本公开尤其涉及与长效和具有改进的药代动力学的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)有关的组合物和方法。以电子方式提交的文本文件的描述以电子方式随同提交的文本文件的内容是以引用的方式整体并入本文中：序列表的计算机可读格式副本(文件名称：pnr-009pc 127114-5009-pc sequence listing.xml”；记录日期：2023年3月23日；文件大小：20,480字节)。
背景技术：
1、集落刺激因子csf是指四种糖蛋白的家族，所述糖蛋白控制并协调广泛分散的骨髓细胞沉积物的细胞产生。这些包括：粒细胞-巨噬细胞csf(gm-csf)、粒细胞集落csf(g-csf)、巨噬细胞集落csf(m-csf)和多能集落刺激因子(il-3)。这些淋巴因子可诱导骨髓中存在的祖细胞分化成特定类型的成熟血细胞。由祖细胞产生的成熟血细胞的特定类型取决于存在的csf类型。参见metcalfd.cancer immunol res.2013,1(6):351-356。
2、gm-csf是调控造血细胞的产生、迁移、增殖、分化和功能的血液生长因子。回应于炎症刺激，包括t淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和内皮细胞在内的各种细胞类型释放gm-csf。gm-csf然后激活并增强嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞的产生和存活。原生gm-csf通常在它调节造血祖细胞的体外增殖、分化和存活的作用位点附近产生，但仅以皮摩尔浓度(10-10至10-12m)存在于循环血液中。参见alexander ws.int rev immunol.1998,16:651-682；gasson jc.blood.1991,77:1131-1145；shannon mf等人crit revimmunol.1997,17:301-323，barreda dr等人dev comp immunol.2004,28:509-554，和metcalf d.immunol cell biology.1987,65:35-43。
3、人gm-csf(hgm-csf)被合成为具有17个氨基酸的信号肽的144个氨基酸残基的前体蛋白。对这种前体蛋白进行加工，产生127个氨基酸的成熟蛋白，其预测分子质量为14.4kda。它具有两个由于糖基化和唾液酸化而作为15-30kda的宽条带迁移的二硫键联。n-连接聚糖位于asn27和asn37处，并且o-连接糖基化的多个潜在位点存在于ser5、ser7、ser9和ser10处，但这些位点处的聚糖结构范围尚未明确确定。已观察到gm-csf的糖基化模式影响其活性、受体结合、免疫原性和半衰期。参见lee f.等人proc natl acad sci usabiochem.1985.82:360-4364；miyatake s.等人embo j.1985.4:2561-2568。cebon j等人jbiol.chem.1991.265,4483-4491；zhang q等人proc.natl.acad.sci.2014,2885-2890。
4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhu gm-csf)已被fda批准与化学疗法组合用于治疗中性粒细胞减少症、血质不调和如白血病的恶性肿瘤。在临床上，用于治疗化学疗法后的中性粒细胞减少症和再生障碍性贫血的gm-csf极大地降低了与骨髓移植相关的感染风险。它在髓系白血病治疗和作为疫苗佐剂方面的效用也已得到充分证实。参见dorrrt.clin therapeutics.1993.15(1):19-29；armitage jo.blood 1998,92:4491-4508；kovacic jc等人j mol cell cardiol.2007,42:19-33；jacobs pp等人microbial cellfactories 2010,9:93。
5、尽管存在五类异源蛋白质产生平台，包括细菌、酵母、植物、昆虫细胞和哺乳动物细胞，但目前市售的生物药物中超过50％是在哺乳动物细胞系中产生的。这部分地是由于其余四类无法用类人寡糖修饰糖蛋白导致的。这是很重要的，因为蛋白质结合的聚糖影响循环半衰期、组织分布、生物活性和免疫原性。
