背景技术：
1、人类免疫缺陷病毒(hiv)的包膜蛋白对于细胞感染过程至关重要。在hiv感染的第一阶段，病毒膜经历与靶细胞膜的融合过程。这里，涉及病毒包膜蛋白，即gp41和gp120，它们两者均源自被蛋白水解切割成这两个片段的前体蛋白gp160。较大的亚基gp120是表面相关的受体结合亚基，并且gp41形成跨膜亚基，其在病毒进入靶细胞期间参与膜融合。关于病毒与其靶细胞的假设结合机制，gp120/gp41与宿主细胞膜蛋白cd4和其他共受体的接触引发了一系列构象变化，导致在gp41中形成发夹三聚体结构(root等人，science 2001,291,884-888)。
2、感染hiv的患者通常会产生针对gp41和其他hiv蛋白的抗体，因此至少在过去二十年里，gp41一直是用于检测针对hiv抗体的体外诊断免疫测定的重要成分。应用hiv gp41的野生型序列的免疫测定已显示出高度特异性。这意味着含有hiv抗体的样品通常会被正确鉴定为阳性。
3、然而，仍然存在大量的假阳性样品，这意味着测定结果表明含有针对hiv的抗体，尽管实际上样品呈阴性且不含有hiv抗体。这些假阳性不仅在常规实验室诊断环境中可能变得至关重要，因为这些结果会导致假警报、密集的重新测试和确认测试程序。另外，在血库环境中应特别避免假阳性结果。在这里，每天在高通量诊断分析仪上对来自献血的数千份样品进行筛查，并且阳性结果意味着来自患者的全血献血量可能会被丢弃。
4、scholz等人(j.mol.biol.2005,345,1229-1241)描述了来自hiv-1的gp41多肽序列和来自hiv-2的对应gp36，它们已被工程化，使得易于聚集的多肽可以以可溶形式表达。然而，当这些多肽在用于检测hiv抗体的体外诊断免疫测定中用作抗原时，并不能完全避免假阳性结果。
5、wo2001/044286公开了一种人工设计的具有gp41元件的五螺旋蛋白，其可用于抑制人类细胞中的hiv感染。该抑制剂包含源自gp41的n末端螺旋结构域的三段以及该分子的c末端螺旋结构域的两段。然而，这种基因工程化构建体(也由root等人描述，同上)缺乏天然分子的许多结构域和许多抗原表位，并且它尤其不含所谓的环基序，已知环基序含有特定的免疫原性表位。五螺旋蛋白折叠成稳定的结构，并与对应于hiv gp41的c肽区的肽结合，从而抑制人类细胞的hiv感染。还公开了五螺旋蛋白可用作药物筛选或抗体筛选工具。另外，还公开了包含gp41序列的六螺旋蛋白。这种六螺旋蛋白包含通过接头连接的hivgp41的三个n螺旋和三个c螺旋，可以用作筛选抑制膜融合的药物的阴性对照。
6、虽然gp41变体已在现有技术中广泛描述，但这些出版物没有涉及在用于检测hiv抗体的体外诊断免疫测定中避免假阳性结果的gp41抗原的鉴定。
7、作为本发明的基础的技术问题可以被看作是提供满足前述需要、尽可能避免确定的问题的工具和方法。该技术问题通过在权利要求中表征并在下文描述的实施方案来解决。
技术实现思路
1、在第一方面，本发明涉及一种适合于检测经分离的样品中针对hiv gp41的抗体的组合物，所述组合物包含至少两种单独的hiv gp41抗原，其中第一hiv抗原包含seq id no:1并且其中第二hiv gp41抗原包含seq id no:2或3中的至少一者。特别地，所述抗原不包含另外的hiv特异性氨基酸序列。
2、在第二方面，本发明涉及一种产生hiv gp41抗原的组合物的方法，所述方法对于所述抗原中的每一种包括以下步骤
3、a)培养用表达载体转化的宿主细胞，特别是大肠杆菌细胞，表达载体包含可操作地连接的编码本发明的第一方面的抗原之一的重组dna分子，
4、b)表达所述抗原，以及
5、c)纯化所述抗原，以及
6、d)将通过步骤a)至c)获得的包含seq id no.1的hiv gp41抗原与通过步骤a)至c)获得的包含seq id no:2或3中的至少一者的至少一种hiv gp41抗原混合以形成hiv gp41抗原的组合物。
7、在第三方面，本发明涉及一种用于检测经分离的样品中对hiv具有特异性的抗体的方法，其中将根据本发明的第一方面的组合物，或者通过本发明的第二方面的方法获得的hiv gp41抗原组合物用作针对所述抗hiv抗体的捕获试剂和/或结合配偶体。
8、在第四方面，本发明涉及一种用于检测经分离的样品中对hiv具有特异性的抗体的方法，所述方法包括
