本申请涉及核酸或蛋白原位检测的，尤其涉及一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复体系及修复方法。
背景技术：
1、福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)样本在制备过程中会使用甲醛固定，甲醛会介导蛋白质-蛋白质、蛋白质-dna、蛋白质-rna之间产生可逆的共价交联，形成稳定的交联结构，从而能够较大程度地将细胞或离体组织保留在其原先的状态，使得样本能长期保存。然而，正是这种氨基酸关键侧链的交联，可能会选择性地掩蔽不同抗原的不同表位，并使蛋白质分子的整体三维结构发生细微的改变。除了诱导交联外，甲醛还会破坏氢键和其他影响蛋白质结构的静电相互作用，进一步增加靶点表位发生重大改变的可能性。同时，由于抗体大多为处于天然构象状态的蛋白质，可能无法有效地结合到具有这种结构转化的目标多肽上，造成抗原掩蔽。因此，在进行原位杂交或者其他免疫相关实验时选用合适的方式进行抗原修复就显得至为关键。
2、蛋白酶修复是常用的靶标修复手段之一，通过酶切除掩盖抗原表位的多肽链，使其结合位点得以暴露。目前，常使用低浓度胃蛋白酶作为ffpe样本靶标修复的蛋白酶，但因低浓度的胃蛋白酶修复能力有限，通常需要延长胃蛋白酶修复时间或同时额外增加热修复来进一步来解除多种分子之间的交联，该过程操作复杂且热修复温度较难准确控制。
3、此外，若增加胃蛋白酶浓度进行修复，则极容易过度修复，导致靶标破坏或者损坏组织形态，而高浓度胃蛋白酶需在一定酸性环境下才能溶解或达到较适的ph，通常需要采用一定浓度的盐酸作为稀释剂，即整体修复流程较为繁杂，且修复效果不稳定。
技术实现思路
1、本申请提供一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复体系及修复方法。该方法适用于组织或细胞上原位rna或蛋白检测的靶标修复。相关技术中ffpe组织抗原修复中常用胃蛋白酶，对温度、时间和浓度较为敏感，修复效果难以控制，且操作过程繁复；而本申请提供的修复方法操作简便，修复效果更佳稳定，且在普通配置的实验室中即可进行。
2、不同类型的组织中，结缔组织上的弹性蛋白通常会产生较强的自发荧光背景，严重干扰信号成像检出，采用弹性蛋白酶对该类组织进行靶标修复，可达到消除自发背景、增强信噪比的目的。此外，蛋白酶k作为一种温度及ph适用范围极广的酶，可以水解多种多肽键，起到充分暴露待测靶标的作用。在前述基础上，本申请开发了在室温下即可进行，且能够适配多数ffpe样本的靶标修复体系。
3、第一方面，本申请提供一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复体系，采用如下技术方案：
4、一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复体系，所述靶标修复体系包括1-50u/ml蛋白酶k和1-10mg/ml弹性蛋白酶。
5、可选地，所述蛋白酶k的浓度为0.625-5u/ml。
6、可选地，所述蛋白酶k的浓度为1.25-2.5u/ml。
7、在一个具体的实施方式中，所述蛋白酶k的浓度为0.625u/ml、1.25u/ml、2.5u/ml、5u/ml。
8、在一些具体的实施方式中，所述蛋白酶k的浓度为0.625-1.25u/ml、0.625-2.5u/ml、5u/ml、1.25-5u/ml、2.5-5u/ml。
9、可选地，所述弹性蛋白酶的浓度为0.125-1mg/ml。
10、可选地，弹性蛋白酶的浓度为0.25-0.5mg/ml。
11、在一个具体的实施方式中，所述弹性蛋白酶的浓度为0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml。
12、在一些具体的实施方式中，所述弹性蛋白酶的浓度为0.125-0.25mg/ml、0.125-0.5mg/ml、0.25-1mg/ml、0.5-1mg/ml。
13、第二方面，本申请提供了一种靶标修复体系的制备方法，采用如下技术方案：
14、一种靶标修复体系的制备方法，具体包括以下步骤：将1-50u/ml蛋白酶k和1-10mg/ml弹性蛋白酶溶解于ph 7.6的tris-edta溶液中制得20×母液。
15、第三方面，本申请提供了一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复方法。该靶标修复方法利用上述靶标修复体系完成。
16、可选地，所述样本类型为ffpe样本。
17、可选地，将所述靶标修复体系加入所述样本中修复5-10min。
18、可选地，所述修复方法在室温下进行。
19、本申请中的靶标修复体系为由25u/ml蛋白酶k和5mg/ml弹性蛋白酶溶解于ph7.6的tris-edta溶液中，组成20×母液，而后根据ffpe组织类型和制备方案稀释成1×或2×的工作液，对待修复样本在室温25℃的条件下，修复5-10min即可达到良好的靶标修复效果，提升rna原位检测的检出效率。
20、第四方面，本申请提供了一种上述靶标修复体系在用于核酸或蛋白原位检测样本前处理中的应用。
21、综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：
22、(1)与现有技术相比，本申请的靶标修复体系，综合了多种蛋白酶对不同氨基酸化学键的切割能力，从而可适配不同的组织类型，达到更好的修复效果。
23、(2)利用本申请的靶标修复体系的修复方法在室温环境即可进行，无需提供额外的供温设备，而现有技术中胃蛋白酶则需要。
24、(3)本申请的修复方法能在更短的时间5-10min达到解交联的目的，修复靶标，而现有技术中胃蛋白酶则需30-45min。
25、(4)不同的工作液浓度及时间对组织的作用更温和，不易破坏组织形态的完整性。
1.一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复体系，其特征在于，所述靶标修复体系包括1-50u/ml蛋白酶k和1-10mg/ml弹性蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的靶标修复体系，其特征在于，所述蛋白酶k的浓度为0.625-5u/ml；
3.根据权利要求1所述的靶标修复体系，其特征在于，所述弹性蛋白酶的浓度为0.125-1mg/ml；
4. 一种权利要求1-3中任一项所述的靶标修复体系的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：将1-50u/ml蛋白酶k和1-10mg/ml弹性蛋白酶溶解于ph 7.6的tris-edta溶液中制得20×母液。
5.一种用于核酸或蛋白原位检测的样本靶标修复方法，其特征在于，所述靶标修复方法利用权利要求1-3中任一项所述的靶标修复体系完成。
6.根据权利要求5所述的靶标修复方法，其特征在于，所述样本类型为ffpe样本。
7.根据权利要求1所述的靶标修复方法，其特征在于，将所述靶标修复体系加入所述样本中修复5-10min。
8.根据权利要求1所述的靶标修复方法，其特征在于，所述修复方法在室温下进行。
9.一种权利要求1-3中任一项所述的靶标修复体系在用于核酸或蛋白原位检测样本前处理中的应用。