6、gm-csf表达系统影响gm-csf的药代动力学特性、生物活性和临床毒性。在临床上，gm-csf已经在中国仓鼠卵巢细胞(cho-gm，瑞拉司亭(regramostim))、大肠杆菌(大肠杆菌-gm，莫拉司亭(molgramostim))或酵母(酵母-gm，沙格司亭)中产生。参见dorrrt.clintherapeutics.1993.15(1):19-29；walsh g.nat biotechnol.2006,24:769-776；jacobspp等人nat protoc.2009,4:58-70；jacobs pp等人microbial cell factories 2010,9:93；walsh g.nat biotechnol.2018,36(12):1136-1145。在gm-csf的制造过程中，存在四种主要的gm-csf同种型/种类：“高糖基化”(约50kda)、n-和n-+o-糖基化(约20kda)、o-糖基化(约16kda)和非糖基化(约15kda)种类。糖基化gm-csf经由使用酵母(沙格司亭)或中国仓鼠卵巢(cho)细胞(瑞拉司亭)技术的重组技术获得，所述重组技术产生复杂的糖型混合物。人细胞源性gm-csf也同样被异质糖基化，然而，当在大肠杆菌中制造时，gm-csf保持非糖基化。聚糖异质性反映了cho细胞翻译后糖基化缺乏特异性。参见dorr rt.clinicaltherapeutics/第15卷,第1期,1993；zhang q等人pnas.2014.111(8):2885-2890。
7、当聚糖被添加至天冬酰胺(asn)或精氨酸(arg)侧链的氮上时发生n-糖基化，而当聚糖被添加至丝氨酸(ser)或苏氨酸(thr)或酪氨酸(tyr)氨基酸的羟基氧侧链中时发生o-糖基化。天冬酰胺残基通常需要asn-xxx-ser/thr/cys的共有序列，其中xxx可以是除脯氨酸以外的任何氨基酸，以进行n-糖基化。沙格司亭的rhu gm-csf蛋白质序列含有两条共有序列，asn-leu-ser(nls)和asn-glu-thr(net)，其中所述蛋白质可以潜在地糖基化。在沙格司亭的制造过程中，两个n-糖基化位点asn27和asn37在发酵罐中存在的一些gm-csf种类中被糖基化。thr39(或ser39或cys39)残基是使asn27或asn37处糖基化成为可能的重要锚点。在天冬酰胺残基37处连接有n-寡糖的种类被称为“高糖基化”种类(30-100kda)，因为这些糖型含有多达数百个甘露糖残基。高甘露糖基化仅发生在n37处。
8、沙格司亭的最终产品(leukine)由n-糖基化和o-糖基化糖型连同非糖基化糖型组成。因此，沙格司亭在它的糖型谱中具有异质性，这在它的整个许可史中非常一致。沙格司亭中近一半的gm-csf蛋白是非糖基化的，并且略少于三分之一是完全n-糖基化的。大多数(如果不是全部)n-糖基化种类也是o-糖基化的。高度分支的n-连接寡糖结构覆盖分子的大部分，包括h1和h5α-螺旋，而不阻碍受体结合位点以及一些h6α-螺旋和c末端无规卷曲。尽管重组gm-csf的碳水化合物组分基于细胞来源而不同，但受体结合或体外和体内生物活性不需要糖基化。酵母rhu gm-csf和非糖基化大肠杆菌源性rhu gm-csf具有通过受体亲和力和细胞增殖比活性两者测量的可相当的比活性。参见urdal和park,1988；metcalfd.cancer 1990:65:2185-2195。
9、人体中的内源性蛋白质在体内以不同速率降解，所述速率可能因它们的功能而广泛变化。例如，血红蛋白持续红细胞的整个生命周期并且组蛋白具有以年量度的半衰期，而如鸟氨酸脱羧酶(11min半衰期)的其他蛋白质具有非常快的降解速率。参见thomas ecreighton(1993)."chapter 10-degradation".proteins:structures and molecularproperties(第2版).w h freeman and company.第463-473页.isbn 0-7167-2317-4。在真核生物中，细胞内间隙中的大多数短寿命蛋白质都被泛素-蛋白酶体途径(upp)降解。参见kybuczkova l等人j cell mol med.2014.18:947-961。upp在蛋白质的加工和降解中的细胞内稳态中起着核心作用，包括调控细胞周期进程、细胞凋亡和dna修复的那些蛋白质。参见heinemeyer w等人j biol chem.1997.272:25200-25209。溶酶体还去除细胞质中和细胞外不需要的蛋白质。来自细胞外部的材料通过内吞作用被吸收，而来自细胞内部的材料通过自噬作用被消化。参见settembre c等人nature reviews molecular cellbiology.2013.14(5):283-96。研究表明，gm-csf具有可以从50延长至85min的半衰期。参见cebon等人blood.1988.72:1340-1347；stagg等人2004。天然存在的和重组的gm-csf的体内生物活性在很大程度上取决于它们的生物利用度。参见dorr rt.clinical therapeutics/第15卷,第1期,1993。
