背景技术：
1、提高非人类哺乳动物诸如牛、马或其他有蹄类动物的繁殖性能的能力可对主人具有显著益处。这可以通过提高此类非人类哺乳动物的能育性和/或繁殖力来实现。目前，基于使用雌二醇和其他激素诸如gnrh(促性腺激素释放激素)、lh(黄体生成素)、fsh(卵泡刺激素)或助孕素(诸如孕酮)来模拟在目标物种中存在的天然或接近天然水平的激素，提出了几种方法或方案来提高繁殖性能。这些方案中的一些方案包括在雌性中使排卵同步的步骤以促进卵泡以同步方式的刺激、生长和排卵，从而允许固定时间的人工受孕，避免发情期检测的必要性。这些所谓的同步方案在世界各地广泛用于商业乳牛群和肉牛群。
2、用于使卵泡波出现同步的最常见的处理方法中的一种处理方法涉及使用不同类型的雌激素。然而，这种类固醇激素在世界上许多地方不能使用，并且已经开发出替代方法来控制卵泡期和黄体期，目的是例如在雌二醇无法获得的国家中改进胚胎供体母牛的超数排卵过程。一种似乎是有前景的选择的方法是在gnrh诱导的排卵后新的卵泡波出现时发起fsh处理。此外，因为目前可用的fsh产品的半衰期通常较短(大约6小时)，所以超数排卵方案涉及在4天至5天内每天两次fsh处理，这相当耗时、费力且容易出错。因此，标准超数排卵方法是基于在卵泡波出现时多次注射fsh，卵泡波出现通常发生在自然发生的发情期后8天至12天。这种方法被称为“基于发情期的”，并且虽然在胚胎产生方面是有效的，但受发情期周期的阶段的制约，并且需要发情期检测。后来的研究已经发现，与允许从受孕到排卵的更理想间隔的现代同步方案相比，在“基于发情期的”方案中，受精率明显更低。
3、已经进行了研究以确定延长fsh刺激方案是否可以增加排卵反应。作者似乎得出结论，将fsh注射周期从连续4天延长至连续7天可维持卵泡生长并使更多的卵泡获取排卵的能力。正在进行更多的研究以在不同的牛品种中确认这种假说。
4、在另一报道的方案中，在3天而不是4天期间用fsh处理母牛，并且在第4天最后2次注射由2次ecg(马绒毛膜促性腺激素)注射替代(barros等人，2008)。这种处理似乎增加了胚胎的数量，尽管处理时间仍然很长。此外，ecg是相当长的分子，并且已经被描述为当重复使用时诱导抗体形成，并且可能限制这些类型的方案的广泛/频繁使用。
5、在减少fsh注射次数的尝试中，已经开发出替代方案，在该替代方案中，将fsh包埋在缓释聚合物(透明质酸)中。使用这种缓释制剂，在“基于发情期的”超数排卵方案后进行单次注射。然而，作者得出结论，透明质酸太粘稠并且单次肌内注射导致较低的超数排卵反应(bo等人，2010)。
6、ep2134165提出一种用于使用单链fsh增加繁殖的方法，在单链fsh中，两个亚基通过肽接头共价连接，以5μg-150μg的单剂量施用该单链fsh。
7、wo2014/076231报道了使用50μg或100μg的单剂量的rbfsh类似物来提高繁殖性能。
技术实现思路
1、在一个方面，本发明涉及用于使用一次性卵泡刺激素(“fsh”)施用在家牛母牛中诱导、引起或刺激超数排卵(“so”)的方法和组合物及用途。本发明还涉及用于提高家牛母牛的受孕率的此类方法和组合物及用途。
2、在另一方面，本发明涉及用于使用一次性卵泡刺激素(“fsh”)施用在家牛母牛中增加或改进卵子采集(“opu”)的方法和组合物及用途。本发明还涉及此类方法和组合物及在家牛母牛的人工受孕或体外受精方法中的用途。
3、通过进行各种试验和研究，本发明人已经发现在家牛母牛中，使用特定剂量范围和计划表的fsh可以改进排卵或卵母细胞产生。具体地，通过根据各种方案和在不同类型的母牛中测试fsh的功效，已经发现反应因动物类型和预期的效果类型而异。更具体地，在家牛母牛中，与先前在其他类型的母牛中进行的报道相反，惊讶地发现，单次施用剂量介于200μg和400μg之间，最优选介于250μg和350μg之间的fsh可获得最有效的超数排卵。鉴于之前关于剂量为约50μg时功效最佳的报道，此类发现是令人惊讶的。此外，本发明人还惊讶地发现，fsh剂量为约100μg至200μg时获得允许或改进家牛母牛卵子采集的最佳功效，因此该剂量不同于适于so的剂量。因此，令人惊讶地，在母牛的亚型之间存在可变性，并且同一亚型的母牛在so或opu中的最佳表现存在可变性。因此，从现有技术中不能推断出鉴定出用于在家牛中诱导so或opu的最有效的条件。
4、在一个方面，本发明源于以下发现：通过以介于200μg和400μg，特别是介于300μg和400μg之间的剂量单次施用fsh，可以在家牛母牛中诱导高超数排卵。鉴于早期关于使用低得多的剂量(例如，50μg)功效最佳的报道，以及鉴于由本发明人获得的进一步数据，这一发现是令人惊讶的，该进一步数据显示使用约100μg的单剂量在家牛母牛中实现了最有效的opu过程。
5、在另一方面，本发明源于以下发现：通过以介于100μg和200μg之间的剂量单次施用fsh，可以在家牛母牛中诱导或实现高opu。鉴于早期关于未注射fsh的opu的报道，以及鉴于由本发明人获得的进一步数据，这一发现是令人惊讶的，该进一步数据显示用约200μg-400μg的单剂量在家牛母牛中诱导最有效的so。
6、本发明的一个具体目的涉及fsh或包含fsh的组合物在在家牛母牛中诱导、引起或刺激超数排卵中的用途，其中在发情周期期间以介于200μg和400μg之间，特别是介于300μg和400μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次所述fsh。
7、本发明的另一目的在于一种用于在家牛母牛中诱导或刺激或增加超数排卵的方法，包括在发情周期期间以介于200μg和400μg之间，特别是介于300μg和400μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次fsh。
