还提供了如本文中公开的本发明的双特异性抗体在制备用于治疗涉及异常细胞的疾病(例如肿瘤或癌症)的药物中的用途。
27、还提供了用于治疗患有肿瘤，优选地为egfr阳性肿瘤、cmet阳性肿瘤或egfr及cmet阳性肿瘤的对象的方法，所述方法包括向有此需要的个体施用双特异性抗体。
28、如本文中公开的本发明的抗体优选在伤口愈合测定中抑制hgf诱导的ebc1细胞的迁移。优选地，抑制比西妥昔单抗和metmab的组合更好。例如，优选通过在存在具有或不具有egf的hgf的情况下预防伤口闭合来实现抑制(hgf以15ng/ml存在，而egf在存在时以12.5ng/ml的量存在)。
29、当与tki组合使用时，本文中公开的本发明的抗体抑制hgf和egf/hgf诱导的egfrtki抗性肿瘤细胞系pc-9和hcc827的生长。tki优选地是吉非替尼。
30、本文中公开的本发明的抗体抑制hgf诱导的hgf应答细胞(优选egfr tki抗性肿瘤细胞系pc-9或hcc827)的生长。
31、本文中公开的本发明的抗体抑制egf诱导的egf应答细胞的生长，而不诱导与高亲和力二价egfr抗体相关的毒性(例如疹和泄泻)。这使得抗体理想上适合与具有自身毒性谱的tki组合。
32、本发明还包括药物组合物，其包含本文中公开的双特异性抗体。
33、本发明的抗体可用于治疗对用egfr酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗具有抗性，例如对厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼；厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼的类似物；或者其相应化合物和/或类似物中的一种或更多种的组合产生抗性的肿瘤。
34、根据本发明的治疗可还包括用egfr酪氨酸激酶抑制剂进行治疗，例如其中egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼。
35、因此，本发明的双特异性抗体可与egfr酪氨酸激酶抑制剂同时、依次或分开施用。
36、本发明还包括核酸分子或核酸分子组，其单独或一起编码本文中公开的双特异性抗体或其变体的重链或重链可变区。还提供了核酸分子或核酸分子组，其编码本文中公开的抗体。
37、在一个优选的实施方案中，重链包含igg1抗体，优选人igg1抗体的恒定区。所述igg1恒定区的ch2区可被改造以改变抗体的adcc和/或cdc活性，或者不改变抗体的adcc和/或cdc活性。在一个优选的实施方案中，所述改变导致增强的adcc和/或cdc活性。在一个优选的实施方案中，抗体的ch3区被改造以促进重链的异二聚化，所述重链包含结合egfr的第一重链和结合cmet的第二重链。
38、本发明还包括包含一种或更多种核酸分子的细胞，所述核酸分子单独或一起编码如本文中公开的双特异性抗体或其变体。还提供了使用所述细胞产生本文中公开的双特异性抗体或其变体的方法，优选地，所述方法还包括从细胞培养物中收获双特异性抗体或其变体。
39、本发明还包括包含本文中公开的双特异性抗体或其变体的细胞系统。
40、本发明还提了表达双特异性抗体和/或包含编码所述双特异性抗体的核酸分子的细胞。
41、本发明还包括如本文中公开的双特异性抗体，所述双特异性抗体还包含标记，优选用于体内成像的标记。
1.双特异性抗体，其包含可结合人表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人met原癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。
2.权利要求1所述的双特异性抗体，其包含共同轻链。
3.权利要求1或权利要求2所述的双特异性抗体，其是人抗体。
4.权利要求1至3中任一项所述的双特异性抗体，其是全长抗体。
5.权利要求1至4中任一项所述的双特异性抗体，其是抗egfr、抗cmet化学计量为1:1的igg1形式抗体。
6.权利要求1至5中任一项所述的双特异性抗体，其具有可结合egfr的一个可变结构域和可结合cmet的一个可变结构域。
7.权利要求1至6中任一项所述的双特异性抗体，其中所述可结合人egfr的可变结构域也可结合食蟹猴和小鼠egfr。
8.权利要求1至7中任一项所述的双特异性抗体，其中所述可结合人egfr的可变结构域与人egfr的结构域iii结合。
9.权利要求1至8中任一项所述的双特异性抗体，其中所述可结合cmet的可变结构域阻断抗体5d5与cmet的结合。
10.权利要求1至9中任一项所述的双特异性抗体，其中所述可结合cmet的可变结构域阻断hgf与cmet的结合。
11.权利要求1至10中任一项所述的双特异性抗体，其中一个ch3结构域中第405和409位的氨基酸与另一ch3结构域中相应位置处的氨基酸相同(eu编号)。
12.权利要求1至11中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一可变结构域包含具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3的重链可变区，其中
13.权利要求12所述的双特异性抗体，其中
14.权利要求12或权利要求13所述的双特异性抗体，其中
15.权利要求12至14中任一项所述的双特异性抗体，其中
16.权利要求1至15中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二可变结构域的重链可变区包含具有0至10个、优选0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合的seq id no:1至3、7、8、10、13、15、16、17、21、22或23的序列之一的氨基酸序列。