10、据报道，糖基化会稳定多种蛋白质。研究发现，一些带电末端聚糖(例如唾液酸)对调控糖蛋白的循环半衰期至关重要。也有一些报告指出，糖基化对于维持蛋白质构象稳定性以抵抗ph变性至关重要，例如在g-csf(granocyte)中。参见nissen c.eur jcancer.1994；30a(增刊3):s12-14；ono m.eur j cancer.1994；30a(增刊3):s7-11。也可以人为地将增加的ph稳定性工程改造至蛋白质中，例如通过青霉素g酰化酶的糖化。当与非糖化蛋白质相比时，这种蛋白质的糖化形式的半衰期在ph 3时增加13倍并且在ph 10时增加7倍。参见masarova j,biotechnol appl biochem.2001；34(第2部分):127-133。研究还表明，糖基化程度和聚糖大小都可以增加蛋白质的失活半衰期，但随着聚糖大小的增加，动力学稳定程度显著提高。参见solárj,al-azzam w,griebenow k.biotechnol bioeng.2006；94(6):1072-1079；sola rj,cell mol life sci.2007；64(16):2133-2152；sola rj等人jpharm sci.2009.98(4):1223-1245。
11、治疗蛋白(生物治疗或生物)在人体中的生物利用度也可能受到药物施用途径影响。参见dorr rt,clinical therapeutics/第15卷,第1期,1993。在静脉内(iv)施用后，几乎所有的治疗蛋白都立即可用，但接着随着时间推移，可能被血浆中存在的蛋白酶降解。在一些情况下，皮下(sc)施用通过维持高血浆浓度持续较长时段而延长了具有短消除半衰期的蛋白质的暴露，并且与iv施用相比，耐受性可能更好。因此，sc施用后生物治疗剂的吸收可能受到它在细胞外基质(ecm)中的命运影响，包括不完全生物利用度的可能性。参见haleg等人blood.2004.104(4):948-955。将沙格司亭中存在的不同同种型转运至全身循环中可能有利于不同的途径，因为它们的分子大小不同。
12、gm-csf表达系统可以影响药代动力学参数，其中糖基化程度影响gm-csf半衰期、分布和消除。使用大鼠模型报告了gm-csf糖基化程度与它的分布、清除和活性之间的关系。研究发现，体外测量的gm-csf的比活性在所述蛋白质的最大、最完全糖基化形式中相对于较小、较少糖基化的分子显著降低。单次静脉内团注后，大鼠血流中gm-csf的有效半衰期显示出因添加n-连接的碳水化合物而显著增加。大鼠中gm-csf的清除遵循双相动力学，并且碳水化合物修饰延长了第一阶段或c阶段。参见donohue re等人cold spring harborlabs.1986.51:685-692和dorr rt clinical therapeutics.1993.15(1):19-29。另一种影响药代动力学参数的方式是使靶标蛋白(如gm-csf)与白蛋白缀合。这可以利用白蛋白的长半衰期和靶向能力来增强靶标蛋白的生物稳定性。参见chuang y-m等人cell molimmunol.2020。
13、研究还表明，抗血清白蛋白结构域抗体会延长短寿命药物的半衰期。参见holt lj等人protein eng des sel.2008.21(5):283-8。然而，常规抗体的大小较大，可以阻碍靶标蛋白或药物在体内递送至细胞。纳米抗体(15kda)和基于纳米抗体的人重链抗体(75kda)可以克服这些限制。骆驼科动物天然产生仅由重链构成的抗体，其中靶标识别模块由单个可变结构域(vhh或nb)构成。纳米抗体的有利特征包括它们的大小较小、溶解度高、稳定性高并且体内组织穿透性优异。参见bannas p等人front immunol.2017。分子(例如抗肿瘤纳米抗体)的体内半衰期可以通过将一个或多个抗肿瘤纳米抗体与白蛋白特异性纳米抗体融合来延长。参见roovers rc等人int j cancer.2011.129(8):2013-24；zhu y等人sci rep(2017)7(1):2602；bannas p等人front immunol.2017。按理说，增加基于gm-csf的疗法的半衰期和循环时间可能减少剂量并简化向患者施用的药物的治疗方案。这可能对患者护理质量、患者依从性和降低医疗护理费用产生积极影响。
14、仍然需要具有改进的药代动力学、增加的半衰期和增加的循环时间的gm-csf分子。
技术实现思路
1、因此，本公开涉及gm-csf的长效形式，相对于野生型gm-csf或沙格司亭，所述长效形式尤其提供改进的药代动力学和药效学。
2、在多个方面，提供了一种融合或嵌合蛋白，所述蛋白质包含重组人gm-csf蛋白、接头和人源化单结构域抗体。
3、在多个方面，本发明组合物的重组人gm-csf蛋白包含与seq id no:1或seq idno:2具有至少约97％同一性并且任选地在位置n37或其对应位置处具有取代或缺失的氨基酸序列，例如在位置n37或其对应位置处的氨基酸可以被取代为极性和中性电荷的亲水性氨基酸，例如谷氨酰胺(q)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、脯氨酸(p)和半胱氨酸(c)。