9、a)通过将体液样品与本发明的第一方面的hiv gp41抗原组合物或通过本发明的第二方面的方法获得的hiv gp41抗原组合物混合来形成免疫反应混合物
10、b)将免疫反应混合物维持足以允许体液样品中存在的针对所述hiv gp41抗原组合物的抗体与作为所述hiv gp41抗原组合物的一部分的hiv gp41抗原发生免疫反应以形成免疫反应产物的时间段；以及
11、c)检测任何所述免疫反应产物的存在和/或浓度。
12、在第五方面，本发明涉及一种鉴定患者过去是否曾暴露于hiv感染的方法，该方法包括
13、a)通过将患者的体液样品与本发明的第一方面的hiv gp41抗原组合物或通过本发明的第二方面的方法获得的hiv gp41抗原组合物混合来形成免疫反应混合物
14、b)将免疫反应混合物维持足以允许所述体液样品中存在的针对所述hiv gp41抗原组合物的抗体与作为所述hiv gp41抗原组合物的一部分的hiv gp41抗原发生免疫反应以形成免疫反应产物的时间段；以及
15、c)检测任何所述免疫反应产物的存在和/或不存在，
16、其中免疫反应产物的存在指示患者过去曾暴露于hiv感染。
17、在第六方面，本发明涉及本发明的第一方面的hiv gp41抗原组合物或通过本发明的第二方面的方法获得的hiv gp41抗原组合物在用于检测抗hiv抗体的高通量体外诊断测试中的用途。
18、在第七方面，本发明涉及一种用于检测抗hiv病毒抗体的试剂盒，其包含本发明的第一方面的hiv gp41抗原组合物或通过本发明的第二方面的方法获得的hiv gp41抗原组合物。
1.一种适合于检测经分离的样品中针对hiv gp41的抗体的组合物，所述组合物包含至少两种单独的hiv gp41抗原，其中第一hiv抗原包含seq id no.1，并且其中第二hiv gp41抗原包含seq id no:2和/或3，并且其中所述单独的hiv gp41抗原中的每一种不包含另外的hiv特异性氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述hiv gp41抗原中的至少一种与至少一个伴侣蛋白融合。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述伴侣蛋白选自由slyd、slpa、fkpa和skp组成的组。
4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原中的每一种是可溶的且具有免疫反应性。
5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述hiv gp41抗原包含seq id no1和2或seq id no 1和3。
6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述hiv gp41抗原包含seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3。
7.一种产生根据权利要求1至6中任一项所述的hiv gp41抗原的组合物的方法，所述方法对于所述抗原中的每一种包括以下步骤
8.一种用于检测经分离的样品中对hiv gp41具有特异性的抗体的方法，其中将根据权利要求1至6中任一项所述的hiv gp41抗原的组合物用作针对所述抗hiv抗体的捕获试剂和/或结合配偶体。
9.一种用于检测经分离的样品中对hiv gp41具有特异性的抗体的方法，所述方法包括
10.一种鉴定患者过去是否曾暴露于hiv感染的方法，所述方法包括
11.根据权利要求1至6中任一项所述的hiv gp41抗原组合物用于检测经分离的样品中的抗hiv gp41抗体的用途。
12.一种用于检测抗hiv抗体的试剂盒，其包括根据权利要求1至6中任一项所述的hivgp41抗原组合物。
13.根据权利要求12所述的试剂盒，其在单独容器中或在单个容器单元的分离区室中至少包括用亲和素或链霉亲和素包被的微粒，以及根据权利要求1至5所述的hiv gp41抗原组合物，其中所述单独的hiv gp41抗原中的每一种与生物素共价偶联。
14.根据权利要求13所述的试剂盒，其在另外的单独容器中或在单个容器的另外的分离区室中包括根据权利要求1至5中任一项所述的hiv gp41抗原组合物，其中所述另外的单独容器或另外的分离区室中的所述单独的hiv gp41抗原中的每一种与可检测标记共价偶联。