17.权利要求1至16中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二可变结构域的重链可变区包含具有0至10个、优选0至5个氨基酸插入、缺失、替换、添加或其组合的seq id no:2、7、8、10、13或23的序列之一的氨基酸序列。
18.权利要求1至17中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一可变结构域包含具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayngntnyaqklqg和包含序列drhwhwwlda的cdr3的重链可变区，并且其中所述第二可变结构域包含具有cdr1序列sysmn、cdr2序列wintytgdptyaqgftg和cdr3序列etyyydrggypfdp的重链可变区。
19.权利要求1至17中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一可变结构域包含具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisaynantnyaqklqg和包含所述序列drhwhwwlda的cdr3的重链可变区，并且其中所述第二可变结构域包含具有cdr1序列tysmn、cdr2序列wintytgdptyaqgftg和包含序列etyfydrggypfdp的cdr3的重链可变区。
20.权利要求1至19中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一和第二可变结构域包含共同轻链，优选图9b的轻链。
21.权利要求1至20中任一项所述的抗体，所述抗体抑制hgf诱导的hgf生长应答细胞的生长。
22.权利要求1至21中任一项所述的抗体，所述抗体抑制egf诱导的egf生长应答细胞的生长。
23.权利要求1至22中任一项所述的抗体，其用于治疗涉及异常细胞的疾病。
24.权利要求1至23中任一项所述的双特异性抗体，其用于治疗患有肿瘤的对象。
25.权利要求24所述应用的双特异性抗体，其中所述肿瘤是egfr阳性肿瘤、cmet阳性肿瘤或egfr及cmet阳性肿瘤。
26.权利要求24或权利要求25所述应用的双特异性抗体，其中所述肿瘤是乳腺癌；结肠癌；胰腺癌；胃癌；卵巢癌；结直肠癌；头颈癌；肺癌，包括非小细胞肺癌；或膀胱癌。
27.权利要求24至26中任一项所述应用的双特异性抗体，其中所述肿瘤对用egfr酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗具有抗性。
28.权利要求27所述的双特异性抗体，其中所述egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼；厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼的类似物；或者其相应化合物和/或类似物中一种或更多种的组合。
29.权利要求28所述应用的双特异性抗体，其中所述egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼。
30.权利要求23至29中任一项所述应用的双特异性抗体，其中所述治疗还包括用egfr酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗。
31.权利要求30所述应用的双特异性抗体，其中所述egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼。
32.权利要求30或31所述应用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体与所述egfr酪氨酸激酶抑制剂同时、依次或分开施用。
33.权利要求1至22中任一项所述的双特异性抗体，其用于治疗涉及异常细胞的疾病，其中所述双特异性抗体与egfr酪氨酸激酶抑制剂同时、依次或分开施用。
34.治疗患有肿瘤的对象的方法，所述方法包括向有此需要的个体施用权利要求1至22中任一项所述的双特异性抗体。
35.权利要求34所述的方法，其中所述个体患有涉及异常细胞的疾病。
36.权利要求34或权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤是egfr阳性肿瘤、cmet阳性肿瘤或egfr及cmet阳性肿瘤。
37.权利要求34至36中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是乳腺癌；结肠癌；胰腺癌；胃癌；卵巢癌；结直肠癌；头颈癌；肺癌，包括非小细胞肺癌；或膀胱癌。
38.权利要求34至37中任一项所述的方法，其中所述肿瘤对用egfr酪氨酸激酶抑制剂进行的治疗具有抗性。
39.权利要求38所述的方法，其中所述egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼；厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼的类似物；或者其相应化合物和/或类似物中一种或更多种的组合。
40.权利要求39所述的方法，其中所述egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼。
41.权利要求34至40中任一项所述的方法，其中所述治疗还包括向所述有此需要的个体施用egfr酪氨酸激酶抑制剂。
42.权利要求41所述的方法，其中所述egfr酪氨酸激酶抑制剂是厄洛替尼。
43.权利要求41或权利要求42所述的方法，其中所述双特异性抗体与所述egfr酪氨酸激酶抑制剂同时、依次或分开施用。
44.权利要求1至22中任一项所述的双特异性抗体，其用于制备用于治疗涉及异常细胞的疾病的药物。
45.抗体，其包含能够结合人egfr、小鼠egfr和食蟹猴egfr的胞外部分的可变结构域。