4、在多个方面，本发明组合物的人源化单结构域抗体包含具有三个cdr(例如，如imgt命名法或kabat命名法所定义)的重链。
5、imgt命名法：
6、cdr-h1：getldyya(seq id no:12)
7、cdr-h2：iassggst(seq id no:13)
8、cdr-h3：aaavlecrtvvrgydy(seq id no:14)
9、kabat cdr定义：
10、cdr-h1：etldyyaig(seq id no:15)
11、cdr-h2：iassggstnyadsvkg(seq id no:16)
12、cdr-h3：avlecrtvvrgydy(seq id no:17)。
13、在多个方面，本发明组合物的人源化单结构域抗体包含具有seq id no:12、seqid no:13和seq id no:14的三个cdr的重链，或具有一个或多个取代或缺失(例如1个，或2个，或3个，或4个)的变体。在多个方面，本发明组合物的人源化单结构域抗体包含具有seqid no:15、seq id no:16和seq id no:17的三个cdr的重链，或具有一个或多个取代或缺失(例如1个，或2个，或3个，或4个)的变体。在多个方面，本发明组合物的人源化单结构域抗体包含与seq id no:3具有至少约70％，或至少约75％，或至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％，或至少约98％，或至少约99％同一性，并且在非人骆驼抗体框架内具有取代或缺失以使所述非人抗体能够人源化的氨基酸序列。所述cdr如imgt命名法进行定义。cdr也可以用kabat命名法定义。
14、imgt命名法：
15、cdr-h1：getldyya(seq id no:12)
16、cdr-h2：iassggst(seq id no:13)
17、cdr-h3：aaavlecrtvvrgydy(seq id no:14)
18、kabat cdr定义：
19、cdr-h1：etldyyaig(seq id no:15)
20、cdr-h2：iassggstnyadsvkg(seq id no:16)
21、cdr-h3：avlecrtvvrgydy(seq id no:17)
22、在多个方面，所述融合或嵌合蛋白(包含重组人gm-csf蛋白的蛋白质)通过接头与人源化单结构域抗体融合。
23、在实施方案中，本发明组合物包含多种分子形式，例如非糖基化、o-糖基化、n-糖基化和/或n+o糖基化形式。在实施方案中，本发明融合或嵌合蛋白大体上不含高糖基化，例如高甘露糖基化形式。
24、在实施方案中，还提供了编码本发明融合或嵌合蛋白(例如密码子优化的序列)的核酸分子。在实施方案中，还提供了表达编码本发明融合或嵌合蛋白的核酸分子的人宿主细胞，任选地是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。在实施方案中，还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明融合或嵌合蛋白和药学上可接受的赋形剂或载体。
25、在多个方面，提供了一种治疗正在进行或已经进行癌症疗法或者正在进行或已经进行骨髓移植或已经急性暴露于骨髓抑制剂量的辐射(例如，急性辐射病或急性辐射综合征(ars))和/或患有辐射复合损伤(rci)的患者或受试者的方法；所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本文所述的药物组合物。
26、在多个方面，提供了一种治疗神经退行性疾病(例如但不限于阿尔茨海默病、帕金森病、进行性核上性麻痹(psp)、多系统萎缩(msa)、路易体痴呆、帕金森病痴呆癫痫、中风、亨廷顿舞蹈症、脑缺氧、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症(als)和周围神经病)的方法，并且有需要的受试者已经用本文所述的融合或嵌合蛋白或其药物组合物进行了治疗。
27、在多个方面，提供了一种治疗真菌感染(例如但不限于任选地选自念珠菌病和/或毛霉菌病感染的侵袭性真菌感染)的方法，并且有需要的受试者已经用本文所述的融合或嵌合蛋白或其药物组合物进行了治疗。
28、在多个方面，提供了一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述自身免疫性疾病任选地选自克罗恩氏病和/或溃疡性结肠炎(uc)、肠易激疾病(ibd)和/或其他gi炎症性疾病，有需要的患者或受试者已经用本文所述的融合或嵌合蛋白或其药物组合物进行了治疗。