8、本发明的另一目的在于一种在用于在家牛母牛中诱导或刺激或增加超数排卵的方法中使用的fsh，所述方法包括在发情周期期间以介于200μg和400μg之间，特别是介于300μg和400μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次所述fsh。
9、本发明的另一具体目的涉及fsh或包含fsh的组合物在家牛母牛中进行卵子采集的方法中的用途，其中以介于100μg和200μg之间的剂量对所述家牛母牛施用所述fsh。优选地，fsh仅施用一次，之后进行卵母细胞收集。
10、本发明的另一优选的目的涉及fsh或包含fsh的组合物在家牛母牛中进行卵子采集的方法中的用途，其中在发情周期期间以介于100μg和200μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次所述fsh。优选地，该方法还包括收集卵母细胞的后续步骤。
11、本发明的另一目的在于一种用于在家牛母牛中进行卵子采集的方法，包括以介于100μg和200μg之间的剂量对所述家牛母牛施用fsh。优选地，fsh仅施用一次，之后进行卵母细胞收集。
12、本发明的另一优选的目的在于一种用于在家牛母牛中进行卵子采集的方法，包括在发情周期期间以介于100μg和200μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次fsh。优选地，该方法还包括收集卵母细胞的后续步骤。
13、本发明的另一目的在于在用于在家牛母牛中进行卵子采集的方法中使用的fsh，所述方法包括以介于100μg和200μg之间的剂量对所述家牛母牛施用所述fsh。优选地，fsh仅施用一次，之后进行卵母细胞收集。
14、本发明的另一优选的目的在于在用于在家牛母牛中进行卵子采集的方法中使用的fsh，所述方法包括在发情周期期间以介于100μg和200μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次所述fsh。优选地，该方法还包括收集卵母细胞的后续步骤。
15、优选地，fsh是重组fsh(rfsh)。
16、如将进一步公开的，在一个优选的实施方案中，fsh包含通过肽接头彼此共价连接的牛fshα亚基和牛fshβ亚基。
17、本发明可用于任何家牛母牛，特别是任何成熟的家牛母牛，诸如幼小的成年动物或老龄的动物、乳牛或肉用母牛。
1.卵泡刺激素(fsh)或包含fsh的组合物在家牛母牛中诱导或刺激超数排卵中的用途，其中所述fsh包含通过肽接头彼此共价连接的牛fshα亚基和牛fshβ亚基，并且其中在发情周期期间以介于200μg和400μg之间的剂量对所述家牛母牛施用一次所述fsh。
2.根据权利要求1所述的用途，其中以介于250μg和350μg之间，优选260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、310μg、320μg、330μg或340μg的剂量施用所述fsh。
3.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中以300μg的剂量施用所述fsh。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中通过全身给药，优选通过注射，更优选通过肌内注射施用所述fsh。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述α亚基是包含与seq id no:1至少95％相同的氨基酸序列的多肽，并且/或者所述β亚基是包含与seq id no:2至少95％相同的氨基酸序列的多肽。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述fsh包含与氨基酸序列seq idno:3具有至少95％同一性，优选至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述fsh包含seq id no:3、基本上由seq id no:3组成或由seq id no:3组成。
8.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中在发情周期的第7天和第12天之间，优选在发情周期的第7天、第8天、第9天、第10天、第11天或第12天，甚至更优选在第8天、第9天、第10天或第11天，甚至更优选在第9天或第10天施用一次所述fsh。
9.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中对所述母牛进行同步。
10.根据前述权利要求中任一项所述的用途，所述用途还包括使所述母牛受孕。
11.根据权利要求10所述的用途，其中在接近排卵时，优选在fsh施用后5天至7天进行受孕。
12.根据前述权利要求中任一项所述的用途，所述用途包括：
13.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中将所述fsh配制成具有一种或几种赋形剂或载剂的组合物。
14.一种在家牛母牛中提高妊娠率或受孕成功率的方法，其中所述方法包括在发情周期期间对所述母牛施用介于200μg和400μg之间的单剂量的fsh。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述方法包括在发情周期期间对所述母牛施用介于250μg和350μg之间，优选260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、310μg、320μg、330μg或340μg的单剂量。
16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述方法包括在发情周期期间对所述母牛施用300μg的单剂量。