29、在实施方案中，本发明融合或嵌合蛋白在功能上类似于沙格司亭。在实施方案中，如与重组人gm-csf相比，所述融合或嵌合蛋白具有增强的药代动力学。在实施方案中，如与重组人gm-csf相比，所述融合或嵌合蛋白具有增强的半衰期。在实施方案中，如与重组人gm-csf相比，所述融合或嵌合蛋白具有增强的药效学。
1.一种包含融合或嵌合蛋白的组合物，所述融合或嵌合蛋白包含重组人粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(gm-csf)蛋白、接头和人源化单结构域抗体。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述重组人gm-csf蛋白包含与seq id no:1或seqid no:2具有至少约97％同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述重组人gm-csf蛋白包含与seq id no:1或seqid no:2具有至少约97％同一性并且在位置n37或其对应位置处具有取代或缺失的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的组合物，其中在位置n37或其对应位置处的氨基酸是极性和中性电荷的亲水性氨基酸。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述极性和中性电荷的亲水性氨基酸选自谷氨酰胺(q)、丝氨酸(s)和苏氨酸(t)。
6.如权利要求5所述的组合物，其中所述极性和中性电荷的亲水性氨基酸选自谷氨酰胺(q)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、脯氨酸(p)和半胱氨酸(c)。
7.如权利要求6所述的组合物，其中所述极性和中性电荷的亲水性氨基酸是谷氨酰胺(q)。
8.如权利要求1所述的组合物，其中所述人源化单结构域抗体是重链抗体的可变片段(vhh)。
9.如权利要求8所述的组合物，其中所述vhh对人血清白蛋白具有特异性。
10.如权利要求8或9所述的组合物，其中所述vhh包含与seq id no:3具有至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％同一性的氨基酸序列，和/或包含选自(i)seqid no:12-14或其变体或(ii)seq id no:15-17或其变体的三个cdr。
11.如权利要求8-10中任一项所述的组合物，其中相对于非人源化vhh，所述vhh还包含框架区内的取代或缺失。
12.如权利要求1-11中任一项所述的组合物，其中所述重组人gm-csf通过接头与所述单结构域抗体连接。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述接头是柔性接头。
14.如权利要求13所述的组合物，其中所述柔性接头大体上包含甘氨酸和丝氨酸残基。
15.如权利要求13或14所述的组合物，其中所述柔性接头包含至少约20个，或至少约30个，或至少约40个，或至少约50个，或至少约60个氨基酸残基。
16.如权利要求13-15中任一项所述的组合物，其中所述柔性接头包含(gly4ser)n，其中n是约1至约12。
17.如权利要求12所述的组合物，其中所述接头是铰链-ch2-ch3 fc结构域。
18.如权利要求17所述的组合物，其中所述铰链-ch2-ch3 fc结构域源自人igg。
19.如权利要求18所述的组合物，其中所述铰链-ch2-ch3 fc结构域源自人igg1、igg2或igg4。
20.如权利要求12所述的组合物，其中所述接头包含选自seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6的氨基酸序列，或与seq id no:6具有至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％同一性的氨基酸序列，或具有约5个，或约4个，或约3个，或约2个，或约1个取代或缺失的seq id no:4或seq id no:5的氨基酸序列。
21.如权利要求20所述的组合物，其中所述接头包含与seq id no:6具有至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％同一性的氨基酸序列。
22.如权利要求1-21中任一项所述的组合物，其中所述vhh结构域定位于所述融合或嵌合蛋白的n端。
23.如权利要求1-21中任一项所述的组合物，其中所述gm-csf定位于所述融合或嵌合蛋白的n端。
24.如权利要求1-23中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白包含选自seqid no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10和seq id.no:11的氨基酸序列，或与seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10或seq id no:11具有至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％同一性的氨基酸序列。
25.如权利要求1-24中任一项所述的组合物，其中所述组合物结合和/或激活粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体(gm-csf-r-α或csf2r)。
26.如权利要求25所述的组合物，其中所述gm-csf-r-α在细胞表面上表达。
27.如权利要求26所述的组合物，其中所述细胞是造血祖细胞。
28.如权利要求27所述的组合物，其中所述造血祖细胞是免疫细胞。
29.如权利要求27所述的组合物，其中所述造血祖细胞受到照射。
30.如权利要求1-29中任一项所述的组合物，其中所述组合物结合人、小鼠和恒河猴血清白蛋白。
31.如权利要求30所述的组合物，其中所述组合物结合人血清白蛋白(hsa)。
32.如权利要求31所述的组合物，其中所述hsa存在于人血浆中。
33.如权利要求32所述的组合物，其中所述组合物大体上不与hsa竞争与新生儿fc受体(fcrn)的结合。
34.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白是可溶的。
35.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中融合或嵌合蛋白表现出与沙格司亭大体上相似的功能。
36.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述重组人gm-csf包含多种分子形式。
37.如权利要求36所述的组合物，其中所述分子形式选自非糖基化、o-糖基化、n-糖基化和n+o糖基化形式。
38.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述重组人gm-csf大体上不含高甘露糖基化形式。
39.一种核酸分子，所述核酸分子编码如前述权利要求中任一项所述的融合或嵌合蛋白或其片段。
40.如权利要求39所述的核酸，其中所述核酸分子具有密码子优化的序列或其组分。
41.一种人宿主细胞，所述人宿主细胞表达如权利要求39或40所述的核酸分子。
42.如权利要求41所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。
43.一种非人宿主细胞，所述非人宿主细胞表达如权利要求39或40所述的核酸分子。
44.如权利要求43所述的非人宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞。
45.如权利要求44所述的非人宿主细胞，其中所述酵母细胞是非甲基营养型酵母细胞。
46.如权利要求45所述的非人宿主细胞，其中所述宿主细胞是酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞。
47.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-38中任一项所述的组合物和药学上可接受的赋形剂或载体。
48.一种治疗正在进行或已经进行癌症疗法或者正在进行或已经进行骨髓移植或已经急性暴露于骨髓抑制剂量的辐射(例如h-ars)和/或患有辐射复合损伤(rci)的患者或受试者的方法；所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
49.如权利要求48所述的方法，其中通过调节造血祖细胞的克隆扩增、存活、分化和激活状态来治疗所述患者。
50.如权利要求48所述的方法，其中通过调节骨髓单核细胞谱系、通过促进巨核细胞和红系祖细胞的增殖来治疗所述患者。
51.如权利要求48所述的方法，其中通过调节造血祖细胞、通过刺激嗜中性粒细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的存活、增殖和激活来治疗所述患者。
52.如权利要求48所述的方法，其中在骨髓移植后，通过调节造血祖细胞、通过刺激嗜中性粒细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的存活、增殖和激活来治疗所述患者。
53.一种疗法方法，所述疗法方法包括
54.一种用于治疗冠状病毒感染的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述冠状病毒是乙型冠状病毒，任选地选自严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)、sars-cov、中东呼吸综合征-冠状病毒(mers-cov)、hcov-hku1和hcov-oc43。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述冠状病毒是甲型冠状病毒，任选地选自hcov-nl63和hcov-229e。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述冠状病毒是sars-co v-2。
58.如权利要求56所述的方法，其中所述患者患有covid-19。
59.一种用于治疗流感病毒感染的方法，所述流感病毒任选地选自a型、b型、c型和d型，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
60.一种治疗病毒性出血热的方法，所述病毒性出血热由任选地选自沙粒病毒、黄病毒、丝状病毒、汉坦病毒、内罗病毒、phenuvirus的一组病毒引起，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
61.一种治疗肺部感染的方法，其中所述肺部感染是由鼠疫杆菌(yersinia pestis)感染引起的肺鼠疫，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
62.如权利要求54-61中任一项所述的方法，其中所述患者患有发烧、咳嗽、气短、腹泻、上呼吸道症状、下呼吸道症状、肺炎和急性呼吸综合征中的一种或多种。
63.如权利要求54-62中任一项所述的方法，其中所述患者缺氧。
64.如权利要求54-63中任一项所述的方法，其中所述患者患有呼吸窘迫。
65.如权利要求54-64中任一项所述的方法，其中所述方法预防或减轻所述患者的急性呼吸窘迫综合征(ards)的发展。
66.如权利要求54-65中任一项所述的方法，其中所述方法改进所述患者的氧合。
67.如权利要求54-66中任一项所述的方法，其中所述方法预防或减轻所述患者从呼吸窘迫到细胞因子失衡的转变。
68.如权利要求54-67中任一项所述的方法，其中所述方法逆转或预防细胞因子风暴。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述方法逆转或预防肺部或全身的细胞因子风暴。
70.如权利要求68或69所述的方法，其中所述细胞因子风暴选自全身炎症反应综合征、细胞因子释放综合征、巨噬细胞激活综合征和噬血细胞性淋巴组织细胞增生症中的一种或多种。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述方法逆转或预防一种或多种炎症性细胞因子的过量产生。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述炎症性细胞因子是il-6、il-1、il-1受体拮抗剂(il-1ra)、il-2ra、il-10、il-18、tnfα、干扰素-γ、cxcl10和ccl7中的一种或多种。
73.如权利要求54-72中任一项所述的方法，其中所述方法导致所述患者的病毒或细菌负荷相对于治疗前降低。
74.一种治疗和/或改善由于暴露于化学战剂而引起的症状的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述化学战剂是硫芥子气(sm/hd)和/或氯气。
76.如权利要求74或75所述的方法，其中所述患者的所述暴露症状的特征是骨髓抑制。
77.如权利要求74-76中任一项所述的方法，其中所述组合物引起包括骨髓抑制在内的化学暴露症状的改善。
78.一种治疗和/或改善由神经退行性疾病引起的症状的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述神经退行性疾病选自阿尔茨海默病、帕金森病、进行性核上性麻痹(psp)、多系统萎缩(msa)、路易体痴呆、帕金森病痴呆癫痫、中风、亨廷顿舞蹈病、脑缺氧、多发性硬化症、肌萎缩侧索硬化症(als)和周围神经病。
80.如权利要求78或79所述的方法，其中所述神经退行性疾病的特征是氧化应激、神经突完整性丧失、细胞凋亡、神经元丢失或/和炎症反应。
81.如权利要求78-80中任一项所述的方法，其中所述神经退行性疾病与认知障碍有关。
82.如权利要求78-81中任一项所述的方法，其中所述组合物引发疾病改善反应。
83.如权利要求78-82中任一项所述的方法，其中所述组合物暂时或永久减缓认知衰退。
84.如权利要求78-83中任一项所述的方法，其中所述组合物引起神经退行性疾病症状的改善。
85.如权利要求78-84中任一项所述的方法，其中所述组合物减缓所述神经退行性疾病的发作和/或发展。
86.一种治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物，其中所述自身免疫性疾病任选地选自克罗恩氏病和/或溃疡性结肠炎(uc)和/或肠易激疾病(ibd)。
87.如权利要求86所述的方法，其中所述组合物恢复效应子和调控免疫功能的平衡。
88.一种治疗和/或改善由胱天蛋白酶募集结构域家族成员9(card9)缺陷引起的症状的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
89.如权利要求88所述的方法，其中所述方法治疗侵袭性真菌感染。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述侵袭性真菌感染选自念珠菌病、毛霉菌病、侵袭性曲霉病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病、蛙粪霉、耳霉、隐球菌性脑膜炎、组织胞浆菌病。
91.如权利要求90所述的方法，其中所述念珠菌病是食管念珠菌病、口咽念珠菌病、侵袭性念珠菌病和/或念珠菌血症。
92.如权利要求90所述的方法，其中所述毛霉菌病是皮肤毛霉菌病。
93.如权利要求88-92中任一项所述的方法，其中所述组合物用作抗真菌疗法的辅助疗法。
94.如权利要求88-93中任一项所述的方法，其中所述组合物有助于减少和/或降低各种组织中的真菌负荷。
95.一种治疗和/或有助于伤口愈合和/或皮肤病学疾患的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
96.如权利要求95所述的方法，其中所述慢性伤口任选地选自麻风、腿部溃疡和/或各种其他原因的无痛伤。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述方法促进组织重塑和再生。
98.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
99.如权利要求98所述的方法，其中所述组合物引起针对肿瘤细胞的免疫反应的免疫调节或激活。
100.如权利要求98或99所述的方法，其中所述组合物增强或恢复选自由以下组成的组的一种或多种细胞的活性或激活：t细胞、t辅助细胞、细胞毒性t细胞、树突细胞、nk细胞、巨噬细胞、抗肿瘤巨噬细胞和b细胞。
101.如权利要求98-100所述的方法，其中所述组合物治疗、改善和/或预防癌症生长、存活、转移、上皮间质转化、免疫逃逸或复发。
102.一种治疗脓毒症或败血症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
103.如权利要求98-101所述的方法，其中所述组合物平衡和/或调控炎症和急性期反应，并降低发病率和死亡率。
104.一种治疗免疫性血小板减少症(itp)或低血小板计数的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的如权利要求47所述的药物组合物。
105.如权利要求103所述的方法，其中所述组合物加强或增强血小板细胞计数和/或逆转血小板减少症。
106.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述组合物促进重组gm-csf通过内皮毛细血管(血脑屏障，bbb)的递送以用于中枢神经系统(cns)治疗学。
107.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白是通过转染哺乳动物细胞、任选地cho细胞产生的，其中如与沙格司亭相比，所述融合或嵌合蛋白显示出增加的半衰期。
108.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中如与沙格司亭相比，所述融合或嵌合蛋白表现出增强的药代动力学。
109.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白表现出与沙格司亭大体上相似的功能。
110.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白显著增加嗜中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、总wbc和血小板的水平、细胞计数和/或量。
111.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白显著增加血小板的水平、细胞计数和/或量。
112.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白是通过转染哺乳动物细胞、任选地cho细胞产生的，其中如与沙格司亭相比，所述嵌合蛋白显示出改进的药效学。
113.如权利要求1-38中任一项所述的组合物，其中所述融合或嵌合蛋白是通过转染哺乳动物细胞、任选地cho细胞产生的，其中如与沙格司亭相比，所述融合或嵌合蛋白显示出相似的功能以及改进的药代动力学和药效学。
